专利名称：：一种含冰片的复方丹参冻干粉针剂及其制备方法
技术领域：
：本发明属于医药领域，更具体地说，涉及以中药为原料制成一种复方丹参冻干粉针剂。
背景技术：
：在大多数西方国家，心血管病的死亡约占总死亡数的一半，其中冠心病占首位，约占心血管死亡数的50％以上。作为亚洲国家，冠心病在中国不如欧美国家多见，但近年有增多趋势。据卫生部公布的生命统计资料，1957年城市居民心脑血管病死亡占总数的12.0％，1989年上升至16.6％，死因顺位由第5、7位上升到2、3位。由此可见，冠心病的发病率逐年增高，大多数人的心血管病危险因素也呈持续快速上升趋势。冠心病患者除了有可能因冠脉阻塞引起心肌梗塞导致死亡外，心绞痛的频繁发作也将使其学习、工作能力大大受限，严重时个人生活不能自理，对家庭和社会都带来了沉重的负担。因此，自70年代以来，冠心病的防治工作已列为国家重点课题之一，随着冠心病发病率的增加，研制开发有效地预防、治疗冠心病、心绞痛的药物以减少心血管疾病对人类健康的威胁是一项十分有意义的工作。现代医学研究认为，对心脏予以机械性刺激并不引起疼痛，但心肌缺血缺氧则引起疼痛。当冠状动脉的供血与心肌的需要之间发生矛盾，冠状动脉血流量不能满足心肌代谢的需要，引起心肌急剧的、暂时缺血与缺氧时，即产生心绞痛。现代医学对本病的治疗原则是改善冠状动脉的供血和减轻心肌的耗氧，同时治疗动脉粥样硬化。心绞痛发作时可使用作用较快的硝酸制剂。常用的有硝酸甘油0.3～0.6mg，舌下含化；二硝酸异山梨醇酯5～10mg，舌下含化等。不良作用有头昏、头胀痛、头部跳动感、面红、心悸等，偶有血压下降。长期反复应用可由于产生耐药性而效力减低。缓解期尽量避免各种确知足以诱致发作的因素。使用作用持久的抗心绞痛药物，以防心绞痛发作，常用的有(1)硝酸酯制剂(二硝酸异山梨醇酯、长效硝酸甘油制剂等)；(2)肾上腺素能β受体阻滞剂(心得安、氧烯洛尔、吲哚洛尔、美托洛尔等)，但本类药物有可能引起体位性低血压等不良反应、突然停用有引起心肌梗塞的可能；(3)钙通道阻滞剂(维拉帕米、硝苯啶等)，但有过度抑制心脏的危险，停用本类药物不当有可能引起冠状动脉痉挛；(4)冠状动脉扩张剂(潘生丁、吗多明、胺碘酮等)，本类药物尤其是潘生丁能减少侧支循环的血流量，引起所谓“冠状动脉窃血”现象，反而使心肌缺血加重，在临床虽然常用但颇多争论。此外，近年来还逐渐兴起了施行主动脉-冠状动脉旁路移植手术和经皮腔内冠状动脉成形术两种手术治疗方法。但手术能否改善心室功能，能否使以后不发生严重心律失常、心力衰竭或心肌梗塞，能否延长病人寿命，尚无定论；加以手术本身可并发心肌梗塞，术后移植的血管可栓塞，因此手术适应症较严格，并非适合大多数冠心病患者。中医中药是防治冠心病的重要手段。针对本病，根据祖国医学辨证论治采用治标和治本两法。治标，主要在疼痛期应用，以“通”为主，有活血、化瘀、理气、通阳、化痰等治法；治本，一般在缓解期应用，以调整阴阳、脏腑、气血为主，有补阳、滋阴、补气血、调理脏腑等法。其中以“活血化瘀法”(常用含赤芍、丹参、红花、川芎、蒲黄、郁金等中药的复方或中成药)和“芳香温通法”(常用苏合香丸、苏冰滴丸、宽胸丸、保心丸、麝香保心丸等)最为常用。但现有的中药成药以汤剂和复方丸剂为主，服用量大，携带不便，起效慢等缺点。冻干粉制剂为中药先进剂型，既能克服口服制剂起效慢，又能克服注射液稳定性差的问题，与其它剂型相比，冻干粉稳定性好，有效避免了组方中药物发生配伍变化，在延长制剂有效期的同时保持了疗效；其次工艺先进，药效物质纯度更高；另外还可最大限度保持复方丹参冻干粉中有效成分的生物学活性，从而满足临床需要，具有广阔的临床应用前景。
发明内容本发明的目的在于提供一种复方丹参冻干粉针剂。本发明复方丹参冻干粉针剂，是由下列重量份原料制成丹参1000～4000g、三七260～850g、冰片5～50g。优选的本发明复方丹参冻干粉针剂，是由下列重量份原料制成丹参2000～3000g、三七360～550g、冰片15～35g。最佳的本发明复方丹参冻干粉针剂，是由下列重量份原料制成丹参2486.2g、三七486.2g、天然冰片27.6g。本发明药物中，丹参为君药，活血通络、祛淤止痛；配以三七为臣，活血化瘀、通络止痛；冰片开窍醒神，三药合用，可达到活血化瘀、理气止痛的功效。本发明药物有效成分可以采用以下方法水提法、水提醇沉法、醇提水沉、萃取法、浸渍法、渗漉法、回流提取法、连续回流提取法、大孔树脂吸附法制备。本发明复方丹参冻干粉针剂有效组分的制备方法，包括如下步骤a.取上述处方量丹参、三七、冰片备用；b.以上三味，丹参加水煎煮，合并煎液，并浓缩，浓缩液加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，浓缩液加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液浓缩，加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，干燥，得丹参提取物；三七，加水煎煮，合并煎液，浓缩，加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精，加水，加热使溶解，加活性炭煮沸，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，包合，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液，即得。本发明复方冻干粉针剂中，含有丹参提取物、三七提取物、以及冰片。本发明复方冻干粉针中，冰片含量以右旋龙脑计，含量照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VIE)测定。色谱条件与系统适用性试验色谱柱INNOWAX(30m*0.32mm*0.5um)，柱温程序升温150℃保持7min，以20℃/min升至220℃，保持5min。汽化温度250℃；检测器温度250℃；检测器FID氢火焰离子化检测器，氢气流量40ml/min；空气流量350ml/min；载气高纯度氮气；载气流量2ml/min，尾吹30ml/min；进样方式分流比5∶1。理论板数按右旋龙脑峰计算应不低于1900。校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇配制成1mg/ml的溶液，作为内标溶液。取右旋龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成1mg/ml的溶液，再精密量取0.5ml于10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取1ul，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法取本品5瓶，倾出内容物，混匀，精密称取适量(约相当于1瓶的量)，于25ml量瓶中，用水5ml溶解后，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.5ml于10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，吸取续滤液1ul，注入气相色谱仪，测定，即得。本品每瓶含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为6.25～75.0mg/g冻干粉固形物。优选的复方丹参冻干粉针剂，其中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为12.5～62.5mg/g冻干粉固形物。进一步优选的复方丹参冻干粉针剂，其中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为25.0～50.25mg/g冻干粉固形物。最佳的复方丹参冻干粉针剂，其中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为31.25～41.5mg/g冻干粉固形物。本发明复方丹参冻干粉针剂，采用如下方法测定冻干粉针中丹酚酸B(C36H30O16)的含量，其含量测定方法如下照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定；色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-0.1％磷酸(24∶76)为流动相；检测波长为288nm；理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于3000；对照品溶液的制备精密称取丹酚酸B对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下本品内容物，混匀，取0.15g，精密称定，置50ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45um)滤过，即得；测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，含丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为6.25～100.00mg/g冻干粉固形物。