衡，之后用外加磁场置于塑料管侧壁将磁性颗粒分离，3s后弃去上清液，然后加入3mL含有20.0ng/mL黄酮类药物(木犀草素、槲皮素、山奈酚)的尿液样品，摇动lOmin，加外加磁场，弃去上清尿液，富集的分析物用含有2%醋酸的乙腈从磁性萃取剂上洗脱，洗脱液用氮气吹干并用甲醇复溶，过滤后用液相色谱进行分析。
[0051]实施例8
[0052]将2.4g三氯化铁、3.4g乙酸钠和3.4g丙烯酸钠加入到由33.75ml乙二醇和11.25ml 二乙二醇组成的混合溶剂中，超声Ih得到黑色的混合溶液，将其转入聚四氟乙烯材质的反应釜中，密封，置于马弗炉中反应12h，反应结束后冷却至室温，用甲醇和水洗数次，于60°C真空干燥至恒重，备用；
[0053]将5.0mg上述制得的Fe3O4磁性纳米颗粒、20.0mg氯代十六烷基吡啶(CPC)和2ml0.02M pH = 7.0的磷酸钠缓冲溶液依次加入到塑料管中，混合液超声分散5min，再平衡静置lOmin，之后用外加磁场置于塑料管侧壁将磁性颗粒分离，2s后弃去上清液，然后加入2mL含有20.0ng/mL黄酮类药物(木犀草素、槲皮素、山奈酹)的尿液样品，摇动2min,加夕卜加磁场，弃去上清尿液，富集的分析物用含有I %醋酸的甲醇从磁性萃取剂上洗脱，洗脱液用氮气吹干并用甲醇复溶，过滤后用液相色谱进行分析。
[0054]实施例9
[0055]将2.4g三氯化铁、3.4g乙酸钠和3.4g丙烯酸钠加入到由33.75ml乙二醇和
11.25ml 二乙二醇组成的混合溶剂中，超声Ih得到黑色的混合溶液，将其转入聚四氟乙烯材质的反应釜中，密封，置于马弗炉中反应10h，反应结束后冷却至室温，用甲醇和水洗数次，于60°C真空干燥至恒重，备用；
[0056]将4.0mg上述制得的Fe3O4磁性纳米颗粒、3.0mg氯化1-十二烧基_3_甲基咪唑(C12mimCl)和2ml0.02M pH = 8.8的磷酸钾缓冲溶液依次加入到塑料管中，混合液超声分散lOmin，再静置2min使其平衡，之后用外加磁场置于塑料管侧壁将磁性颗粒分离，2s后弃去上清液，然后加入2mL含有20.0ng/mL黄酮类药物(木犀草素、槲皮素、山奈酚)的尿液样品，摇动2min，加外加磁场，弃去上清尿液，富集的分析物用含有2%醋酸的甲醇从磁性萃取剂上洗脱，洗脱液用氮气吹干并用甲醇复溶，过滤后用液相色谱进行分析。
[0057]实施例10
[0058]将2.4g三氯化铁、3.4g乙酸钠和3.4g丙烯酸钠加入到由33.75ml乙二醇和
11.25ml 二乙二醇组成的混合溶剂中，超声Ih得到黑色的混合溶液，将其转入聚四氟乙烯材质的反应釜中，密封，置于马弗炉中反应4h，反应结束后冷却至室温，用甲醇和水洗数次，于60°C真空干燥至恒重，备用；
[0059]将4.0mg上述制得的Fe3O4磁性纳米颗粒、3.0mg氯化1-十二烧基_3_甲基咪唑(C12mimCl)和2ml0.02M pH = 7.0的磷酸钾缓冲溶液依次加入到塑料管中，混合液超声分散5min，再静置1min使其平衡，之后用外加磁场置于塑料管侧壁将磁性颗粒分离，2s后弃去上清液，然后加入2mL含有20.0nf/mL黄酮类药物(木犀草素、槲皮素、山奈酚)的尿液样品，摇动lOmin，加外加磁场，弃去上清尿液，富集的分析物用含有2%醋酸的乙腈从磁性萃取剂上洗脱，洗脱液用氮气吹干并用甲醇复溶，过滤后用液相色谱进行分析。
【主权项】
1.一种基于Fe3O4磁性纳米颗粒的混合半胶束固相萃取剂的制备方法，其特征在于制备步骤为: a.基于Fe3O4磁性纳米颗粒的混合半胶束固相萃取剂的制备:一、溶剂热法制备Fe3O4磁性纳米颗粒:三氯化铁、乙酸钠和丙烯酸钠加入到由乙二醇和二乙二醇组成的混合溶剂中，超声Ih得到黑色的混合溶液，将其转入聚四氟乙烯材质的反应釜中，密封，置于马弗炉中反应，反应结束后冷却至室温，用甲醇和水洗数次，于60°C真空干燥至恒重，备用；二、制备混合半胶束固相萃取剂:将步骤一制备得到的Fe3O4磁性纳米颗粒加入到一定pH值的缓冲溶液中，然后加入一定量的表面活性剂或离子液体，超声后静置，磁场分离除去上清液，得到固相萃取剂。 