专利名称：猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及医疗设备，特别一种猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断试剂盒。二、 背景技术目前，用于猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断试剂盒很多，根据疫苗株所 缺失的糖蛋白可将鉴别ELISA分为gE-ELISA、 gC-ELISA和gG-ELISA，其 中gE-ELISA敏感性最高，应用较多。目前商业化应用的gE-ELISA试剂盒多采用细胞培养物来增殖病毒制备 抗原，这种方法的成本高，劳动强度大，还存在散毒的危险。而近年来报道 了用在杆状病毒系统中表达的gE蛋白作为抗原，虽然比前者安全，但也存在 成本高，操作繁琐等不足。大肠杆菌表达系统是人们应用最多，研究最为透彻的外源蛋白表达系统， 大肠杆菌(Escherichia coli)表达系统的主要优点是其遗传背景和生化特性清 楚、易于操作、生产迅速、培养基成本低、易于制备等。因此对于一些非糖 基化蛋白或只要求其抗原性的蛋白，大肠杆菌表达系统是一个极好的选择。 目前许多诊断试剂用的抗原都是由大肠杆菌表达的。但所用试剂盒多存在劳 动强度大，不安全，不易操作，且成本高的问题，难以有效推广应用。三、 实用新型内容针对上述情况，本实用新型之目的就是提供一种新型的猪伪狂犬病病毒 gE-ELISA诊断试剂盒，可有效克服现有设备不易操作，成本高，劳动强度大， 难以快速进行猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断的问题，其解决的技术方案是， 包括有盒体，盒体内向上开口隔置成前后两排存物槽，在两排存物槽的后部 有微量滴定板存放室，其室内放置有微量滴定板，所说的两排存物槽，其前 排依次为酶标记物存放槽、浓縮样品稀释液存放槽、浓縮样品洗涤液存放槽 和阳性对照试剂存放槽，后排依次是阴性对照试剂存放槽、TMB底物液存放 槽、终止液存放槽和酶标抗体稀释液存放槽，本实用新型结构简单，使用方 便，易于操作，工作效率高，劳动强度小，成本低，易推广应用，经济和社 会效益良好。四、
图l为本实用新型的结构立体图。图2为微量滴定板结构图。 五具体实施方式
以下结合附图对本实用新型的具体实施方式
作详细的说明。由图l、图2给出，本实用新型包括有盒体10，盒体10内向上开口隔置 成前后两排存物槽，在两排存物槽的后部有微量滴定板存放室ll，其室内放 置有微量滴定板l，所说的两排存物槽，其前排依次为酶标记物存放槽2、浓 縮样品稀释液存放槽3、浓縮样品洗涤液存放槽4和阳性对照试剂存放槽5， 后排依次是阴性对照试剂存放槽6、 TMB底物液存放槽7、终止液存放槽8 和酶标抗体稀释液存放槽9。所说的微量滴定板1为96孔12的长方形微孔板，每排12孔，共8排， 其长度与微量滴定板存放室11的长度相同，宽高于盒体10的高度，便于存 放或取出。该试剂盒表达的蛋白质为抗原包被微孔板或致敏乳胶，故无散毒 危险，安全可靠，该试剂盒可显著区分基因缺失疫苗注射猪与自然感染猪， 且成本低，操作简单，存物槽内各种液体均为已知的现有技术(即已有产品)， 本实用新型的使用情况是，将重组抗原和空白载体抗原用0.05mol/L碳酸盐 缓冲液(pH9.5)稀释至最佳浓度后隔列包被96孔酶标板，100uL/孔，37 。C放置lh后转移至4。C过夜。甩去包被液，用PBST洗板3次，每次2-3min。 然后加入200uL/孔的封闭液于37。C封闭2h。取出洗板同上，用封闭液将血 清样品稀释至最佳稀释度后，每孔加100uL，每份血清样品设两个重复，37 。C反应45min后。取出洗板同上，再加入兔抗猪酶标二抗，100uL/孔，37 。C反应45min后。取出洗板同上，然后加入底物溶液，避光反应3-5min后加 2mol/LH2S04终止反应，立即于ELISA仪上读出490nm处每孔吸光度值。同时 设定阳性对照孔、阴性对照孔和调零孔(调零孔同样包被抗原，不加血清和 二抗,但加TMB底物液和终止液)。经对建立的猪伪狂犬病病毒gE-ELISA 180 例猪血清检测，结果阳性率为72.5%;阴性率为27.5%。该试剂盒与进口诊断 试剂盒的符合率为96. 3%，取得了满意效果。本实用新型的设计成功，为猪伪狂犬病毒gE-ELISA检测提供了简单易操 作的设备，快速而准确，经济和社会效益显著。
权利要求1、一种猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断试剂盒，包括有盒体(10)，其特征在于，盒体(10)内向上开口隔置成前后两排存物槽，在两排存物槽的后部有微量滴定板存放室(11)，其室内放置有微量滴定板(1)，所说的两排存物槽，其前排依次为酶标记物存放槽(2)、浓缩样品稀释液存放槽(3)、浓缩样品洗涤液存放槽(4)和阳性对照试剂存放槽(5)，后排依次是阴性对照试剂存放槽(6)、TMB底物液存放槽(7)、终止液存放槽(8)和酶标抗体稀释液存放槽(9)。
2、 根据权利要求1所述的猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断试剂盒，其 特征在于，所说的微量滴定板(1)为96 L (12)的长方形微孔板，每排 12孔，共8排，其长度与微量滴定板存放室(11)的长度相同，宽高于盒 体(10)的高度。
专利摘要本实用新型涉及猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断试剂盒，可有效克服现有设备不易操作，成本高，劳动强度大，难以快速进行猪伪狂犬病病毒gE-ELISA诊断的问题，其解决的技术方案是，包括有盒体，盒体内向上开口隔置成前后两排存物槽，在两排存物槽的后部有微量滴定板存放室，其室内放置有微量滴定板，所说的两排存物槽，其前排依次为酶标记物存放槽、浓缩样品稀释液存放槽、浓缩样品洗涤液存放槽和阳性对照试剂存放槽，后排依次是阴性对照试剂存放槽、TMB底物液存放槽、终止液存放槽和酶标抗体稀释液存放槽，本实用新型结构简单，使用方便，易于操作，工作效率高，劳动强度小，成本低，易推广应用，经济和社会效益良好。
文档编号G01N33/569GK201107316SQ200720175109
公开日2008年8月27日 申请日期2007年12月6日 优先权日2007年12月6日
发明者吴凤笋, 唐桂芬, 李文刚, 樊淑华 申请人:郑州牧业工程高等专科学校