本发明复方丹参冻干粉针剂，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为6.25～56.25mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为1.25～18.75mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为6.25～100.0mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为6.25～75.0mg/g冻干粉固形物。优选的复方丹参冻干粉针剂，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为12.5～50.0mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为2.5～15.5mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为12.5～75.0mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为12.5～62.5mg/g冻干粉固形物。进一步优选的复方丹参冻干粉针剂，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为18.75～31.25mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为3.75～12.75mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为25.0～50.125mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为25.0～50.25mg/g冻干粉固形物。最佳的复方丹参冻干粉针剂，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为18.75～25.0mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为3.75～8.875mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为25.0～41.375mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为31.25～41.5mg/g冻干粉固形物。本发明复方冻干粉针剂中，三七以人参皂苷Rg1，人参皂苷Rb1，三七皂苷R1总量计，含量照高效液相色谱法(《中国药典》2005年版一部附录VID)测定。色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水梯度洗脱为流动相；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rg1峰计算应不低于2000。线性梯度洗脱流动相配比变化程序对照品溶液的制备分别精密称取人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.5mg、0.5mg、0.2mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下本品内容物，混匀，取0.5g，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45um)滤过，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，计算，即得。本品含三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为6.25～56.25mg/g冻干粉固形物。本发明复方冻干粉针剂中，丹参以丹参素计含量照高效液相色谱法(中国药典2005年版一部附录VID)测定。色谱条件和系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-0.1％磷酸(8∶92)为流动相；检测波长为280nm。理论板数按丹参素钠峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备精密称取丹参素钠对照品适量，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，摇匀，即得。供试品溶液的制备取装量差异项下本品内容物，混匀，取0.4g，精密称定，置25ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45um)滤过，即得。测定法精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得(每1mg丹参素钠相当于0.880mg丹参素)。本品含丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为1.25～18.75mg/g冻干粉固形物。本发明药物可以采用中药制剂常规方法制备。也可将这些原料药粉碎成粉末混合均匀制成散剂冲服；也可以将这些药物一起水煎，然后浓缩水煎液，制成口服液；也可以将本发明药物所用原料药粉碎，将原料药粉碎成分与辅料混合均匀，直接压片。本发明可以采用上述提取方法获得的药物活性组分，与目前常见药剂学说用辅料制成任何一种药剂学上所说的剂型；如片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、口服液、口含剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、软膏剂、硬膏剂、喷雾剂、滴丸、软胶囊、注射液、冻干粉针剂等制剂形式，但优选采用下述方法提取原料药，并制备成冻干粉针剂，以下只是对本发明的进一步说明，但这不构成对本发明的限制。本发明复方丹参冻干粉针剂的制备方法，包括如下步骤a.取处方量丹参、三七、冰片备用；b.以上丹参、三七经过分别提取或者合提取，得丹参提取物、三七提取物或者丹参、三七合提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β-环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物或丹参三七提取物加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷，滤过，滤液与冰片β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量，调pH，冻干，即得。优选的本发明复方丹参冻干粉针剂的制备方法，包括如下步骤a.取处方量丹参、三七、冰片备用；b.以上三味，丹参加水煎煮，合并煎液，并浓缩，浓缩液加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，浓缩液加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液浓缩，加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，干燥，得丹参提取物；三七，加水煎煮，合并煎液，浓缩，加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精，加水，加热使溶解，加活性炭煮沸，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，包合，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加活性炭，保温，脱炭，滤液冷却后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量，调pH，冻干，即得。优选的本发明复方丹参冻干粉针剂的制备方法，包括如下步骤a.