专利名称：通关藤药材及制剂指纹图谱的建立方法及应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种中药药材及其制剂的质量控制方法，特别涉及通关藤药材及其制剂高效液相色谱法指纹图谱的建立方法，以及由此方法得到的通关藤药材及其制剂的标准指纹图谱。
背景技术：
通关藤系萝摩科(Asclep iadaceae)牛奶菜属植物通光散\_Marsdenia tenacissima
(Roxb.) Wight et Arn]的干燥藤茎，又名乌骨藤、扁藤、下奶藤、黄木香、大苦藤等，始载于《滇南本草》，收载于1974年版《云南省药品标准》、1977年版《中国药典》及2010年版《中国药典》。通关藤味苦，性微寒。入肺、胃、膀胱经。有清热解毒，止咳平喘，散结止痛，败毒抗癌，祛风除湿，通乳利尿，活血生肌，催乳的功能。通关藤根、藤、茎、叶药用，主治肺炎，支气管炎，支气管哮喘，咽喉炎，扁桃体炎，膀胱炎，疔疮肿毒。治疮疡，咳喘，喉痛，胃痛。据《抗癌中药方选》记载“主治肿瘤如食道癌、贲门癌、胃癌、白血病、何杰金氏病、宫颈癌、肺癌等。兼治疾病如上呼吸道感染、支气管炎、支气管哮喘、小便不利”。目前控制通关藤药材质量的方法主要包括性状鉴定、显微鉴定、薄层鉴定、理化鉴定及含量测定等方法。含量测定主要通过利用分光光度法测定通关藤中留体皂苷含量来达到控制通关藤药材质量的目的。发明专利CN100434088C公开了一种从通关藤中提取的静脉给药制剂，其制备工艺是将通关藤提取液制为浸膏，再向浸膏中加入药用辅料成适合供静脉滴注给药的剂型，功能主治为清热解毒，化痰软坚，在临床上主要用于食道癌、胃癌、肺癌、肝癌，并可配合放疗、化疗的辅助治疗。目前通关藤静脉给药制剂的质量控制方法主要依据标准WS-10630(ZD-0630)-2002，主要检测注射液中的总固体、pH、蛋白质、草酸盐、树脂、鞣制、钾离子、热源等，以及利用分光光度法测定注射液中总酚酸含量并将其作为注射液的质量控制指标。留体皂苷类成分是有文献报导的公认的通关藤药材及制剂的主要活性成分。然而通关藤药材以留体皂苷含量为质量控制的指标，而其注射液则以总酚酸含量为质量控制的指标，并且单一的某成分含量测定并不能完全反映药材及注射液的整体特征、药效作用，也不能很好的控制通关藤药材及其注射液的质量。
发明内容
本发明涉及通关藤药材及其制剂高效液相色谱法指纹图谱的建立方法，以及由此方法得到的通关藤药材及其制剂的标准指纹图谱。通过测定通关藤药材及其注射液的指纹图谱有效地控制通关藤药材及其注射液的质量，弥补了现有质量控制技术的不足，从而确保通关藤药材及其注射液的有效性、安全性、稳定性和均一性。本发明解决其技术问题所采用的技术方案是用高效液相色谱法建立通关藤药材及其注射液的指纹图谱，从而有效的控制通关藤药材及其注射液的质量。具体包括如下步骤
一、通关藤药材的留体皂苷类指纹图谱建立方法及质量控制方法 I、通关藤药材留体皂苷类成分指纹图谱的建立方法
(a)供试品的制备取通关藤药材适量，粉碎，过筛，精密称取药材粉末lg，精密加入甲醇40ml，再称重；40KHZ超声提取10分钟以上，自然冷却，用甲醇补足重量，振摇混合均匀；过滤，取续滤液20ml挥干，残渣用甲醇Iml溶解，经O. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。(b)参照物溶液的制备精密称取Tenacissosides A (由南京圣和药业有限公司研究院植化室提供)12mg，置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，参照物溶液即得。Tenacissosides A 结构式为
权利要求
1.通关藤药材留体皂苷类指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤 (a)供试品的制备取通关藤药材适量，粉碎，过筛，精密称取药材粉末lg，精密加入甲醇40ml，再称重；40KHz超声提取10分钟以上，自然冷却，用甲醇补足重量，振摇混合均匀；过滤，取续滤液20ml挥干，残渣用甲醇Iml溶解，经O. 45 μ m微孔滤膜过滤，即得供试品溶液， (b)参照物溶液的制备精密称取TenacissosidesA 12mg,置于50ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，参照物溶液即得， (c)色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱0 23min 75% 65% A, 25% B ^ 35% B ;23 48min :65% A—50%A, 35 % B — 50 % B ;48 60min :50 % A — 50 % A, 50 % B — 50 % B ;60 90min :50 %A^20%A,50%B^80%B ;90 IOOmin 20% A ^ 10% A, 80% B ^ 90% B ; 100 IOlmin 10% A — 75% A，90% B — 25% B ;101 120min 75% A ^ 75% A, 25% B ^ 25% B ;柱温35°C，流速0. 8ml/min，检测器蒸发光散射检测器；雾化气体流速1. 5-3. 5L/min ;漂移管温度80-115°C, (d)测定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录O 120分钟的色谱峰，得到通关藤药材留体皂苷类指纹图谱。
2.根据权利要求I得到的通关藤药材留体皂苷类指纹图谱，其特征在于包括11个共有峰，其中4 (S)为Tenacissosides A对照峰，各特征峰的相对保留时间为O. 56 ±10% (I)、0· 59 ±10% (2)、0· 92 ±10% (3)、1· 00 ±10% (4)、1· 06 ±10% (5)、I. 09 ±10% (6)、1· 27 ±10% (7，S)、1· 38+ 10% (8)、I. 41 ± 10% (9)、I. 49 ±10% (10)、I. 96±10%(II)。
