荧光细胞标记物的制作方法

专利名称：荧光细胞标记物的制作方法
技术领域：
本发明涉及荧光细胞标记物。本发明特别涉及含有荧光素，BODIPY，或者它们的衍生物之 一 的荧光团的荧光细胞标记物。
背景技术：
化合物荧光素，BODIPY，以及它们的衍生物包含荧光团。荧光素是水溶性的。使用荧光素作为细胞标记物要求其结合至活性基
团，例如异硫氰酸酯。异硫氰酸荧光素(FITC)的异硫氰酸酯基可以和蛋白
质的胺基反应。
FITC通过与表面表达蛋白质结合，用于标记细胞。被标记的细胞即可以通过荧光-激活细胞分选法(FACS)分类。
BODIPY的荧光团具有有利的超过荧光素的荧光团的光谱特性。BODIPY的衍生物还通过和表面表达蛋白质结合而用于标记细胞。
通过荧光团和表面表达蛋白质结合进行细胞标记可能影响细胞功能。此外，细胞膜两维中的荧光团的移动性必然依赖于所结合蛋白质的移动性。
因此需要有可供选择的细胞标记方法，其可以避免影响细胞功 負b , :Jf且提供细胞膜两维之中的荧光团的独立的移动性。
本发明目的在于，提供一种可供选择的细胞标记方法，或者至少提供一种有用的选择。

发明内容
本发明第一方面提供一种荧光细胞标记物，结构为F-SrS2-L其中
F是荧光团；SrS2是连接F至L的间隔团；和
L是选自二酰基-与二烷基-甘油酯的脂，包括甘油磷脂；
优选地，F选自下组荧光素、俄勒冈绿，宾夕法尼亚绿、东京绿、曙红、BODIPY、 BODIPY TR、 Alexa Fluor 350、 Alexa Fluor 405、 Alexa Fluor488、 AlexaFluor 568、 Alexa Fluor 594、德克萨斯红、萤光黄、四曱基若丹明和它们的衍生物的荧光团。最优选地，F选自下组焚光素，BODIPY和它们的衍生物的焚光团。
选择间隔团CSrS2)，以提供水溶性的细胞标记物。
优选地，该结构包括亚结构
<formula>formula see original document page 8</formula>
其中m与n各自为3至6; R!是O或者S;且*不为H。更优选地，m与n之和为6至9，且*是C或者N。
优选地，当F是荧光素或者其衍生物之一的荧光团，则Si是选自1,3-二氨基丙基、1，4-二氨基丁基或者1，5-氨基戊基衍生物的Q.5-二氨基烷基衍生物。更优选地，当F是荧光素或者其衍生物之一的荧光团，则Si是(:3.5-氨基烷基硫脲(aminoalkylthioureidyl)。最优选地，当F是焚光素或者其衍生物之一的荧光团，S,是5-((5-氨基戊基)硫脲。
优选地，当F是荧光素或者其衍生物之一的荧光团，则S2选自下组-CO(CH2)3CO- , -CO(CH2)4CO-(己二酸酉旨)，-CO(CH2)5CO-， 和-CO(CH2)5NHCO(CH2)5CO-。更优选地，当F是荧光素或者其衍生物之一的荧光团，则S2是-CO(CH2)4CO-(己二酸酯)。
优选地，当F是荧光素或者其衍生物之一的荧光团，该结构包括亚结
构<formula>formula see original document page 8</formula><formula>formula see original document page 9</formula>
其中m和n各自为3至5，且*不为H。
优选地，当F是BODIPY或者其衍生物之一的荧光团，则Si是 3-5-alkionyldiamine。更优选地，当F是BODIPY或者其衍生物之一的荧 光团，则Si是丙酰基乙二胺。
优选地，当F是BODIPY或者其衍生物之一的荧光团，则S2选自下
组-co(ch2)3co-， -(:0(<:112)4(:0画(己二酸酯)，和画co(ch2)sCO-。更优选
地，当F是BODIPY或者其衍生物之一的荧光团，则S2是-CO(CH2)4CO-(己 二酸酯)。
优选地，当F是BODIPY或者其衍生物之一的荧光团，该结构包括 亚结构
q<formula>formula see original document page 9</formula>
其中p， q和r各自为3至5，且*不为H。更优选地，p, q和r之和 为8。最优选地，p为2， q为2， r为4。