取处方量丹参、三七、冰片备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮1～5次，每次0.5～3小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50～85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.45(50℃)的浸膏，加2～14倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50～90％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七，加水煎煮1～5次，每次0.5～3小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50～90％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加1～10倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用50～85％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精100～1500g，加水至适量，加热使溶解，加0.2～1％活性炭煮沸5～60分钟，脱炭，滤液备用。将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合1～12小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸1～20分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.05～0.2％活性炭50～90℃保温10～60分钟，脱炭，滤液冷却至70℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇20～300g，补加注射用水至适量，调pH为5～7，冻干，即得。最佳的本发明复方丹参冻干粉针剂的制备方法，包括如下步骤a.取处方量丹参、三七、冰片备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达75％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25左右(50℃)的浸膏，加8～10倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七粉碎成颗粒，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加3～5倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精500g，加水至1500ml，加热使溶解，加0.5％活性炭煮沸20分钟，脱炭，滤液备用。将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合6小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸10分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.1％活性炭80℃保温30分钟，脱炭，滤液冷却至50℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇100g，补加注射用水至4000ml，调pH为6.5，除菌滤过，灌装至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冻干，压盖，检验，包装即得。本发明复方丹参冻干粉针剂，每瓶中冻干粉针固形物为0.75～0.85g。优选本发明复方丹参冻干粉针剂，每瓶中冻干粉针固形物为0.8g。以上组成在生产时可按照相应的比例增大或减少，如大规模生产可以以公斤或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或减小，但各组成之间的生药材料重量配比比例不变。为了更好的理解本发明，以下通过本发明药物药效学试验来进一步阐述发明药物的有益效果，下面试验旨在进一步说明药物的作用，而非对本发明的限制。实验例注射用复方丹参冻干粉的药效学试验1实验材料1.1药品受试药物复方丹参冻干粉(冻干前样品)由天津和本堂生物技术有限公司提供，规格300g/100ml/瓶，批号030307；阳性对照药物香丹注射液，江苏康怡制药有限公司产品，生产批号030710-1。1.2试剂氨基甲酸乙酯(乌拉坦)，为上海三浦化工有限公司产品，批号20030812；戊巴比妥钠，为上海化学试剂公司产品，批号F20020915；垂体后叶素注射液，由上海第一生化药业公司与上海生物化学制药厂联合生产，批号040301；蓝四氮唑(UNI-CHEMChemicalReogents)，批号GD3010034；ADP和胶原，Sigma公司产品，终浓度为3.5μmol/L。1.3仪器BL-410生物机能实验系统，为四川省成都泰盟科技有限公司产品；动物人工呼吸机，DH-150型，浙江大学医学仪器厂生产；RM-6000型四道生理多导仪为日本光电公司产品，所用插件分别为浮地式生物电放大器(AT-601G)、载波放大器(AP-621G)、血压记录器(AP-611G)、心率计数器(AT-601G)；MF-1200型电磁流量计为日本光电公司产品；电热恒温干燥箱为长沙医疗器械厂产品；HH-W600数显三用恒温水箱，为江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司产品；激光多普勒血流仪(PeriFluxSystem5000，PERIMED，USA)；LDZ5-2离心机为北京医用离心机厂产品；血气分析仪(USAInsyrumentationLaboratory，Gem-3000型)以及生化自动化分析仪(USAVIROS-950型)；TYXN-91型智能血小板聚集仪(上海伯奥生物科技有限公司)；SystemCA-530血液流变学仪(美国)。1.4剂量设定参照临床用药剂量，结合小鼠急性耐缺氧试验、对小鼠凝血时间影响以及对垂体后叶素致大鼠心肌缺血影响等试验得出各种动物给药剂量，如下大鼠低剂量0.30g/kg、中剂量0.60g/kg、高剂量1.20g/kg；犬低剂量0.09g/kg、中剂量0.18g/kg、高剂量0.36g/kg；小鼠低剂量0.44g/kg、中剂量0.88g/kg、高剂量1.76g/kg；香丹注射液犬0.53ml/Kg，大鼠1.8ml/Kg，小鼠2.6mI/lg。药物稀释方法、给药途径及体积取同一批号的各实验所用药品，用生理盐水配制，每日现配制现用；给药途径静脉注射或腹腔注射；各种单位给药容积分别为小鼠为0.15ml/10g体重；大鼠为0.3ml/100g；犬为3.0ml/kg体重。1.5实验动物清洁级昆明种小鼠，体重18～22g，雌雄各半，合格证号2002A055；清洁级SD大鼠，雌雄各半，体重180～230g，合格证号2003A070新西兰大白兔，体重2.0～2.5kg，雌雄不限，合格证号2003A034；杂种犬，体重11.0～14.0kg，均由中山大学实验动物中心提供。饲养条件动物进入清洁级动物实验室后，小鼠每笼放养10只，大鼠每笼放养5只，由专人饲养管理。动物室每天灯光照明12小时，通风和空调设备良好，室温控制在25±1℃，相对湿度为40～50％。实验室按常规定期消毒。1.6统计方法实验结果均以平均数±标准差()表示，计量资料的组间比较应用student’st检验，计量资料的试验前后比较采用配对t检验。2实验与结果2.2复方丹参对急性心肌缺血犬心肌的影响2.2.1实验方法健康杂种犬30只，体重11.0～14.0kg，雌雄均有，随机分为假手术组、模型组(生理盐水)、复方丹参冻干粉低剂量组(0.09g/kg)、复方丹参冻干粉中剂量组(0.18g/kg)、复方丹参冻干粉高剂量组(0.36g/kg)和香丹注射液组(0.53ml/kg)，每组5只动物。3％戊巴比妥钠(30mg/kg)静脉注射行全身麻醉，背位固定。从右颈静脉插管作为抽血备用。切开气管，插入气管套管，接动物呼吸机行正压人工呼吸(16次/min)。右侧卧位固定，于左第IV肋间开胸，剪开心包，暴露冠状动脉左前降支(LAD)穿线备用(作结扎)，在往下适当位置的心包膜上置9个电极作测心外膜电图用。手术损伤完毕，待所有观测指标稳定后，记录正常指标及抽血。结扎冠脉左前降支(LAD)复制心肌缺血模型，稳定30min记录指标，然后分别按各组剂量静脉滴注给药(控制15min内滴完)。分别抽血和记录结扎冠脉前、结扎冠脉后30min及给药后30min、60min、120min时各个点的心外膜电图。实验过程中，连续监测心电图II导联的变化。以BL-410生物信号采集与分析装置描记心外膜电图及心电图。2.2.2观察指标1.对心肌缺血范围的影响①分别在各个时间点用BL-410生物信号系统描记心外膜电图，心电图缺血范围(N-ST)以每导联中ST段抬高超出2mv的点数总和表示。心肌缺血程度(∑-ST)以每导联中ST段上升或下降幅度的总和表示。②对心肌梗死范围的测定于180min后，取下心脏进行心肌组织NBT染色，以称重法测定梗死的范围(梗死区/左室重×100％)。2.血清酶测定分别于扎前和给药后180min时取血，分离血清，应用生化自动分析仪测定血清乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸磷酸激酶(CPK)。