专利名称：唇香草指纹图谱的建立方法及指纹图谱的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种唇香草指纹图谱的建立方法及指纹图谱，属于药物分析技术领域。
背景技术：
目前，指纹图谱已成为国际公认的控制中药或天然药物质量的有效手段，指纹图谱技术已成为当前中药界关注的热点问题。国际上采用指纹图谱质控技术对植物药进行质量控制的国家有韩国、日本、德国等，如德国用指纹图谱技术控制银杏制剂的质量；美国FDA对植物药的质量控制则要求必须控制指纹图谱的检测标准。用指纹图谱制定注射剂质量标准也被纳入药典，但在我国现有标准中，中药材、中成药的质量标准大量仅限于外观鉴另O、性状检查，很少对其中有效成分进行检查。即使在建立成分測定的标准中，所测成分大部分仅为ー个或几个指标成分，而不是直接与疗效相关的有效成分。在常规检查中，外观、 性状的鉴别以及化学鉴别项中，存在大量普适性内容，有效成分的专属性不强，很难对药材或制剂的特性有ー个全面的描述。中药指纹图谱可从整体上分析中药的生物、理化特征，又具有一定的可量化參数，充分体现了中药整体性和模糊性的特点。因此，经过严格试验获得重现性良好的指纹图谱用于中药质量控制，对中医现代化和国际化具有重大意义。一般常用于植物药材指纹图谱的鉴定方法有显微鉴定、性状鉴定、理化鉴定。唇香草{Ziziphora clinopodioides Lam.)为唇形科新塔花属植物唇香草的干燥地上部分，维吾尔名称为苏则。本品为多年生半灌木状草本，喜生于低山坡、草地及干旱坡地上，分布于新疆、前苏联、蒙古及中亚地区亦有分布。性味辛凉、微苦，具有强心利湿、理气化痰、消炎散结的功效，维吾尔医将唇香草长期用于临床治疗冠心病、心绞痛、气管炎、肺脓肿的复方中。现代动物实验结果证实，唇香草对急性缺血的心肌和氧化损伤的心肌细胞均有明显的保护作用。文献报道唇香草的有效成分有挥发油类，有机酸类，黄酮类等多种成分，并仅对其进行定性、定量分析缺乏全面反映唇香草质量的标准控制手段。单靠測定某种有效成分考查质量的稳定性是不够的，难以达到对唇香草质量的有效控制。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供了ー种唇香草指纹图谱的建立方法，以及由此方法所得到的唇香草的指纹图谱，以此达到完善其质量评价体系，有效控制唇香草药材质量的目的。为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案
唇香草指纹图谱的建立方法，包括以下步骤；
(I)标准品溶液的制备
分别称取标准品地奥司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含ニ甲基亚砜为20%-30%v/v的甲醇溶液溶解并定容，使地奥司明、蒙花苷和胡薄荷酮的浓度分别为O. 0122-0. 1708mg/ml、O. 0276-0. 3804mg/ml,0. 0063-0. 0879mg/ml 的溶液，作为标准品溶液；(2)供试品溶液的制备
称取唇香草粉末，每Ig加入含ニ甲基亚砜为20%-30%v/v的甲醇溶液8-15ml，浸泡O. 5-1. 5h，超声提取O. 5-lh，过滤，用含ニ甲基亚砜为20%-30%v/v的甲醇溶液定容，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液；
(3)高分离度快速液相色谱(RRLC)法分析
色谱条件XDB-C18 色谱柱，50_X4. 6mm，I. 8 m，流速 O. 9 ml/min，检测波长 270nm，柱温30°C，进样量6ml，流动相A为1%ν/νこ酸水溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱0 - 4min,こ酸水溶液由77%降低到58% ；4 - 10 min,こ酸水 溶液由58%降低到50% ；
分别吸取上述标准品溶液和供试品溶液，注入高分离度快速液相色谱仪中进行高分离度快速液相色谱检测，按照上述条件操作，得到唇香草的RRLC指纹图谱。该指纹图谱中的共有特征峰为地奥司明(12)、蒙花苷(15)、胡薄荷酮(16)三个峰，其保留时间分别为29. 617min、40. 522min和46. 897min。进ー步地，本发明方法中得到的唇香草的RRLC指纹图谱中的共有特征峰还包括(I)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(13)、(14)、(17)、(18)十五个峰，其保留时间分别为 I. 405 min、2. 015min、2. 472 min,3. 132 min,3. 571 min,5. 972 min、7. 548 min、12.637 min、15.548 min、2L 309 min、22.846 min、34. 362 min、36.636 min、55. 02 min 和 56. 42 min。按照本发明所述的方法，在制备标准品溶液时，优选地
分别称取标准品地奥司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含ニ甲基亚砜为25%v/v的甲醇溶液溶解并定容，使地奥司明、蒙花苷和胡薄荷酮的浓度分别为0.0122-0. 1708mg/ml、
O.0276-0. 3804mg/ml,0. 0063-0. 0879mg/ml 的溶液，作为标准品溶液。按照本发明所述的方法，在制备供试品溶液时，优选地