3.一种通关藤药材质量控制的方法，其特征在于包括以下步骤 (a)待测通关藤药材留体皂苷类指纹图谱的测定取待测通关藤药材，按权利要求I所述的方法处理并测定待测通关藤药材留体皂苷类指纹图谱， (b)通关藤药材质量控制将待测通关藤药材的留体皂苷类指纹图谱与标准指纹图谱对比，以特征峰计算，相似度不低于O. 85的药材质量合格。
4.通关藤注射液酚酸类指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤 (a)供试品的制备取通关藤注射液，经O.45 μ m滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液， (b)参照物溶液的制备精密称取绿原酸对照品适量，加50%甲醇制成每Iml含20μ g的溶液，即得， (c)色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相A为O.05%磷酸水溶液，流动相B为O. 05%磷酸乙腈溶液，梯度洗脱0 20min 98% A- 96% A,2%B — 4% B ;20 70min 96% A — 93 % A,4% B — 7% B ;70 IlOmin 93% A ^ 90% A,7% B ^ 10% B ；110 115min :90 % A — 85 % A, 10 % B — 15 % B ;115 116min :85 %A-98%A,15%B-2%B ;平衡时间10分钟；流速I. Oml/min ;检测器紫外检测器；检测波长300nm ;柱温25°C，理论板数按绿原酸峰计算应不低于6000， (d)测定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录O分钟 116分钟的色谱峰，得到通关藤注射液酚酸类指纹图谱。
5.根据权利要求4得到的通关藤注射液酚酸类指纹图谱，其特征在于包括11个共有峰，其中5(S)为绿原酸对照峰，各特征峰的相对保留时间为0. 26±10%(1)、·0.50 + 10% (2)、0· 55 + 10% (3)、0· 94+ 10% (4)、1· 00±10%(5，S)、1· 10±10%(6)、·1.15±10%(7)、I. 25±10%(8)、I. 39±10%(9)、I. 45± 10%(10)、I. 53±10%(II)。
6.通关藤注射液留体皂苷类指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤 (a)供试品的制备取通关藤注射液，经O.45 μ m滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液， (b)参照物溶液的制备精密称取TenacigenosideA 12mg,置于50ml容量瓶中，加甲醇定容，摇匀，参照物溶液即得， (c)色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相A为水，流动相B为乙腈，梯度洗脱0 110. Omin 90% A — 44% A, 10% B — 56% B ；110. O 110. Imin 44% A — 90% A,56% B — 10% B ；110. I 120. Omin 90% A — 90% A, 10% B — 10% B ；流速O. 8ml/min ;柱温35°C，检测器蒸发光散射检测器；雾化气体流速1. 5-3. 5L/min ;漂移管温度80-115°C， (d)测定分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20μ 1，注入液相色谱仪，测定，记录O 120分钟的色谱峰，得到通关藤注射液留体皂苷类指纹图谱。
7.根据权利要求6得到的通关藤注射液留体皂苷类指纹图谱，其特征在于包括8个共有峰，其中7 (S)为Tenacigenoside A对照峰，各特征峰的相对保留时间为:0· 23± 10%(1)、0· 36 ± 10% (2)、0· 60 + 10% (3)、0· 62 + 10% (4)、0· 66 + 10% (5)、·O.97±10%(6)、I. 00±10%(7，S)、1· 01 ±10%(8)。
8.一种通关藤注射液质量控制的方法，其特征在于包括以下步骤 (a)待测通关藤注射液指纹图谱的测定取待测通关藤注射液，按权利要求4所述的方法处理并测定待测通关藤注射液酚酸类指纹图谱，按权利要求6所述的方法处理并测定待测通关藤注射液留体皂苷类指纹图谱； (b)通关藤注射液质量控制将待测通关藤注射液的酚酸类或/和留体皂苷类指纹图谱与标准指纹图谱对比，以特征峰计算，相似度不低于O. 80的注射液质量合格。
全文摘要
本发明涉及一种通关藤药材及制剂的指纹图谱建立方法及其在通关藤药材及制剂的质量控制中的应用，同时公开了通关藤药材及制剂中酚酸类及甾体皂苷类的指纹图谱及其测定方法和应用。本发明利用酚酸类和甾体皂苷类指纹图谱控制通关藤药材及其制剂的质量，以此对通关藤药材真伪、产地和品质进行鉴别和控制，使通关藤药材及其制剂的质量有了真正可控制的标准，确保通关藤药材及其制剂的质量稳定。本发明通过测定通关藤药材及其制剂酚酸类及甾体皂苷类的指纹图谱控制其质量的方法操作简单，稳定可靠。
文档编号G01N30/02GK102654484SQ20111012879
公开日2012年9月5日 申请日期2011年5月18日 优先权日2011年3月4日
发明者张仓, 李迩娜, 沈振涛, 王勇, 钦松, 钱金叶 申请人:南京圣和药业有限公司