专利名称：革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒的制作方法
技术领域：
本实用新型公开一种内毒素检测鲎试剂盒，按国际专利分类表(IPC)划分属于检测临床体液检品的检测试剂盒制造技术领域，尤其是涉及一种革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒。
背景技术：
内毒素是革兰氏阴性细菌细胞壁结构中的类脂多糖体，内毒素进入机体后可引发内毒素血症。内毒素血症严重时导致感染性休克、多器官功能衰竭，弥漫性血管内凝血，细菌性脑膜炎等，病死率极高。体液细菌内毒素水平检测是诊断和监测革兰氏阴性菌感染的一个重要参数，体液内毒素水平的定量快速检测可用于鉴别诊断细菌性和非细菌性炎性疾病，监控具有感染危险的重症患者的病程发展。目前，在临床上诊断革兰氏阴性菌感染主要靠微生物培养，微生物培养需要几天才能出结果，而且由于抗生素的广泛使用，其培养阳性率很低。细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁上的主要成分，体液细菌内毒素水平直接反应了革兰氏阴性菌感染的程度。鲎试验是检测细菌内毒素的最佳方法。鲎试剂中含有对细菌内毒素敏感的C因子，B因子，凝固酶原，凝固蛋白原等，在细菌内毒素存在时，细菌内毒素激活鲎试剂中的C因子，引起一系列酶促反应，使鲎试剂产生凝集反应形成凝胶。随着凝胶的形成，反应液的吸光度增加，吸光度增加的速度与内毒素浓度成正相关。换言之，吸光度值上升到某一预设限值所需要的时间(启动时间)与内毒素浓度成负相关，启动时间的对数与内毒素浓度的对数成线性关系， 因此可以定量检品的内毒素浓度。此方法称为为动态浊度法。
发明内容针对现有技术的不足，本实用新型提供了一种快速检测、灵敏度高的革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，可以检测出0. lEU/ml的细菌内毒素，该试剂盒检测的检品是血液、尿液等体液，通过检测体液中的细菌内毒素水平，为临床革兰氏阴性菌感染及内毒素血症等的早期诊断及治疗预后效果提供依据。为达到上述目的，本实用新型是通过以下技术方案实现的一种革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，包括—标准品盒，其盒体内包含鲎试剂瓶、内毒素检品处理液瓶、溶解液瓶、空安瓿及一支细菌内毒素工作标准品瓶；以及至少一检品盒，其包含数支鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶，且鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶的数量为1:1。进一步，所述的标准品盒包含八支鲎试剂瓶、四支内毒素检品处理液瓶、一支细菌内毒素工作标准品瓶、三支溶解液瓶及四支空安瓿，且上述各瓶均为安瓿瓶。进一步，所述的鲎试剂瓶内的鲎试剂装量为0. Iml/支，细菌内毒素工作标准品瓶内装有效价为50-200EU的细菌内毒素工作标准品，内毒素检品处理液瓶内的内毒素检品处理液装量为0. 9ml/支，溶解液瓶内的溶解液装量为aiil/支。本实用新型所采用的分析方法为动态浊度法，本试剂盒配套光学检测系统使用， 光学检测系统必须带有恒温装置，能使检品和鲎试剂在37° C反应，用软件记录反应液吸光度值的动态变化，根据反应液吸光度值上升到某一预设限值所需要的时间(启动时间)的对数与内毒素浓度的对数成反比例线性关系的原理，用本试剂盒配套的标准品做标准曲线， 再根据检品和鲎试剂反应的吸光度值的动态变化情况从标准曲线上得出检品中的内毒素含量。本实用新型的特点为能够有效地排除体液对鲎试验的干扰，快速准确地检测出体液细菌内毒素水平，本实用新型检测细菌内毒素比传统的革兰氏阴性菌培养法有以下优占.