2.2.3实验结果1.对心肌缺血犬心肌缺血范围的影响(1)对心外膜电图N-ST和∑-ST的影响下表10表明，模型对照组结扎后N-ST和∑-ST结扎后30min到用药后120min未见明显变化，注射给予复方丹参冻干粉和香丹注射液组的N-ST和∑-ST均小于缺血模型组，中、高剂量尤明显，提示复方丹参冻干粉能有效缩小心肌缺血范围，减轻心肌缺血的程度。表10复方丹参冻干粉对心肌缺血犬心外膜电图影响(n＝5，)<tablesid="table3"num="003"><tablewidth="793">时间给药后30min给药后60min给药后120minN-ST假手术模型对照复方丹参低剂量中剂量高剂量香丹注射液0.17±0.41**8.33±0.828.17±0.758.17±0.418.33±0.528.33±0.520.17±0.41**8.00±1.266.83±0.985.83±0.98**5.67±1.21**6.00±1.102*0.00±0.00**8.00±1.266.50±0.04*6.00±0.63**5.16±1.60**6.17±1.47*0.00±0.00**7.83±1.336.83±0.756.00±1.26*4.67±2.06**6.17±0.41**∑-ST假手术模型对照复方丹参低剂量中剂量高剂量香丹注射液9.22±3.30**32.41±11.8635.69±9.3634.83±8.3638.67±8.7531.33±7.969.57±2.45**30.65±11.2028.79±7.2920.96±3.92*19.27±2.78*21.09±4.85*9.13±2.34**30.80±11.3028.08±6.9622.99±3.85*17.66±2.44**21.07±5.27*9.67±1.82**28.56±10.3828.69±6.2724.19±5.1119.15±2.39*21.77±5.66</table></tables>与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01(2)对心肌梗死范围的影响表11显示复方丹参冻干粉各剂量组能明显减小心肌缺血范围，高剂量组最明显，中剂量组与阳性对照药效果相当。表11对心肌缺血犬心肌梗死范围的影响()<tablesid="table4"num="004"><tablewidth="536">组别动物数心肌梗死范围(％)模型对照组复方丹参低剂量组中剂量组高剂量组香丹注射液组6666614.80±3.5410.03±2.00**8.58±1.86**6.48±2.68**8.05±3.37**</table></tables>与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.012.对血清酶(LDH，CK)水平的影响下表12结果表明，假手术组犬心肌酶LDH和CK用药前后没有明显改变，冠脉结扎犬心肌酶LDH和CK较假手术组或手术前均显著升高。复方丹参和香丹注射液同模型组比较均有降低心肌缺血犬血清LDH和CPK水平的作用。表12对心肌缺血犬LDH及CK的影响()与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.013.对垂体后叶素所致心肌缺血的影响3.1实验方法SD大鼠70只，体重180～230g，随机分7组，每组10只，雌雄各半。用乌拉坦1200mg/Kg腹腔注射麻醉。背位固定，以BL-410生物信号采集与分析装置记录II导联心电图。各组大鼠分别从腹腔注射或灌胃给予以下药物①模型组(腹腔注射，ip.)生理盐水3.0ml/kg；②复方丹参冻干粉低剂量(ip.)组0.30g/kg；③复方丹参冻干粉中剂量(ip.)组0.60g/kg；④复方丹参冻干粉高剂量(ip.)组1.20g/kg)；⑤复方丹参冻干粉低剂量(灌胃，po.)组0.60g/kg；⑥复方丹参冻干粉高剂量(po.)组1.20g/kg；⑦香丹注射液(ip.)组1.80ml/kg。连续给药3天，每天一次，末次给药30min后(灌胃组给药后1h)，各组大鼠分别由舌下静脉注射垂体后叶素1u/kg致心肌缺血，观察并记录每只大鼠注射垂体后叶素前及后5s、10s、15s、30s、1min、3min、10min的II导联心电图，测量各时点心电图指标的变化，对各组结果进行给药前后的比较及组间比较。3.2观察指标(1)J点位移(mv)J点即QRS波的终了点，位移就是发生了位置的改变，抬高或压低；(2)T波幅值(mv)(3)心率(次/min)静脉注射垂体后叶素后，动物立即出现心电图缺血改变，表现为J点抬高或压低、T波高耸或低平、心律失常如室性早搏、心动过缓、房室传导组滞等，记录给垂体后叶素前后以上几项指标的变化。3.3实验结果由表13、表14和表15可见，给垂体后叶素后，大鼠因心肌缺血致心电图发生明显改变，如J点抬高、T波高耸、心律失常及心率减慢等现象，以10s、15s时改变最为显著。与模型对照组比较，复方丹参冻干粉低、中、高三个剂量组能明显降低垂体后叶素所致的大鼠心电图J点的抬高辐度(与模型组比较，P＜0.05或P＜0.01)，T波升高的辐度亦较模型组明显降低(P＜0.05)。复方丹参冻干粉静脉给药效果优于灌胃给药的效果。表13复方丹参冻干粉对垂体后叶素所致大鼠心电J点位移(μv)变化值的影响(n＝10，与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01表14复方丹参冻干粉对垂体后腺素所致大鼠心电T波辐值(μv)变化值的影响(n＝10，与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01表15复方丹参冻干粉对垂体后叶素所致大鼠心率的变化值的影响(n＝10，)与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.015.复方丹参冻干粉对血小板与血栓的影响5.1对体外血小板聚集的影响从家兔耳动脉取血，用硅化试管取血，以3.8％枸橼酸钠(1/10血量)抗凝，800r/min离心10分钟，吸出上层富血小板血浆(PRP)，再以3000r/min离心，取出贫血小板血浆(PPP)。用PPP将透光度调到100，然后以PRP调零，加搅拌棒、加生理盐水或复方丹参冻干粉(0.002、0.004、0.008g/ml)及香丹注射液(0.05ml/ml)，37℃温育。将PRP移至测定孔，加入ADP(终浓度为3.5μmol/L)或胶原(终浓度为30μg/ml)，观察5min最大聚集程度，仪器为TYXN-91型智能血小板聚集仪(上海伯奥生物科技有限公司)。计算血小板聚集百分率(Plateletaggregation，PAG)或抑制聚集百分率。由下表16、17结果可见，复方丹参冻干粉对ADP或胶原诱导的家兔血小板聚集有明显的抑制作用，随着剂量的增大抑制作用逐渐增强，即其对ADP或胶原诱导的家兔血小板聚集的抑制作用有明显的剂量依赖性。表16复方丹参冻干粉对ADP诱导的体外家兔血小板聚集(PAG)的影响()<tablesid="table9"num="009"><tablewidth="794">组别浓度(mg/ml)样本数(N)PAG(％)抑制聚集率(％)溶剂对照复方丹参低剂量中剂量高剂量香丹注射液-2480.05ml/ml101010101046.87±9.6634.40±6.17**29.56±6.56**25.37±5.90**31.12±7.65**-26.636.945.933.6</table></tables>与缓冲液对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01表17复方丹参冻干粉对胶原诱导的体外家兔血小板聚集(PAG)的影响()<tablesid="table10"num="010"><tablewidth="780">组别浓度(mg/ml)样本数(N)PAG(％)抑制聚集率(％)溶剂对照复方丹参低剂量中剂量高剂量香丹注射液-2480.05ml/ml101010101051.26±9.2533.10±8.53**26.09±6.02**24.91±7.89**31.16±7.93**-35.449.151.439.2</table></tables>与缓冲液对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.015.2对大鼠动-静脉旁路血栓形成的影响SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，10％水合氯醛3.5ml/kg腹腔注射(ip)麻醉固定，分别从舌下静脉给予香丹注射液(1.8ml/kg)、复方丹参冻干粉高剂量组(1.2g/kg)、中剂量组(0.6g/kg)、低剂量(0.3g/kg)，模型组给予等容积的生理盐水。于给药后30min，分离右侧颈总动脉和左侧颈外静脉。