b.基于Fe3O4OS12磁性纳米颗粒的混合半胶束固相萃取剂的制备:一、溶剂热法制备Fe3O4磁性纳米颗粒:三氯化铁、乙酸钠和丙烯酸钠加入到由乙二醇和二乙二醇组成的混合溶剂中，超声Ih得到黑色的混合溶液，将其转入聚四氟乙烯材质的反应釜中，密封，置于马弗炉中反应，反应结束后冷却至室温，用甲醇和水洗数次，于60°C真空干燥至恒重，备用；二、Fe3O4OS12磁性纳米颗粒的制备:将步骤二中制备的Fe3O4磁性纳米颗粒加入到乙醇和去离子水中，超声，然后依次加入一定量的氨水和正硅酸乙酯，搅拌下反应，反应结束后加外置磁场分离产物，用甲醇和水洗数次，于60°C真空干燥至恒重，备用；三、制备混合半胶束固相萃取剂:将步骤二制备得到的Fe3O4OS12磁性纳米颗粒加入到一定pH值的缓冲溶液中，然后加入一定量的表面活性剂或离子液体，超声后静置，磁场分离除去上清液，得到固相萃取剂。
2.设计了一个简单的磁性分离流程，并将其应用于生物样品中黄酮类药物的富集和分离，向放有磁性混合半胶束固相萃取剂的塑料管加入含有一定浓度药物的尿液样品，超声后静置，磁场分离除去尿液，富集的分析物用有机溶剂从磁性萃取剂上洗脱，洗脱液用氮气吹干并用甲醇复溶，过滤后用液相色谱进行分析。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述步骤a( —)和b ( —)中，三氯化铁的摩尔浓度为0.05?0.5mol/L，乙二醇和二乙二醇的比例为1: 5?5: 1，反应时间为4?24h。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于:所述步骤b(二)中，Fe3O4磁性纳米颗粒的用量为0.5?1.5g，乙醇的体积为100?200mL，去离子水的体积为25?35mL，超声时间为5?30min,氨水的体积为I?5mL,正娃酸乙酯的体积为2?1mL,反应时间为4?12h。
5.根据权利要求1所述的制备方法，所述步骤a(二)和b(三)中，表面活性剂为十二烷基硫酸钠(SDS)、氯代十六烷基吡啶(CPC)、十八烷基三甲基溴化铵(OTMABr)、十六烷基三甲基溴化铵(CTAB);离子液体为氯化1-己基-3-甲基咪唑(C6HiimCl)、溴化1-己基-3-甲基咪唑(C6HiimBr)、氯化1-十二烷基-3-甲基咪唑(C12mimCl)、溴化1-十二烷基-3-甲基咪唑(C12HiimBr)、氯化1-十六烷基-3-甲基咪唑(C16mimCl)、溴化1-十六烷基-3-甲基咪唑(C16HiimBr)。磁性碳纳米管的用量为2?10mg，表面活性剂的用量为I?20mg，缓冲溶液为磷酸钠缓冲溶液、磷酸钾缓冲溶液、Tris-HCl缓冲溶液；缓冲溶液的pH分别为2.0?10.0、2.0?10.0,6.8?9.0 ;缓冲溶液的浓度为0.02?0.5M，缓冲溶液的体积为1.0?10.0mL0
6.根据权利要求2所述的制备方法，加入尿液的体积为I?1mL ;超声时间为2?1min ;静置时间为2?1min ;有机溶剂的种类为甲醇,含I %醋酸的甲醇，含2%醋酸的甲醇，乙腈，含I %醋酸的乙腈，含2%醋酸的乙腈；所用有机溶剂的体积为0.5?3mL ;清洗次数为I?5次。
【专利摘要】本发明涉及一种基于Fe3O4磁性纳米颗粒的混合半胶束固相萃取剂的制备方法。制备过程主要包括三个步骤：Fe3O4磁性纳米颗粒的制备，混合半胶束固相萃取剂的制备以及固相萃取过程。本发明提供的合成方法简单，易于控制，制得的磁性混合半胶束固相萃取剂萃取效率高，操作简便，可大大缩短样品的预处理时间，不需大量有毒有害溶剂，避免污染，同时可有效减少样品损失的特点，非常适合于快速样品分析的要求。
【IPC分类】B01J20-30, B01J20-28, B01J20-10, B01D15-08
【公开号】CN104785197
【申请号】CN201410022383
【发明人】何华, 肖得力, 袁丹华, 张婵, 戴昊, 邱盼子, 何佳
【申请人】中国药科大学
【公开日】2015年7月22日
【申请日】2014年1月16日