优选地，L是选自二酰基-和二烷基-甘油酯的脂，包括甘油磷脂。更 优选地，L选自下组二酰基甘油脂、磷脂酸酯、磷脂酰胆碱、磷脂酰乙 醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和双磷脂酰甘油，其衍生 自一种或多种反式-3-十六烯酸、顺式-5-十六烯酸、顺式-7-十六烯酸、顺 式_9-十六烯酸、顺式-6-十八碳烯酸、顺式-9-十八碳烯酸、反式-9-十八碳 烯酸、反式-ll-十八碳烯酸、顺式-ll-十八碳烯酸、顺式-ll-二十碳烯酸或 者顺式-13-二十二碳烯酸。更优选地，该脂衍生自 一种或多种顺式-不饱和 脂肪酸。最优选地，L选自下组1,2-邻-二油酰基-sn-丙三氧基-3-磷酯酰 乙醇胺(DOPE )， 1，2-邻-二硬脂酰基-sn -丙三氧基-3-磷酯酰乙醇胺(08 ￡) 和rac -1 ，2-二油酰基丙三醇(DOG )。
在第一方面的第一实施方式中，本发明提供一种具有如下结构的细胞标记物
HO、
其称为KODE-荧光素(I)。
在第一方面的第二实施方式中，本发明提供一种具有如下结构的细胞 标记物
其称为KODE -俄勒冈绿(IO。
在第一方面的第三实施方式中，本发明提供一种具有如下结构的细胞 标记物
HO,
其称为KODE画东京绿(III)。
在第一方面的第四实施方式中，本发明提供一种具有如下结构的细胞 标记物
10其称为KODE -宾夕法尼亚绿(IV)。
在第一方面的第五实施方式中，本发明提供一种具有如下结构的细胞 标记物
CH-
其称为KODE -BODIPY(V)。
典型地，M是H,但也可以被另外的一价阳离子例如Na+、 K+或者 NH/替代。
在本发明第二方面提供细胞标记方法，包括下列步骤
使细胞悬浮液与本发明第 一方面的细胞标记物接触。
本发明第三方面提供一种合并了本发明第 一方面的细胞标记物的细胞。
本发明第四方面提供一种通过本发明第二方面的方法生产的细胞。
在说明书和权利要求中 "BODIPY"表示化学文摘社(CAS )登记号为138026-71-8的化合物， CA索引名:硼，二氟[2-[(2H-吡咯-2-叉-KN)曱基-lH-pyrrolato-KN]-， (T-4)-(9CI )。
"荧光素"表示化学文摘社(CAS )登记号为518-47-8的化学结构，CA 索引名螺[异苯并呋喃-l(3H), 9'-[9H]站吨-3-酉同,3',6'-二羟基-,钠盐(l:2)。
"荧光团"表示荧光分子的具有荧光性能的亚结构或者部分。
"或者其衍生物之一，，表示化学结构的化学修饰，以提供具有基本上 相同物理-化学性质、以及改变的光谱特性的荧光团。
"水溶性的"表示细胞标记物在不存在有机溶剂或者洗涂剂的情况下 与水或者盐水(例如PBS)接触时，可形成稳定的单相系统，术语"溶液"具有相应含义。 发明详述
国际申请PCT/NZ2005/000052(公开号WO 2005/090368)的说明书描 述了水溶性的合成分子，其为F-SrS2-L结构。
在这些结构中，F是糖类，其自发且稳定地合并入的脂质双层，所述 脂质双层包括细胞膜。
该国际申请的说明书描述的优选结构包含亚结构
其中11=3至5， X是H或者C，且*不为H。
典型地，M是H，但也可以被另外的一价阳离子例如Na+、 K+或者 NH4+替代。
F是本发明结构中的荧光团，具有不同于糖类的物理化学性质。选择 间隔团(S,-S2)，以提供易于分散于水性媒介物，例如盐水中的结构。
不希望受理论限制，据信本发明的细胞标记物可通过它们的二酰基脂 尾部合并入细胞膜的脂质双层中。因此荧光团部分被表达在细胞表面。本 发明的细胞标记物可用于标记细胞，而不会改变细胞表面表达的蛋白质。
表达在细胞表面的蛋白质介导细胞功能的可能性降低。此外，细胞标 记物均匀分布在脂质双层的两维中的可能性增加。焚光团的移动性不取决 于细胞表面表达的蛋白质的移动性，荧光团可能另外结合至所述蛋白质。
预期可产生其他的优点，因为细胞标记物可以容许与蛋白质功能和循 环无关的细胞膜动力学的研究。使用本发明的细胞标记物标记的细胞仍然 可以通过传统方法识别，并用于建立生物学方法，例如荧光激活细胞分选 (FACS)系统。