在聚乙烯管中段放入一根长6cm4号丝线，用肝素生理盐水溶液(50μl/ml)充满聚乙烯管。当聚乙烯管的一端插入左颈外静脉后，另一端塑料管注入肝素(50μl/m)0.2ml抗凝，然后再将此端插入右侧颈总动脉。打开动脉夹，让血液从右侧颈总动脉流入管内，返回左侧颈外静脉，开放血液15min后，中断血流，迅速取出聚乙烯管中的血栓在分析天平上称重，求出血栓抑制率(％)。血栓抑制率＝[(对照组血栓湿重-给药组血栓湿重)×100％]/对照组血栓湿重由下表18可见，复方丹参冻干粉高、中、低三个剂量均能明显抑制大鼠动静脉旁路血栓的形成，在所设计的0.3g/kg至1.2g/kg，随机量的增加作用增强。表18复方丹参冻干粉对大鼠颈总动-静脉形成血栓影响(n＝10)与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.016.复方丹参冻干粉对凝血时间和血液流变学的影响6.1复方丹参冻干粉对小鼠凝血时间的影响方法小鼠70只，体重18～22g，雌雄兼用，按体重和性别随机分成7组，给药容积为0.15ml/10g体重。分别给予静脉注射生理盐水溶液，0.22g/kg，0.44g/kg，0.88g/kg、1.76g/kg、3.52g/kg的复方丹参冻干粉，及2.6ml/kg香丹注射液。给药后30min，用毛细玻璃管自眼球取血，玻片法测定凝血时间。由下表19可见，复方丹参冻干粉0.22～3.52g/kg五个剂量均有延长小鼠凝血时间的作用，0.22～1.76g/kg随剂的增加作用增强，大于1.76g/kg作用不再增加。表19复方丹参冻干粉对小鼠凝血时间的影响(n＝10)6.2复方丹参冻干粉对大鼠血液流变学的影响方法SD大鼠50只，随机分为5组，每组10只，分别从腹腔注射给予香丹注射液(1.8ml/kg)、复方丹参冻干粉高剂量组(1.2g/kg)、中剂量组(0.6g/kg)、低剂量(0.3g/kg)，对照组给予等容积的生理盐水。每日1次，计7日，末次给药后30min，用乙醚麻醉大鼠，自大鼠腹腔动脉取血1.8ml，迅速加入有19柠檬酸钠溶液0.2ml的测定管中，采用用血液流变仪(美国产)测定各全血粘度、血浆粘度(ηp)、血液相对粘度(ηr)、红细胞聚集指数(AI)、屈服应力(CVS)、卡松粘度(CV)。结果下表20可见复方丹参冻干粉高剂量组能明显降低不同切变率时大鼠的全血粘度、血浆粘度和还原粘度，降低红细胞聚集指数，中剂量组可明显降低高切全血粘度。提示复方丹参冻干粉可改善血液流变学功能的作用。表20-1复方丹参冻干粉对大鼠血液流变学指标的影响(n＝10)与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01表20-2复方丹参冻干粉对大鼠血液流变学指标的影响(n＝10)与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.017.复方丹参冻干粉对小鼠耐缺氧能力的影响小鼠70只，雌雄各半，随机分为7组，每组10只。分别静脉注射下述药物①生理盐水0.15ml/10g；②复方丹参冻干粉0.22g/kg；③复方丹参冻干粉0.44g/kg；④复方丹参冻干粉0.88g/kg；⑤复方丹参冻干粉1.76g/kg；⑥复方丹参冻干粉3.52g/kg；⑦香丹注射液2.6ml/kg。每次注射容量为0.15ml/10g。注射完30分钟再分别腹腔注射盐酸异丙肾上腺素(15mg/kg)，然后逐个将小鼠放入容量为250ml、底部铺有5g钠石灰的缺氧瓶内，盖上涂有凡士林的瓶塞，造成密闭性缺氧。记录密闭瓶口时间，不断观察小白鼠呼吸频率、深度、皮肤和口唇颜色的变化，直到动物停止呼吸，记下死亡时间，从盖瓶塞到动物停止呼吸的持续时间作为缺氧条件下小鼠的存活时，比较用药组与对照组的存活时间。由表21可见，复方丹参冻干粉各剂量组小鼠在常压缺氧条件下的存活时间较对照组分别延长了23.20％(P＞0.05)、35.57％(P＞0.05)、55.15％(P＜0.05)、76.29％(P＜0.01)、78.35％(P＜0.01)，提示复方丹参冻干粉能提高小鼠的耐缺氧能力，以1.76g/kg较为显著。表21复方丹参冻干粉对耐缺氧时间的影响(n＝10)与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01实验证明，给犬静脉注射复方丹参冻干粉0.18g/kg及0.36g/kg能增加心脏做功、明显增加心输出量和冠状动脉血流量；缩小冠脉结扎犬的心电图缺血范围及心肌缺血程度，对心肌缺血引起的损害有剂量依赖性的保护作用。另复方丹参冻干粉能抑制血小板聚集，抑制体内血栓形成，延长凝血时间，改善血液流变学指标以及提高小鼠耐缺氧能力。表明本药具有明显的活血化淤和抗心肌缺血作用，是防治心肌缺血性疾病的有效药物，有重要的开发价值。本研究提示复方丹参冻干粉具有增强心脏泵的功能、增加冠脉血流、抵御心肌缺血缺氧、缩小严重心肌缺血所致的心肌损害等功能。具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进一步说明，下述各实施例仅用于说明本发明而并非对本发明的限制。实施例1a.取丹参1000g、三七850g、冰片5g备用；b.以上丹参、三七经过分别用水提取两次，每次1小时，合并提取液，浓缩，得丹参提取物、三七提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β-环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷，滤过，滤液与冰片β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量，调pH，冻干，即得。本发明复方冻干粉针中，冰片含量以右旋龙脑计，含量照气相色谱法(中国药典2005年版一部附录VIE)测定。色谱条件与系统适用性试验色谱柱INNOWAX(30m*0.32mm*0.5um)，柱温程序升温150℃保持7min，以20℃/min升至220℃，保持5min。汽化温度250℃；检测器温度250℃；检测器FID氢火焰离子化检测器，氢气流量40ml/min；空气流量350ml/min；载气高纯度氮气；载气流量2ml/min，尾吹30ml/min；进样方式分流比5∶1。理论板数按右旋龙脑峰计算应不低于1900。校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇配制成1mg/ml的溶液，作为内标溶液。取右旋龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成1mg/ml的溶液，再精密量取0.5ml于10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取1ul，注入气相色谱仪，计算校正因子。测定法取本品5瓶，倾出内容物，混匀，精密称取适量(约相当于1瓶的量)，于25ml量瓶中，用水5ml溶解后，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.5ml于10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，吸取续滤液1ul，注入气相色谱仪，测定，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为6.25～15.0mg/g冻干粉固形物。实施例2a.取丹参4000g、三七260g、冰片50g备用；b.以上丹参、三七经过分别用乙醇提取，得丹参提取物、三七提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β-环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷，滤过，滤液与冰片β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量，调pH，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为30.25～75.0mg/g冻干粉固形物。实施例3a.取丹参1200g、三七300g、冰片6g备用；b.以上丹参、三七经过分别经水提，3次醇沉，合并提取液，浓缩，得丹参提取物、三七提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β-环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷，滤过，滤液与冰片β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量，调pH，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为12.25～26.4mg/g冻干粉固形物。实施例4a.取丹参1500g、三七550g、冰片20g备用；b.