专利名称：人类免疫缺陷病毒(hiv)1+2型抗体三条线快速检测板的制作方法
技术领域：
本实用新型属于生物化学类血液中抗体检测装置。
背景技术：
美国疾病控制中心首先在美国发现获得性免疫缺陷综合征(又称艾滋病)。国际病毒命名委员会统一将引起该病的病毒命名为人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus)简称HIV。
人类免疫缺陷病毒有I型和II型，即HIV-1和HIV-2两种类型，其生物学特征很相似。HIV-1是引起全球艾滋病流行的病原，HIV-2是后来在西非发现的，最初只在西非流行，现已扩散到世界很多地区。由于HIV的易变性，目前还没有找到有效的疫苗，也没有有效药物进行有效治疗。当前控制HIV传播最有效的手段就是尽早发现病毒携带者，尽早隔绝传染源。
检测人是否感染了HIV，最常见的方法是根据病原学原理，检测人血液中是否存在HIV抗体，如果人血液中检测出HIV抗体，就预示着已感染上了HIV。HIV抗体的检测方法有多种，如凝聚法、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附实验(ELISA)、胶体金免疫结合实验、蛋白印迹法等。目前应用最为普遍，且被国家批准采用的是酶联免疫吸附实验(ELISA)。应用该法，首先对健康人群进行初步筛选，然后对有感染可疑的样本，再用蛋白印迹法进行确证。
ELISA法灵敏度较高，可进行大规模的人群筛选，目前我国对健康人群进行的HIV抗体筛查主要就是使用ELISA法。但ELISA法必须由受过专业训练的人员进行操作，还需要一定的仪器和设备，试剂也需低温保存，有效使用期相对较短，因而只能在有良好条件的医院和实验室进行。另外，ELISA法操作时间相对较长，无法当场出结果，不利于病人追踪。我国幅员广大，在一些边远地区，由于受条件限制，无法用ELISA法进行有效筛选。
胶体金免疫结合实验是在酶免疫结合实验的基础上发展起来的一种固相标记免疫测定新技术，根据装置的不同又分为金免疫渗滤实验和金免疫层析实验。金免疫渗滤法是将抗原固定在纤维膜上，膜下垫有吸水板，测试时在膜上滴加样本，等完全吸收后再用溶液冲洗，然后加入标金溶液，再冲洗，最后观察结果。金免疫层析法是以胶体金作为标记物，其检测原理与金免疫渗滤法基本相同，不同点在于液体的移动不是通过直向的穿流，而是基于层析作用的横向流动。它是将各种试剂以条带状固定在同一试纸条上，待检样本加在试纸条的一端，将一种试剂溶解后，通过毛细作用在层析条上渗滤、移行并与膜上另一种试剂接触，样本中的待测物同层析材料上针对待测物的受体(抗原或抗体)发生特异性免疫反应。层析过程中免疫复合物被截留、聚集在层析材料的一定区域(检测带)，通过可目测的胶体金得到直观的显色结果；而游离标记物越过检测带，达到与结合标记物分离之目的。
金标检测试剂目前已被广泛应用，作为HIV金标检测试剂，其具体方法是用HIV抗原标记金胶体，第一步反应与HIV抗体结合，然后再跟固定在膜上的HIV抗原结合，形成抗原金胶体～抗体～抗原复合物。由于抗原金标的专一性，提高了检测灵敏度和特异性。该法的优点是操作简单、完成时间短、通过显色带可非常直地判断结果、由于是干试剂，可在室温条件下长期保存(有效使用期长达一年至一年半)。HIV抗原金标试剂含有HIV-1和HIV-2两种类型的抗原，在包被时也是将HIV-1和HIV-2两种类型的抗原混合包被在硝酸纤维膜上，当出现阳性反应时，膜上会出现两条红线，一条是控制线，一条是反应线，此时可初步判定可能感染了HIV，但还需做进一步确证检测才能判定是HIV-1还是HIV-2型感染，最后给出检测报告。
发明内容本实用新型的目的在于克服已有检测HIV抗体金标试剂将HIV-1和HIV-2两种类型的抗原混合包被在硝酸纤维膜上，一次检测不能判断是HIV-1还是HIV-2型感染的缺点，因而设计了此种将HIV-1和HIV-2两种类型的抗原分开包被在硝酸纤维膜上，形成两条反应线的人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体快速检测板。
本实用新型主要靠如下结构实现。它由上盖、底板和试纸条组成。试纸条置于上盖和底板之间。在上盖上留有样本孔和反应观察孔；在底板上留有固定试纸条的挡墙；试纸条以硝酸纤维膜为基体，在其一端，位于样本加入孔处固定有一层样本吸收材料，其略上方处连接有一层含有HIV抗原金标试剂和鼠IgG金标试剂的薄膜；在硝酸纤维膜的中间膜位置，位于反应观察孔区域，分三段分别包被有HIV-1、HIV-2抗原和羊抗鼠IgG抗体，即反应线1、反应线2和控制线共三条线；在其另一端固定有吸水纸，用于吸附反应液。