对于KODE-荧光素(I)的制备，FITC首先与二胺例如1,5-戊二胺(尸胺) 结合。然后4吏结合的FITC与按照国际申请PCT/NZ2005/000052所述方法 制备的活化脂质(L-A)反应。
许多荧光化合物可商业获得，如尸胺衍生物。可以制备F为表1所示 焚光团之一的细胞标记物。<formula>formula see original document page 13</formula>荧光团 名称
俄勒冈绿 (5-异构体)
宾夕法尼亚绿 (5-异构体)
东京绿 (5-异构体)<formula>formula see original document page 15</formula><formula>formula see original document page 16</formula>荧光团
名称
H，C CH,
〕，H
H03S
Alexa Fluor 594 (5-异构体)
)，H
德克萨斯红
(5-异构体)
安光黄<formula>formula see original document page 18</formula>荧光团 名称
(H3C)2N、
四曱基若丹明
(5-异构体)
(H3C)2N
表l.荧光团(表示为中性电荷的质子化物质)。
对于KODE-BODIPY(V)的制备，BODIPY可以选择性地与alkionyl diamine例如3-丙酰基乙二胺(BODIPY FL EDA)结合。然后使结合的 BODIPY与才艮据国际申请PCT/NZ2005/000052的说明书所述方法制备的 活化脂质(L-A)反应。
本发明的示范性实施方式将参照附图进行描述。


图1: 接触细胞标记物(I)之后用荧光显孩i镜在470纳米，250x》文大 倍数下看到的红血球。
图2:细胞标记物KODE-荧光素(I)的结构。
图3:细胞标记物KODE-俄勒冈绿(II)的结构。
图4:细胞标记物KODE -东京绿(III)的结构。
图5:细胞标记物KODE-宾夕法尼亚绿(IV)的结构。
图6:细胞标记物KODE -BODIPY(V)的结构。
图7:细胞标记物KODE-BODIPY (V)的IH-NMR谱。
具体实施例方式
制备活化的1,2-邻-二硬脂酰基-sn-丙三氧基-3-磷酯酰乙醇胺(DSPE) 和活化的1,2-邻-二油酰基-sn-丙三氧基-3-磷酯酰乙醇胺(DOPE)(L-A)。向二(N-羟基琥珀酰基)己二酸酯(A)(70毫克，205pmol)的干N，N-二曱 基曱酰胺(1.5ml)溶液加DOPE或者DSPE (L)(40jimol)的氯仿(1.5ml )溶液， 随后加三乙胺(7pL)。混合物在室温下保持2小时，然后用乙酸中和，并 在真空中部分浓缩。
残余物柱色谱法(SephadexLH-20,l:l氯仿-曱醇，0.2%乙酸)得到无色 浆状的活化脂质(L-A)(37mg ，95%); TLC(氯仿-曱醇-水,6:3:0.5): Rf=0.5 (DOPE-A)， Rf =0.55 (DSPE-A)。 !H NMR (CDC13/CD30D, 2: 1) ， 5 :
DSPE-A - 5. 39 (m, 1H, -OCH2-CM)-CH20-) ， 4.53 (dd， 1H， J=3. 42， J=11.98， -CC00HC#-CH0-CH20-) ， 4.33 (dd, 1H， J=6. 87， 98, -CCOO沉H-CHO-CH20-), 4.2 3 (m, 2H， PO-CA-CH2-NH2) ， 4.15 (m， 2H， , 3,61 (m， 2H， PO-CH2-CA-NH2) ， 3.00 (s， 4H， ONSuc) ， 2.81 (m， 2H, -C私一CO (Ad)， 2.48 (m， 4H， 2x(-C仏一C0), 2.42 (m, 2H， 一C私-CO (Ad)， 1.93 (m, 4H, C0CH2CA ), 1.78 (m, 4H， 2x(C0CH2CD, 1,43， 1.47 (2 bs,權，20CH2)， 1,04 (m, 6H， 2CH3).