以上丹参水提取两次，第一次加8倍量水提取3小时，第二次加6倍量水提取2小时，合并提取液，浓缩，得丹参提取物；三七醇提取两次，第一次加8倍量85％乙醇提取2小时，第二次加6倍量乙醇提取1小时，合并提取液，浓缩，得三七提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β-环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物或丹参三七提取物加注射用水500ml使溶解，煮沸5分钟，放冷，滤过，滤液与冰片β-CD包合溶液混合，加甘露醇10g，补加注射用水适量补足1000ml，调pH为5～7，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为18.33～26.0mg/g冻干粉固形物。实施例5a.取丹参1400g、三七350g、冰片30g备用；b.以上丹参水提取三次，第一次加8倍量水提取2小时，第二次加6倍量水提取1小时，第三次加4倍量水提取1小时，合并提取液，醇沉，溶液浓缩，得丹参提取物；三七醇提取三次，第一次加6倍量80％乙醇提取2小时，第二次加6倍量70％乙醇提取1小时，第三次加4倍量60％乙醇提取1小时，合并提取液，浓缩，得三七提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β-环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物或丹参三七提取物加注射用水300ml使溶解，煮沸10分钟，放冷，滤过，滤液与冰片β-CD包合溶液混合，加甘露醇60g，补加注射用水适量补足1000ml，调pH为5～6.5，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为25.00～35.0mg/g冻干粉固形物。实施例6a.取丹参3500g、三七400g、冰片8g备用；b.以上三味，丹参加8倍量水煎煮，合并煎液，并浓缩，浓缩液加入60％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，浓缩液加入70％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，滤过，滤液浓缩，加入80％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，干燥，得丹参提取物；三七，加4倍量水煎煮，合并煎液，浓缩，加入乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用85％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精，加水，加热使溶解，加活性炭煮沸，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，包合，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水200ml使溶解，煮沸，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加活性炭，保温，脱炭，滤液冷却后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量至1000ml，调pH5～5.5，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为6.25～14.8mg/g冻干粉固形物。实施例7a.取丹参2000g、三七450g、冰片30g备用；b.以上三味，丹参加6倍量水煎煮2次，每次1小时，合并煎液，并浓缩，浓缩液加入85％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，浓缩液加入80％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，滤过，滤液浓缩，加入80％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，干燥，得丹参提取物；三七，加7倍量水煎煮，合并煎液，浓缩，加入75％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用75％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精，加水，加热使溶解，加活性炭煮沸，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，包合，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水250ml使溶解，煮沸，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加活性炭，保温，脱炭，滤液冷却后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水1500ml，调pH4～5，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为22.4～34.8mg/g冻干粉固形物。实施例8a.取丹参1800g、三七260g、冰片10g备用；b.以上三味，丹参加5倍量水煎煮2次，每次2小时，合并煎液，并浓缩，浓缩液加入75％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，浓缩液加入80％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，滤过，滤液浓缩，加入80％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，干燥，得丹参提取物；三七，加8倍量水煎煮，合并煎液，浓缩，加入85％乙醇，静置，滤过，滤液浓缩，加水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用85％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精，加水，加热使溶解，加活性炭煮沸，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，包合，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水450ml使溶解，煮沸，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加活性炭，保温，脱炭，滤液冷却后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水2000ml，调pH4～6，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为7.5～16.4mg/g冻干粉固形物。实施例9a.取丹参3000g、三七360g、冰片15备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮5次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.45(50℃)的浸膏，加4倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达90％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七，加水煎煮5次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达90％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加10倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用85％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精1500g，加水至适量，加热使溶解，加1％活性炭煮沸60分钟，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合2小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸20分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.2％活性炭90℃保温60分钟，脱炭，滤液冷却至70℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇300g，补加注射用水至适量，调pH为5～7，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为12.5～32.5mg/g冻干粉固形物。