专利名称：一种红树木榄中总黄酮含量的测定方法
技术领域：
本发明涉及一种黄酮类物质含量的测定方法，特别是一种红树木榄中总黄 酮含量的测定方法。
背景技术：
黄酮类化合物是自然界广泛存在的一大类物质，广泛分布于植物界。绝大 多数植物都能合成黄酮类化合物。黄酮类化合物的结构特点是具有C6-C3-Ce的基 本骨架，并根据中间吡喃环的不同氧化水平和两侧A、 B环上的各种取代基的不 同，分为不同类型，主要包括黄酮类、黄酮醇类、异黄酮类、黄垸酮类、査耳 酮、异黄烷酮、双黄酮类等。在天然植物中，绝大多数黄酮类化合物以苷的形 式存在，少数以游离形式存在。
黄酮类化合物具有多种重要的生理功能。如清除自由基作用、延缓衰老作 用、抗菌作用、抑制癌细胞的生长或抗癌作用、解痉挛作用、降低血压作用、 女性激素样作用、抑制胆碱酷酶作用、扩张冠状动脉的作用等。此外，大量研 究还表明黄酮类化合物有降血脂、止血、镇咳祛痰、降低血管脆性、抑制血小 板聚集等作用。基于黄酮类化合物的诸多重要生理功能，对黄酮类化合物的研 究备受关注，显示出活跃的研究领域，尤其其分析测定方法的研究。
目前分析黄酮类化合物的方法主要有分光光度法、荧光光度法、高效液 相色谱法、毛细管电泳法、化学发光法、极谱法和色谱-质谱联用法等。使用光 度法测定不同试样中黄酮含量的最多。但光度法中存在显色稳定性问题，影响 测定结果的准确度。其他方法如高效液相色谱法等，具有分离效果好、分析速 度快、灵敏度高等优点，但设备昂贵，不容易普及，使用受到限制。所以寻找 探索操作相对简单、容易普及的有效的黄酮类化合物的测定方法具有重要的意 义。
我们在研究中发现，采用单扫描示波极谱法测定黄酮类化合物，其极谱波 峰形完整、体系稳定，灵敏度高，操作简单，应用于木榄叶黄酮类物质提取液 中总黄酮的测定，选择性强，干扰少，重复性好，测定结果准确可靠。
发明内容
本发明的目的是提供一种准确、简单、可操作性强的 定红树木榄中总黄 酮含量的方法。本发明可由以下方法来实现 (1)采集红树木榄叶，清水洗净，置阴凉通风处晾干，粉碎，以60%的乙 醇为提取剂，料液比l : 20，在85'C下水浴提取2h，连续重复提取2次，合并提 取液。(2)将提取液经聚酰胺柱层析分离，分离液进行旋转蒸发浓縮制得待测 液，供总黄酮含量测定。(3)以芦丁为对照品，用甲醇配制成芦丁储备液，再 适当稀释作为戸丁标准工作液。以硼砂缓冲溶液(pH=9.18)为底液，分别对芦 丁标准工作液和由(2)制得的待测液在该底液中进行极谱线性扫描，得到极谱 图，比较二者的极谱图，从而得到其极谱特性。(4)配制芦丁梯度系列标准溶 液，以硼砂为底液，在与(3)相同的条件下，分别测定标准系列溶液的峰电流， 以芦丁溶液浓度为横坐标，峰电流为纵坐标，绘制标准曲线。(5〉取一定量由 (2)制得的待测液，在与以上相同的条件下测定其极谱波的峰电流，利用标准 曲线，得到对应此待测液中总黄酮的浓度，进而求得木榄叶中总黄酮的含量。 本发明具有如下特点.-
1、 方法操作简单。在使用本发明测定黄酮含量中，除了底液硼砂外，不需 另加其他任何试剂，步骤少，简捷方便。
2、 选择性好，干扰少。在样品的极谱波附件无其他杂峰，且峰形完整。
3、 体系稳定，极谱波峰形稳定。
4、 线性范围较宽。
图l为本发明红树木榄叶总黄酮提取液的极谱图。
具体实施方式
实施实例l
红树木榄中总黄酮的测定
(1) 将采集来的红树木榄叶，清水洗净，置阴凉通风处晾干，粉碎，作为木 榄叶分析试样。以60%的乙醇为提取剂，料液比l : 20，在85。C下水浴提取2h， 连续重复提取2次，合并提取液经聚酰胺柱层析分离，旋转蒸发浓縮制得待测液，
供总黄酮含量测定用。
(2) 以芦丁为对照品，用甲醇配制成10.0mg/m啲芦丁储备液，再稀释至l.O mg/ml，作为芦丁标准工作液。以硼砂缓冲溶液(pH=9.18)为底液，分别对芦 丁标准工作液和由(1)制得的待测液在该底液中进行极谱线性扫描，得到极谱 图，极谱波峰电位为-1.636V(wSCE)，而且峰电流的大小随芦丁含量的增大而 增大，并呈良好线性关系。(3) 取小同量1.0mg/ml芦丁标准工作液，配制成梯度系列标准溶液，以硼砂 为底液，在与(2)相同的条件下，分别测定标准系列溶液的峰电流，以芦丁溶液 浓度为横坐标，峰电流为纵坐标，绘制标准曲线。
(4) 取一定量由(1)制得的待测液，在与以上相同的条件下测定其极谱波 的峰电流，利用标准曲线，得到对应此待测液中总黄酮的浓度，进而求得木榄 叶中总黄酮的含量。
权利要求
1、一种红树木榄中总黄酮的测定方法，其特征在于(1)以干燥粉碎的木榄叶为分析试样，60％的乙醇为提取剂，料液比1∶20，在85℃下水浴提取2h，连续重复提取2次，提取液经聚酰胺柱层析分离后，以芦丁为对照品，考察其极谱特性；(2)以芦丁为对照品，配制标准系列，采用标准曲线法测定木榄叶提取分离液中总黄酮的含量。
2、 据权利要求1所述的一种红树木榄中总黄酮的测定方法，其特征在于-对芦丁对照品及提取液分别进行单扫描示波极谱特性考察，峰电位为-1.636 V(vs'SCE)。
3、 据权利要求2所述的一种红树木榄中总黄酮的测定方法，其特征在于 其特征在于该极谱特性要求的介质为PH=9. 18的硼砂缓冲溶液。
4、 据权利要求2所述的一种红树木榄中总黄酮的测定方法，其特征在于 极谱波峰电流与芦丁含量在0. 06 1. 2mg L—i范围内呈良好的线性关系。
全文摘要
一种红树木榄中总黄酮含量的测定方法，取芦丁标准工作液，以硼砂缓冲溶液为底液，进行线性扫描得到极谱图，峰电流的大小随芦丁含量的增大而增大，并呈良好的线性关系。取不同量芦丁标准工作液，配制成梯度系列标准溶液，以硼砂为底液，分别测定标准系列溶液的峰电流，以芦丁溶液浓度为横坐标，峰电流为纵坐标，绘制标准曲线。取一定量由红树木榄样制得的待测液，在与芦丁对照品相同的极谱条件下扫描该待测液的极谱波，并测定其峰电流值，利用标准曲线查得与此峰电流值对应的待测液中总黄酮的浓度，进而即可求得试样中总黄酮的含量。本发明具有操作简单、体系稳定、线性范围宽等特点，用于红树木榄中总黄酮含量的测定，选择性强，干扰少，测定结果准确度高。
文档编号G01N27/48GK101639460SQ20091003942
公开日2010年2月3日 申请日期2009年5月8日 优先权日2009年5月8日
发明者范润珍 申请人:广东海洋大学