本检测板适用血清、血浆、全血样本中HIV1+2抗体检测，可用于血站筛选、医院及海关快速体检等，其灵敏度和特异性均高于同类产品。经国家药品生物制品检定所HIV参比品实验，符合率为100％。
以下结合附图详细说明。图1是本实用新型结构示意图，图2是本实用新型上盖结构示意图，图3是底板结构示意图，图4是试纸条结构示意图，图5是图4 A向放大视图。在图中(1)样本孔、(2)反应线一、(3)反应线二、(4)控制线、(5)塑料粘贴板、(6)样本吸收材料和已标记HIV抗原及鼠IgG及金胶体试剂、(7)包被有HIV-1、HIV-2抗原和羊抗鼠IgG抗体的硝酸纤维膜、(8)吸水纸。
如图所示，本实用新型由该人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体快速检测板的上盖、底板和试纸条组成。试纸条置于上盖和底板之间。在上盖上留有圆形样本加入孔和矩形反应观察孔。为便于上盖和底板两者间的固定，在上盖内侧留有4～6个凸起；在底板上留有用于固定试纸条且高1.6～2.0毫米的挡墙，并在与上盖内侧凸起相应位置留有4～6个凹槽；试纸条以硝酸纤维膜为基体，在其一端，位于样本加入孔处固定有一层吸收样本的材料，其略上方处，连接有含金标HIV抗原试剂和金标鼠IgG试剂的薄膜；在硝酸纤维膜的中间位置，位于反应观察孔区域，分三段分别包被有HIV-1、HIV-2抗原(即反应线1和反应线2)和作为控制线的羊抗鼠IgG抗体；在其另一端固定有吸水纸，用于吸附反应液。上述检测板中试纸条的特征在于在其中间位置分三段分别包被有HIV-1、HIV-2抗原(即反应线1和反应线2)和作为控制线的羊抗鼠IgG抗体。共三条线两条反应，一条控制线。
具体实施方式
本实用新型在使用时，因以HIV-1和HIV-2抗原为包被抗原和金标抗原，故当待检样本中含有HIV抗体时，先与金标抗原反应，形成抗体～金标抗原复合物，在虹吸作用下向前移动，遇到包被抗原再形成抗原～抗体～金标抗原复合物，并出现红色反应线。包被膜上同时含有一条包被有羊抗鼠IgG抗体的控制线作为对照。当出现两条红线，即一条为控制线，另一条为反应线1时，判断为阳性，说明待检样本中含有HIV-1抗体；当也出现两条红线，即一条为控制线，另一条为反应线2时，也判断为阳性，说明待检样本中含有HIV-2抗体；当出现三条红线，即一条为控制线，一条为反应线1，另一条为反应线2时，也判断为阳性，说明待检样本中既含有HIV-1也含有HIV-2抗体，为HIV-1和HIV-2混合感染；当只出现一条红色控制线时，判断为阴性，说明待检样本中没有HIV抗体。若无红线出现，则说明实验无效。
本实用新型设计的人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体快速检测板使用操作步骤首先撕开装有HIV1+2抗体检测板的包装袋，取出检测板水平放置于实验台上，用塑料吸管吸2～3滴样本(70～100微升)加入样本孔中，经过约15～30分钟可观察到实验结果。
权利要求1.人类免疫缺陷病毒(HIV)1+2型抗体三条线快速检测板，由上盖、底板和试纸条组成，试纸条置于上盖和底板之间；在上盖上留有样本加入孔和反应观察孔，在底板上留有用于固定试纸条的挡墙；其特征在于试纸条以硝酸纤维膜为基体，在其一端，位于样本加入孔处固定有一层样本吸收材料，其上方处连接有一层含HIV抗原金标试剂和鼠IgG金标试剂的薄膜；在硝酸纤维膜的中间位置，位于反应观察孔区域，分三段分别包被有HIV-1、HIV-2抗原和羊抗鼠IgG抗体，即反应线1、反应线2和控制线，共三条线；在其另一端固定有吸水纸，用于吸附反应液。
专利摘要本实用新型属血液中抗体检测装置。控制HIV传播最有效的手段之一就是早发现、早隔绝。判断是否感染HIV,检测血液中有否HIV抗体。胶体金免疫实验广泛应用,有操作简单、省时、判断直观等优点;但不能区分感染HIV－1或HIV－2类型。为此设计了可区分感染类型、提高检测灵敏度的三条线检测板。该测板由上盖、底板和试纸条组成;在上盖上留有样本加入孔和反应观察孔;在底板上留有挡墙;试纸条分三部分,为①HIV抗原金标试剂和鼠IgG金标试剂,②包被有HIV－1、HIV－2抗原(即反应线1和反应线2)和作为控制线的羊抗鼠IgG抗体的硝酸纤维薄膜,③吸水纸。本测板适用于血清、血浆、全血样本中HIV1+2型抗体的快速检测,经国家药品生物制品检定所HIV参比品实验,符合率为100%。
文档编号G01N33/53GK2501049SQ0120785
公开日2002年7月17日 申请日期2001年3月13日 优先权日2001年3月13日
发明者李洲 申请人:天津三达生物医学工程有限公司