实施例10a.取丹参8000g、三七550g、冰片65备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮3次，每次2小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.45(50℃)的浸膏，加2倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七，加水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加2倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用50％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精100g，加水至适量，加热使溶解，加0.2％活性炭煮沸5分钟，脱炭，滤液备用。将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合1～12小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸1～20分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.05％活性炭50℃保温10分钟，脱炭，滤液冷却至70℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇20g，补加注射用水至适量，调pH为5～7，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为40.75～75.0mg/g冻干粉固形物。实施例11a.取丹参2469.85g、三七425.25g、冰片25.25备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达75％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.45(50℃)的浸膏，加10倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七，加水煎煮2次，每次1.5小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加6倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用65％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精200g，加水至适量，加热使溶解，加0.5％活性炭煮沸30分钟，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合4小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸15分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.1％活性炭70℃保温20分钟，脱炭，滤液冷却至60℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇40g，补加注射用水至适量，调pH为5～7，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为25.00～38.0mg/g冻干粉固形物。实施例12a.取丹参2266.2g、三七438.2g、天然冰片20.6g备用；b.以上三味，丹参第一次加8倍量水，第二、三次分别加6倍量水，每次煎煮1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达65％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.45(50℃)的浸膏，加8倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七，加6倍量水煎煮3次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达60％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加6倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用65％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精150g，加水至适量，加热使溶解，加0.4％活性炭煮沸20分钟，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合2小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸10分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.01％活性炭70℃保温10分钟，脱炭，滤液冷却至70℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇80g，补加注射用水至适量，调pH为5～7，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为20.45～38.9.0mg/g冻干粉固形物。实施例13a.取丹参2486.2g、三七486.2g、天然冰片27.6g备用；b.以上三味，丹参第一次加8倍量水，第二、三次分别加6倍量水，每次煎煮1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达75％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25左右(50℃)的浸膏，加8～10倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七粉碎成颗粒，加8倍量水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加3～5倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精500g，加水至1500ml，加热使溶解，加0.5％活性炭煮沸20分钟，脱炭，滤液备用。将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合6小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸10分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.1％活性炭80℃保温30分钟，脱炭，滤液冷却至50℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇100g，补加注射用水至4000ml，调pH为6.5，除菌滤过，灌装至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冻干，压盖，检验，包装即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为31.25～41.5mg/g冻干粉固形物。实施例14a.取丹参2468.2g、三七468.2g、冰片35.6g备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮3次，每次0.5小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达75％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.45(50℃)的浸膏，加4倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七，加6倍量水煎煮3次，每次0.5～3小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达50～90％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.05～1.35(50℃)的浸膏，加5倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用75％乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精200g，加水至适量，加热使溶解，加1％活性炭煮沸50分钟，脱炭，滤液备用；将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合8小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸5分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.08％活性炭60℃保温25分钟，脱炭，滤液冷却至70℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇150g，补加注射用水至适量，调pH为5～7，冻干，即得。