DOPE-A-5. 5 (m， 4H， 2x (-C^C#-), 5.39 (m， 1H， -0CH2-CtTO-CH20-), 4.58 (dd， 1H， J=3. 67， J=ll. 98， -CC00HC#-CHO-CH20-) ， 4.34 (dd, 1H， J=6.61， J=11.98， -CC00沉H-CH0-CA0-) ， 4.26 (m， 2H， PO-C^-CH2-NH2)， 4.18 (m， 2H, -C"厂OP), 3.62 (m, 2H, P0-CH「dNH2), 3.00 (s, 4H， ONSuc), 2.8 (m, 2H， -dCO (Ad) ， 2.50 (m， 4H, 2x( ， 2.42 (m, 2H, (Ad)， 2.17 (m， 8H， 2x (_dCH=CH-C〃厂)，1.93 (m， 4H， C0CH2C& ), 1.78 (m， 4H， 2x(COCH2CD, 1,43， 1.47 (2 bs，權， 20CH2), 1. 04 (m, 6H， 2CH3).
DOPE-A与5-((5-氨基戊基)硫脲)荧光素(尸胺焚光素)的缩合。 向活化DOPE (L-A)(5mg， 5.20mol)的N，N-二甲基曱酰胺(0.5ml)溶液 加入3mg (4.6pmol )荧光素尸胺二氢溴化物盐和5pl三乙胺。混合物在室 温下保持2小时，然后加入1(^13%的NH3水溶液，混合物在室温下保持1小时。
混合物柱色i普法(Sephadex LH-20,1:1氯仿-曱醇，随后硅胶，乙酸乙 酯-异丙醇-水，6:3:1)得到4.2mg(67。/o)KODE-荧光素(1)， Rf0.5(乙酸乙酉旨-异丙醇-水，6:3:1)。
^NMR(CDC13/CD30D， 1:1)， 5:
KODE-荧光素(I) -8.38 (bs, 1H，焚光素的芳香质子)，8.15 (dd, 1H, /-1.7， /=8. 3，荧光素的芳香质子)7. 30(d， 1H， /=8. 3，荧光素的芳香 质子)，6.87 (m， 4H，荧光素的芳香质子)，6.72 (dd， 2H， /=2. 4， /=8. 8， 荧光素的芳香质子)，5.50 (m， 4H, 2x (-C旦-C旦-)，5， 38 (m， 1H, -0CH2-CH0—CH20-) ， 4.58 (dd， 1H， /=6. 6, 7^=11.8，旦HC-O-C (0)-) ， 4.34 (dd, 1H, /=3. 2， ；=11.8, H旦C-O-C (0) -) ， 4.14 (m， 2H, -OCH-Cl-O-P-) (4. 1 (m, 2H，-P-O-C^-CHr"NH-) 3. 80(m， 2H， N-CH2 (CH2) 3-qym-C=S) 3,39 and 3.58 (2m， 2x2H, N- CI^CHz-O-P- and N-CH2- (CH2) 3-CH2NH-C=S) 2. 48 (m， 4H, 2x (-C&-CO) ， 2.39 (m， 4H， COCI^C&C&CI^CO) ， 2.19 (m, 8H, 2x CH=CH-) ， 1.84 (m， 2H，
焚光素尸胺)，1.8 (m, 10H， COC&Cl^q^C&CO, 2x (COCHzC^—, and C^— 荧光素尸胺)，1.62 (m， 2H, 荧光素尸胺)1,42， 1.46 (2 bs, 40H,
