专利名称：一种同时检测黄曲霉毒素b1和赭曲霉毒素a的检测卡的制作方法
技术领域：
本发明涉及检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的检测器具，特别是一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的检测卡及其检测样品的处理 方法。
背景技术：
真菌的寄生和真菌毒素的产生，严重影响农作物的产量，降低农产品、粮食、词料品质，造成巨大经济损失。真菌毒素中尤以黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒 素A对人体健康危害较大。黄曲霉毒素(anatoxins)是由生长在食物及饲料中的黄曲霉菌、曲霉菌 等代谢产生的一组化学结构类似的真菌毒素。在天然污染的食品中以Bl最多见， 毒性最强。许多国家在玉米、花生及花生油、花生饼、花生酱、棉籽饼、山核 桃、无花果、榛子、可可豆、杏仁、奶粉、牛奶、水牛奶、酸奶、奶酪、大米 等都曾查出黄曲霉毒素。黄曲霉毒素已被证明对动物的肝脏组织和器官具有很大的危害，急性中毒 表现为发热、呕吐、食欲不振、黄疸，严重者出现腹水、下肢浮肿、肝大、脾 大，常发生突然死亡。黄曲霉毒素对许多动物有强烈的致癌性，以肝癌为主。 1993年黄曲霉毒素被世界卫生组织(WHO)的癌症研究机构划定为l类致癌物，是 一种毒性极强的剧毒物质。我国各种主要食品中黄曲霉毒素B1允许含量如下 玉米、花生、花生油、坚果和干果(核桃、杏仁)、玉米及花生仁制品不得超过 20ppb。大米、其它食用油(香油、菜子油、大豆油、葵花油、胡麻油、茶油、 麻油、米糠油、棉籽油)不得超过10ppb。其它粮食(麦类、面粉、薯干)、发 酵食品(酱油、食用醋、豆豉、腐乳制品)不得超过5ppb。赭曲霉毒素A是温暖地区最重要的仓贮毒素。主要污染谷物、豆类、麦类及玉米。赭曲霉毒素A (OchratoxinA, OA)的危害主要表现为很强的肾脏毒性， 并有致畸性和致癌性，人体摄入后主要导致肾脏病变，是一种慢性进行性疾病 往往造成死亡。世界卫生组织建议(1991),每公斤谷物及其产品中的一般最髙 限量是5微克。有些国家(包括丹麦和瑞典)也把这作为法定的最高限量。目前，现有技术对于黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A的检测主要依赖色谱和 质谱技术，以及酶免疫检测试剂盒，也有单独检测黄曲霉毒素Bl的检测卡，但 到目前为止，没有同时检测这两种物质的检测器具。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉 毒素A的检测器具，克服现有技术只能逐一单独检查的缺陷。本发明的技术方案是一种同时检测黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A的检测卡 及其检测样品的处理方法。黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A检测卡，它是在长条 扁平薄壳状的检测卡外壳内设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔， 其特征在于测试条是由支承背板上粘贴四种元件组成支承背板中部粘贴硝酸 纤维素膜，支承背板一端部上粘贴吸水膜，另一端部上粘贴样品垫，吸水膜内 端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜一端搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜 的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜，胶体金膜是含抗黄曲霉毒素Bl和 抗赭曲霉毒素A单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜，硝酸纤维 素膜上横向有三条间隔开的显示印迹带， 一条是含黄曲霉毒素B1蛋白质偶联物 的检测带，另一条是含赭曲霉毒素A蛋白质偶联物的检测带，第三条是质孔带， 含抗兔抗体或抗鼠抗体；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸 纤维素膜正对检测窗孔。采用上述黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A检测卡，检测样品可以是大米、玉 米、小麦、大豆、花生等粮食作物和加工的食品、食用油、以及发酵食品、婴儿代乳食品、饲料原料、配合词料、中药原料和中成药等样品。样品的处理方法是取1克粉碎的固态样品或液态样品，加入含有3毫升样品抽提液的试管中，震荡混合反应10分钟。静置5分钟后，轻轻吸取上清液350ul,加入样品稀释液，混合后用于测定。本发明的优点是能同时检测出大米、玉米、小麦、大豆、花生等粮食作物和加工的食品、食用油、以及发酵食品、婴儿代乳食品、饲料原料、配合饲料、中药原料和中成药等样品中含有的黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A，且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。
图1是黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A检测卡外壳及测试条在外壳内的安置图。图2是黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A检测卡的测试条结构示意图。 图3是测试条的硝酸纤维素膜上显示印迹带示意图。 本发明结合具体实施例参见附图进一步说明如下一种黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A检测卡，它是在检测卡外壳1中设置测 试条2，检测卡外壳1的结构及测试条2的设置参见附图1，检测卡外壳1为长 条扁平薄壳状外壳，长7cm，宽2cm，厚0. 5cra，薄壳壁厚0. lcm，由工程塑料 制成。检测卡外壳1由壳盖与壳座两半联接构成，在检测卡外壳1壳盖上有检 测窗孔3和加样孔4。测试条2放置在检测卡外壳1的壳座内。测试条2是多层结构的窄条薄片，片长约6.0cm，片宽约0.4cm，厚度小于 2.5md。测试条2是多层结构底层是支承背板5，为聚氯乙烯塑料薄片，厚约 0.5咖，长6.0cm，宽0.4cm;支承背板5中部粘贴硝酸纤维素膜6，硝酸纤维素膜厚0.5mm,长2-2.5cm，宽0. 4cm。