按照实施例1方法测定含量，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为21.25～39.5mg/g冻干粉固形物。权利要求1.一种复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，采用如下方法测定冻干粉针中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，其含量测定方法如下色谱条件与系统适用性试验色谱柱INNOWAX(30m*0.32mm*0.5um)，柱温程序升温150℃保持7min，以20℃/min升至220℃，保持5min。汽化温度250℃；检测器温度250℃；检测器FID氢火焰离子化检测器，氢气流量40ml/min；空气流量350ml/min；载气高纯度氮气；载气流量2ml/min，尾吹30ml/min；进样方式分流比5∶1；理论板数按右旋龙脑峰计算应不低于1900；校正因子的测定取水杨酸甲酯适量，精密称定，加无水乙醇配制成1mg/ml的溶液，作为内标溶液。取右旋龙脑对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成1mg/ml的溶液，再精密量取0.5ml于10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，吸取1ul，注入气相色谱仪，计算校正因子；测定法取本品5瓶，倾出内容物，混匀，精密称取适量(约相当于1瓶的量)，于25ml量瓶中，用水5ml溶解后，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，再精密量取0.5ml于10ml量瓶中，精密加入内标溶液1ml后用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，吸取续滤液1ul，注入气相色谱仪，测定，本品含冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为6.25～75.0mg/g冻干粉固形物。2.如权利要求1所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为12.5～62.5mg/g冻干粉固形物。3.如权利要求2所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为25.0～50.25mg/g冻干粉固形物。4.如权利要求3所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为31.25～41.5mg/g冻干粉固形物。5.如权利要求1所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为6.25～56.25mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为1.25～18.75mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为6.25～100.0mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为6.25～75.0mg/g冻干粉固形物。6.如权利要求5所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为12.5～50.0mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为2.5～15.5mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为12.5～75.0mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为12.5～62.5mg/g冻干粉固形物。7.如权利要求6所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为18.75～31.25mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为3.75～12.75mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为25.0～50.125mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为25.0～50.25mg/g冻干粉固形物。8.如权利要求7所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，其中三七以人参皂苷Rg1(C27H32O16)、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1的总量计，含量为18.75～25.0mg/g冻干粉固形物；丹参以丹参素(C9H10O5)计，含量为3.75～8.875mg/g冻干粉固形物；丹参以丹酚酸B(C36H30O16)计，含量为25.0～41.375mg/g冻干粉固形物；冰片以右旋龙脑(C10H18O)计，含量为31.25～41.5mg/g冻干粉固形物。9.如权利要求1～8任一所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于，制备方法如下a.取丹参1000～4000g、三七260～850g、冰片5～50g备用；b.以上三味，丹参切片加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达75％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达85％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.25左右(50℃)的浸膏，加8～10倍量水，冷藏，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至稠膏，干燥，得丹参提取物；取三七粉碎成颗粒，加水煎煮三次，每次1小时，合并煎液，并浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加入乙醇使含醇量达80％，静置，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15左右(50℃)的浸膏，加3～5倍量水，冷藏，滤过，滤液通过大孔吸附树脂柱后，先用水洗，再用70％乙醇洗脱，收集70％乙醇洗脱液，浓缩至稠膏，干燥，得三七提取物；取羟丙基-β-环糊精500g，加水至1500ml，加热使溶解，加0.5％活性炭煮沸20分钟，脱炭，滤液备用。将冰片用适量乙醇溶解，缓慢滴加至羟丙基-β-环糊精水溶液中，超声包合6小时，滤过，得冰片羟丙基-β-CD包合溶液；将丹参提取物与三七提取物分别加注射用水适量使溶解，煮沸10分钟，放冷至室温，冷藏，滤过，滤液合并，加0.1％活性炭80℃保温30分钟，脱炭，滤液冷却至50℃以下后与冰片羟丙基-β-CD包合溶液混合，加甘露醇100g，补加注射用水至4000ml，调pH为6.5，除菌滤过，灌装至西林瓶中，加丁基橡胶塞，冻干，压盖，检验，包装即得。10.如权利要求9所述复方丹参冻干粉针剂，其特征在于每瓶中冻干粉针固形物为0.8g。全文摘要本发明药物是提供一种含冰片的复方丹参冻干粉针剂及其制备方法。本发明是由丹参、三七、冰片为药物组成，丹参、三七经过提取，得丹参提取物、三七提取物；冰片用适量乙醇溶解，用β－环糊精包合；将丹参提取物、三七提取物或丹参三七提取物加注射用水适量使溶解，煮沸，放冷，滤过，滤液与冰片β－CD包合溶液混合，加甘露醇，补加注射用水适量，调pH，冻干，制成的冻干粉针剂。本发明药物更加适合危、重、急症的临床需要。本品含冰片以右旋龙脑(C文档编号G01N33/15GK101085002SQ20061001422公开日2007年12月12日申请日期2006年6月8日优先权日2006年6月8日发明者叶正良,李永强,郑永锋,周桂荣申请人:天津天士力之骄药业有限公司