20 CH2), 1. 05 (m， 6H, 2 CH3).
KODE-荧光素(I)与细胞膜的结合
KODE-荧光素(I)易于和红血球的膜结合。当浓度大于O.lmg/ml的分 子分散体接触红血球的悬浮液时，观察到分子插入。
使细胞发出强荧光的介质用来指示分子在细胞膜上的均匀分布(图 1)。当细胞存储于黑暗中时，该结合和分布在至少40天期间显得稳定。
实施例2
如实施例1所述，制备活化1,2-邻-二油酰基-sn-丙三氧基-3-磷酯酰乙 醇胺(DOPE)(L-A)。
DOPE-A与4，4-二氟隱5,7-二曱基-4陽bora-3a，4a画二氮隱s-indacene-3-丙酰基乙二胺，盐酸盐(BODIPYFLEDA)的缩合
向 15mg(15.5pmo1)活化 DOPE 的 CH2Cl2(0.5ml)溶液添加5mg(13.5pmol)BODIPY FL EDA的N，N-二曱基曱酰胺(0.3ml)溶液，以及5pl三乙胺。混合物在室温下保持2小时。
混合物柱色谱法(Sephadex LH-20，1:1 氯仿-曱醇)得到14.2mg(75%)KODE-BODIPY(I) ， EtsN-盐;分子量1289.6， Rf0.3(乙酸乙酯_异丙醇_水，6:3:1)。
^ NMR (CDC13/CD30D， 1:1): 5 7.40 (s， 1H, B0DIPY的芳香质子)，7.12 (d， 1H， /=3. 8 B0DIPY的芳香质子)，6.47 (d, 1H, /=3. 8 B0DIPY的芳香质子)，6.32 (s, 1H, B0DIPY的芳香质子)，5.50 (m, 4H，2x(-CpC旦-)，5.38 (m, 1H， -0CH2-C旦0-CH20-) ， 4.58 (dd， 1H, /=3. 2，/，=11.8， pC-0-C(0)-)， 4.33 (dd， 1H, J=6. 6, ;=11.8， H旦C一0-C (0)—):4.16 (t， 2H， /=5. 6， P-0-C旦2-CH广NH-), 4.1 (m, 2H， - -0CH-C旦广0-P-)，3.60 (t, 2H， P-0-CH2-C旦广NH-) ， 3.46, 3.42 and 2. 8 (3m， 4H， 2H， 2H，-C旦2-C旦广C (0) NH (C旦2) 2-NH of B0DIPY), 2.70 (s， 3H, CH3 of B0DIPY )，2.48 (m， 4H， 2x (-CH2-C0), 2.45 (s， 3H， CH3 of B0DIPY ) ， 2.37 (m, 4H，C0C!|2CH2CH2qi2C0) ， 2.I9 (m, 8H， 2x (-qi2-CH=CH-C旦广)，1.8 (m， 8H，COCH2CH2Cli2Cli2CO， 2x(C0CH2C旦2-))， 1,46, 1.43 (2 bs,權，20CHJ, 1.05(m， 6H， 2CH3); 3.31 (q, 6H， J=7. 4， 3xCH2 of Et3N), 1.50 (t， 9H, J=7. 4，3xCH3 of Et3N).
尽管本发明已经通过示范性的实施方式进行描述，应当理解，在不脱离本发明范围的前提下可以作出变化和改进。此外如果具体的特征有已知的等价物存在，此类等价物如同特别提及一般合并于说明书中。
权利要求
1、如下结构的荧光细胞标记物F-S1-S2-L其中，F是荧光团；S1-S2是连接F至L的间隔团；和L是选自二酰基-与二烷基-甘油酯的脂，包括甘油磷脂。
2、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F选自下组荧光素、 俄勒绿、宾夕法尼亚绿、东京绿、曙红、BODIPY、 BODIPY TR、 Alexa Fluor 350、 Alexa Fluor 405、 Alexa Fluor 488、 Alexa Fluor 568、 Alexa Fl匿594、 德克萨斯红、萤光黄、四曱基若丹明和它们的衍生物的荧光团。
3、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F选自下组焚光素、 BODIPY和它们的书f生物的荧光团。
4、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中该结构包括亚结构〇 〇f{ \g (CH2)n其中，m与n各自为3至6， R!是O或者S，且*不为H。
5、 根据权利要求4的荧光细胞标记物，其中m和n之和为6至9， 且*不为C或者N。
6、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是荧光素或者其衍生 物之一的荧光团，且Si是Cw-氨基烷基衍生物，选自1,3-二氨基丙基， 1,4-二氨基丁基，或者1,5-氨基戊基衍生物。
7、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是荧光素或者其衍生物之一的荧光团，且S!是C3.5-氨基烷基硫脲。
8、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是荧光素或者其衍生 物之一的荧光团，且S!是5-((5-氨基戊基)硫脲。
9、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是荧光素或者其衍生 物之一的荧光团，且S2选自下组-CO(CH2)3CO-， -(20(012)40>(己二 酸酯)，-CO(CH2)5CO-—-CO(CH2)5NHCO(CH2)5CO-。