称取唇香草粉末，每Ig加入含_■甲基亚讽为25%v/v的甲醇溶液IOml,浸泡Ih,超声提取O. 5h，过滤，用含ニ甲基亚砜为25%v/v的甲醇溶液定容，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。本发明中的唇香草药材中主要有效成分地奥司明和蒙花苷难溶于一般提取溶剤，本方法首次在提取溶剂中加入助溶剂ニ甲基亚砜(DMSO)帮助有效成分的溶出。首次运用了快速高分离液相(RRLC)优于显微鉴定、性状鉴定、理化鉴定，具有更高的灵敏度、分离度和分析速度，是ー种全面快速的分析鉴定方法用于唇香草药材的鉴定检測。按照本发明，通过指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控唇香草的质量，保证其质量的稳定、均一、可控。将唇香草药材作为ー个整体对待，通过比较其共有峰可以找出不同药材之间的细
微差异。
附图用来提供对本发明的进ー步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中
图I是本发明的标准品的色谱图；图2是本发明实施例I中2号样品供试品溶液的色谱 图3是利用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2004A版)处理所得到的本发明唇香草共有模式特征指纹图谱；
图4是按本发明方法获得的唇香草的RRLC指纹图谱。其中，1-18为唇香草的RRLC指纹图谱中的共有峰，Sl-SlO为不同产地的唇香草的RRLC指纹图谱。
具体实施例方式以下结合附图对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
权利要求
1.唇香草指纹图谱的建立方法，其特征在于，包括以下步骤 (1)标准品溶液的制备 分别称取标准品地奥司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含ニ甲基亚砜为20%-30%v/v的甲醇溶液溶解并定容制成标准品溶液； (2)供试品溶液的制备 称取唇香草粉末，每Ig加入含ニ甲基亚砜为20%-30%v/v的甲醇溶液8-15ml，浸泡O. 5-1. 5h，超声提取O. 5-lh，过滤，用含ニ甲基亚砜为20%-30%v/v的甲醇溶液定容，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液； (3)高分离度快速液相色谱法分析 色谱条件XDB-C18 色谱柱，50_X4. 6_，I. 8 m，流速 O. 9 ml/min，检测波长 270nm，柱温30°C，进样量/6ml，流动相A为1%ν/νこ酸水溶液，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱0-4 min,こ酸水溶液由77%降低到58% ；4 - 10 min,こ酸水溶液由58%降低到50% ； 分别吸取上述标准品溶液和供试品溶液，注入高分离度快速液相色谱仪中进行高分离度快速液相色谱检测，按照上述条件操作，得到唇香草的高分离度快速液相指纹图谱。
2.根据权利要求I所述的唇香草指纹图谱的建立方法，其特征在于得到的唇香草的高分离度快速液相指纹图谱中的共有特征峰为地奥司明(12)、蒙花苷(15)、胡薄荷酮(16)三个峰，其保留时间分别为29. 617min、40. 522min和46. 897min。
3.根据权利要求2所述的唇香草指纹图谱的建立方法，其特征在于得到的唇香草的高分离度快速液相指纹图谱中的共有特征峰还包括(I)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(13)、(14)、(17)、(18)十五个峰，其保留时间分别为 I. 405 min,2. 015min、2.472 min、3. 132 min、3. 571 min、5.972 min、7. 548 min、12.637 min、15.548 min、21.309 min、22.846 min、34. 362 min、36.636 min、55.02 min 和 56.42 min。
4.根据权利要求1-3任一项所述的唇香草指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(I)中用含ニ甲基亚砜为25%v/v的甲醇溶液溶解并定容。
5.根据权利要求1-3任一项所述的唇香草指纹图谱的建立方法，其特征在于，所述步骤(2)供试品溶液的制备 称取唇香草粉末，每Ig加入含_■甲基亚讽为25%v/v的甲醇溶液IOml,浸泡Ih,超声提取O. 5h，过滤，用含ニ甲基亚砜为25%v/v的甲醇溶液定容，用微孔滤膜过滤，即得供试品溶液。
全文摘要
本发明提供了一种唇香草指纹图谱的建立方法以及所得到的唇香草指纹图谱，包括以下步骤(1)标准品溶液的制备称取标准品地奥司明、蒙花苷和胡薄荷酮，用含二甲基亚砜的甲醇溶液溶解并定容，得标准品溶液；(2)供试品溶液的制备用二甲基亚砜的甲醇溶液唇香草粉末，超声提取，过滤，定溶，微孔滤膜过滤，得供试品溶液；(3)RRLC分析XDB-C18色谱柱，50mm×4.6mm,1.8mm，流速0.9ml/min，检测波长270nm，柱温30℃，进样量6ml，流动相为乙酸水溶液—甲醇，采用梯度洗脱，得到唇香草的HPLC指纹图谱。通过本发明指纹图谱中共有峰的有无，能有效地监控唇香草的质量，保证其质量的稳定、均一、可控。
文档编号G01N30/88GK102662019SQ201110366670
公开日2012年9月12日 申请日期2011年11月17日 优先权日2011年9月6日
发明者于谦, 刘宏炳, 周晓英, 哈木拉提·吾甫尔, 田树革, 葛亮 申请人:新疆医科大学