硝酸纤维素膜6上有三条间隔开的横向显 示印迹带，参见附图3，三条显示印迹中， 一条是检测带IO，含黄曲霉毒素B1 偶联物，另一条是检测带ll，含赭曲霉毒素A蛋白质偶联物，第三条是质孔带 12，含抗兔抗体或抗鼠抗体。支承背板5—端部上粘贴吸水膜9，支承背板5另 一端部上粘贴样品垫8，吸水膜9内端与样品垫8内端各自分别与硝酸纤维素膜 6 —端搭接，在样品垫8与硝酸纤维素膜6的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶 体金膜7，胶体金膜7是含抗黄曲霉毒素Bl和抗赭曲霉毒素A单克隆抗体或多 克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜。胶体金膜7厚0. 5-0. 8mm，长0. 5-0. 6cm， 宽0.4cm。样品垫8厚0.5-0.8mm，长2cm，宽0. 4cm。吸水膜9厚0. 5-0. 8咖， 长1.6-2cm，宽0.4cm。胶体金膜7、样品垫8及吸水膜9与硝酸纤维素膜6搭 接长度为0.1-0. 2cm。吸水膜9材料是吸水纸，样品垫8材料是吸水玻璃纤维膜。 本发明黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A检测卡用于检测大米、玉米、小麦、 大豆、花生等粮食作物和加工的食品、食用油、以及发酵食品、婴儿代乳食品、 饲料原料、配合饲料、中药原料和中成药等样品中的黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒 素A。样品的处理方法是取1克粉碎的固态样品或液态样品，加入含有3毫升 样品抽提液的试管中，震荡混合反应10分钟。静置5分钟后，轻轻吸取上清液 350ul，加入样品稀释液，混合后用于测定。使用黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A检测卡进行检测时，先将待检测的样品 液从加样孔4中滴注入黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A的测试条2的样品垫8， 由于虹吸作用原理，带动待检测的样品液及胶体金膜7所含的抗黄曲霉毒素Bl 和赭曲霉毒素A单克隆或多克隆抗体胶体金标记物一起向硝酸纤维素膜6扩散， 5-10分钟内观察结果。检测卡的主要反应是免疫学的抗原和抗体反应，在硝酸纤维素膜上迁移的胶体金标记的抗体，在测试带上分别与含黄曲霉毒素B1蛋白质偶联物、赭曲霉 毒素A蛋白质偶联物，以及质孔带抗兔抗体或抗鼠抗体反应，形成棕红色条带。 若样品中相应的待检黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A都高于允许值，当样品加入 后即与相应的抗体发生反应，而不会与相应的检测带所含的黄曲霉毒素B1蛋白 质偶联物、赭曲霉毒素A蛋白质偶联物反应，从而不显色。主要反应的结果有 以下5种情况1、 如果显示检测带IO、 11和质孔带12同时显现棕红色印迹带，表示检测 结果为阴性，说明被检测样品中黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A低于允许值。2、 反之，检测带10、 11不显示颜色，只有质孔带12同时显现棕红色印迹， 检测结果为阳性，表明被检测样品中黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A都高于允许 值。3、 如果检测带10不显示颜色，检测带11和质孔带12同时显现棕红色印 迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中黄曲霉毒素B1高于允许值，而赭曲霉 毒素A低于允许值。4、 如果检测带11不显示颜色，检测带10和质孔带12同时显现棕红色印 迹，检测结果为阳性，表明被检测样品中赭曲霉毒素A高于允许值，而黄曲霉 毒素Bl低于允许值。5、 如果检测带IO、 11和质孔带12均不显色，则表明检测试条失效。
权利要求
1、一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的检测卡，它是在长条扁平薄壳状的检测卡外壳内设置测试条，检测卡外壳表面有检测窗孔和加样孔，其特征在于测试条是多层结构的窄条薄片，在支承背板上粘贴四种元件组成支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，支承背板一端部上粘贴吸水膜，另一端部上粘贴样品垫，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜一端搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜，胶体金膜是含抗黄曲霉毒素B1和抗赭曲霉毒素A单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜上横向有三条间隔开的显示印迹带一条是含黄曲霉毒素B1蛋白质偶联物的检测带，另一条是含赭曲霉毒素A蛋白质偶联物的检测带，第三条是质孔带，含抗兔抗体或抗鼠抗体；测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。
2、 采用权利要求1中所述的同时检测黄曲霉毒素Bl和赭曲霉毒素A的检测卡， 其检测样品的处理方法是取1克粉碎的固态样品或液态样品，加入含有3毫 升样品抽提液的试管中，震荡混合反应10分钟，静置5分钟后，轻轻吸取上清 液350ul，加入样品稀释液，混合后用于测定。
全文摘要
一种同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A的检测卡，外壳内有测试条，测试条由支承背板中部粘贴硝酸纤维素膜，两端部上分别粘贴吸水膜和样品垫，其内端各自分别与硝酸纤维素膜一端搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，之间夹置粘贴一段胶体金膜，它是含抗黄曲霉毒素B1和抗赭曲霉毒素A单克隆抗体或多克隆抗体胶体金标记物的玻璃纤维膜；硝酸纤维素膜上横向有一条含黄曲霉毒素B1蛋白质偶联物的检测带，一条含赭曲霉毒素A蛋白质偶联物的检测带，一条含抗兔抗体或抗鼠抗体的质孔带，样品垫和硝酸纤维素膜分别正对外壳上的加样孔与检测窗孔。本发明的优点是能同时检测黄曲霉毒素B1和赭曲霉毒素A，检测快速、方便、灵敏、准确，且节省费用。
文档编号G01N33/558GK101403754SQ20081014363
公开日2009年4月8日 申请日期2008年11月17日 优先权日2008年11月17日
发明者坚 周 申请人:坚 周