10、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是荧光素或者其衍 生物之一的荧光团，且S2是-CO(CH2)4CO-(己二酸酯)。
11、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是荧光素或者其衍 生物之一的荧光团，该结构包括亚结构S 0 0其中m和n各自为3至5，且*不为H。
12、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是BODIPY或者其 衍生物之一的荧光团，且Si是C3.5-alkionyldiamine。
13、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是BODIPY或者其 衍生物之一的荧光团，且Si是丙酰基乙二胺。
14、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是BODIPY或者其 衍生物之一的焚光团，且S2选自下组-CO(CH2)3CO-，《0(012)4(:0-(己 二酸酯)和-CO(CH2)5CO-。
15、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是BODIPY或者其 衍生物之一的荧光团，且S2是-CO(CH2)4CO-(己二酸酯)。
16、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中F是BODIPY或者其 衍生物之一的焚光团，该结构包括亚结构O 0 0其中p， q和r各自为3至5，且*不为H。
17、根据权利要求16的荧光细胞标记物，其中p, q和r之和为8。
18、 根据权利要求17的荧光细胞标记物，其中p是2， q是2和r是4。
19、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中L是选自二酰基-与二 烷基-甘油酯的脂，包括甘油磷脂。
20、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中L选自下组衍生自 一种或多种反式-3-十六烯酸、顺式-5-十六烯酸、顺式-7-十六烯酸、顺式 -9-十六烯酸、顺式-6-十八碳烯酸、顺式-9-十八碳烯酸、反式-9-十八碳烯 酸、反式-ll-十八碳烯酸、顺式-ll-十八碳烯酸、顺式-ll-二十碳烯酸或 者顺式-13-二十二碳烯酸的二酰基甘油脂、磷脂酸酯、磷脂酰胆碱、磷脂 酰乙醇胺、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰甘油和双磷脂酰甘油。
21、 根据权利要求20的焚光细胞标记物，其中所述脂衍生自一种或 多种顺式不饱和脂肪酸。
22、 根据权利要求1的荧光细胞标记物，其中L选自下组1，2-邻-二油酰基-sn -丙三氧基-3-磷酯酰乙醇胺(DOPE ), 1J-邻-二硬脂酰基-sn -丙三氧基-3-磷酯酰乙醇胺(DSPE )和rac-1, 2-二油酰基丙三醇(DOG )。
23、荧光细胞标记物，具有如下结构:<formula>formula see original document page 4</formula>称为KODE-荧光素(I)，其中M通常为H，但是可以被其它一价阳离 子例如Na+、 K+或者NH4+替代。
24、荧光细胞标记物，具有如下结构<formula>formula see original document page 4</formula>称为KODE-俄勒冈绿(II)，其中M通常为H,但是可以被其它一价 阳离子例如Na+ 、 K+或者NH/替代。
25、荧光细胞标记物，具有如下结构称为KODE-东京绿(III)，其中M通常为H,但是可以被其它一价阳 离子例如Na+、 K+或者NHU+替代。
26、荧光细胞标记物，具有如下结构:称为KODE-宾夕法尼亚绿(IV)，其中M通常为H,但是可以被其它 一<介阳离子例如Na+ 、 K+或者NH4+替代。
27、荧光细胞标记物，具有如下结构:<formula>formula see original document page 5</formula>称为KODE-BODIPY(V)，其中M通常为H，但是可以被其它一 价阳离子例如Na+ 、 K+或者NH4+替代。
28、 标记细胞或者多-细胞结构的方法，包括下列步骤 在足以使标记物结合入细胞或者多-细胞结构的膜的温度下，使细胞或者多-细胞结构的悬浮液接触权利要求1的细胞标记物一段时间。
29、 结合权利要求1的细胞标记物的细胞或者多-细胞结构。
30、通过权利要求28的方法生产的细胞或者多-细胞结构。
全文摘要
描述了荧光细胞标记物的制备和用途，该荧光细胞标记物具有F-S₁-S₂-L结构，其中F是荧光团，S₁-S₂是连接F至L的间隔团，L是二酰基脂。
文档编号G01N33/53GK101679849SQ200780037489
公开日2010年3月24日 申请日期2007年9月6日 优先权日2006年9月6日
发明者叶连娜·科尔恰金娜, 尼乔莱·博温, 斯蒂芬·亨利 申请人:科德生物工程有限公司