^ \\\ ·1.快速检测可在2小时内完成，而微生物培养需耗时几天；2.灵敏度高可以检测出0. lEU/ml的细菌内毒素；3.不受抗生素的影响，是临床快速诊断革兰氏阴性菌感染的最佳方法之一。
图1是本实用新型标准品盒示意图；图2是本实用新型检品盒示意图。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型作进一步说明实施例请参阅图1及图2，一种革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，包括一标准品盒1，所述的标准品盒包含八支鲎试剂瓶101、四支内毒素检品处理液瓶102、一支细菌内毒素工作标准品瓶103、三支溶解液瓶104及四支空安瓿105，且上述各瓶均为安瓿瓶； 以及至少一检品盒2，其包含数支鲎试剂瓶21和内毒素检品处理液瓶22，且鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶的数量为1:1，图2中给出的鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶分别为20 支，针对不同的测样可以选择不同数量的鲎试剂和内毒素检品处理液，但两者的数量比例为 1:1。本实用新型的标准品盒1和检品盒2可以分开或直接装在一个外壳内，目的是为解决实际检测的需求而设置。本实用新型中的凝胶法鲎试剂，装量为0. Iml/支。灌装于无热原安瓿中，冷冻干燥封口 ；细菌内毒素工作标准品，效价为50-200EU，灌装于无热原安瓿中，冷冻干燥封口 ；内毒素检品处理液，装量为0. 9ml/支，灌装于无热原安瓿中，高压灭菌；溶解液，装量为 2ml/支，灌装于无热原安瓿中，高压灭菌；无热原空安瓿，无菌状态下封口。本实用新型的使用方法一.标准曲线的制作1.从标准品盒中取细菌内毒素工作标准品1支加入适量溶解液溶解，在漩涡混合仪上剧烈震荡2分钟以上，按所标示效价用溶解液在空安瓿中逐步稀释配制成100EU/ ml、10EU/ml、lEU/ml 及 0. lEU/ml 标准溶液；2.取0. Iml阴性对照液(即溶解液)及浓度为10EU/ml、lEU/ml和0. lEU/ml的细菌内毒素标准溶液，分别加入到0.9ml内毒素检品处理液中，混勻。70°C保温10分钟，取出后立即放入冷水中冷却；3.取处理后的阴性对照液、各浓度内毒素标准溶液混合液0.2 ml加入鲎试剂中， 轻轻振摇溶解鲎试剂后移取0. Iml反应混合液至除热原96孔微板中，放置于光学检测仪器中检测。反应结束后，软件自动进行标准曲线拟合；二.检品检测1.检品采集1. 1血浆用无热原肝素钠抗凝真空采血管采集静脉血anl，进行3000rpm离心 60s，分离得到富含血小板的血浆；1. 2尿液用已除热原试管或其他除热原器材采集中段尿液2ml ；2.检测2. 1.取0. Iml血浆或尿液检品，加入到0. 9ml内毒素检品处理液中，混勻后70°C 保温10分钟，取出后立即放入冷水中冷却；2.2取经内毒素检品处理液处理后的血浆或尿液检品混合液0.2 ml加入鲎试剂中，溶解后移取0. Iml至除热原96孔微板中，放置于光学检测仪器中检测，反应结束后自动计算出样本内毒素含量；三.检测结果解释正常体液中细菌内毒素含量< 0. lEU/ml。检测结果细菌内毒素含量大于或等于 0. lEU/ml表明该检品有细菌内毒素存在，病人可能感染革兰氏阴性菌。检测结果细菌内毒素含量小于0. lEU/ml表明该检品细菌内毒素含量低，病人感染革兰氏阴性菌的可能性小。本试剂盒中的鲎试剂为只对细菌内毒素起反应的特异性鲎试剂。本试剂盒配有能排除体液检品对鲎试验干扰的内毒素检品处理液。体液检品经内毒素检品处理液稀释10 倍后，在70° C加热10分钟处理。处理后的体液检品对鲎试验的干扰基本被排除。本实用新型所采用的分析方法为动态浊度法。本试剂盒配套光学检测系统使用。光学检测系统必须带有恒温装置，能使检品和鲎试剂在37° C反应，用软件记录反应液吸光度值的动态变化。根据反应液吸光度值上升到某一预设限值所需要的时间(启动时间)的对数与内毒素浓度的对数成反比例线性关系的原理，用本试剂盒配套的标准品做标准曲线。再根据检品和鲎试剂反应的吸光度值的动态变化情况从标准曲线上得出检品中的内毒素含量。本实用新型的特点是1、配有内毒素检品处理液。经处理后的体液对鲎试验基本没有干扰。2.配有标准品盒，能用标准品盒内试剂做一条四个点(包括空白)的标准曲线， 使实验结果准确可靠。以上所记载，仅为利用本创作技术内容的实施例，任何熟悉本项技艺者运用本创作所做的修饰、变化，皆属本创作主张的专利范围，而不限于实施例所揭示者。
权利要求1.一种革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，其特征在于包括一标准品盒，其盒体内包含鲎试剂瓶、内毒素检品处理液瓶、溶解液瓶、空安瓿及一支细菌内毒素工作标准品瓶；以及至少一检品盒，其包含数支鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶，且鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶的数量为1:1。
2.根据权利要求1所述的革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，其特征在于所述的标准品盒包含八支鲎试剂瓶、四支内毒素检品处理液瓶、一支细菌内毒素工作标准品瓶、 三支溶解液瓶及四支空安瓿，且上述各瓶均为安瓿瓶。
3.根据权利要求1或2所述的革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，其特征在于 所述的鲎试剂瓶内的鲎试剂装量为0. Iml/支，细菌内毒素工作标准品瓶内装有效价为 50-200EU的细菌内毒素工作标准品，内毒素检品处理液瓶内的内毒素检品处理液装量为 0. 9ml/支，溶解液瓶内的溶解液装量为aiil/支。
专利摘要本实用新型公开一种革兰氏阴性菌感染内毒素检测鲎试剂盒，是由检品盒和标准品盒组成，其中检品盒包含数支鲎试剂瓶和内毒素检品处理液瓶，且两者的数量为1:1；所述的标准品盒包含八支鲎试剂瓶、四支内毒素检品处理液瓶、一支细菌内毒素工作标准品瓶、三支溶解液瓶及四支空安瓿。本实用新型所采用的分析方法为动态浊度法，本试剂盒配套光学检测系统使用，根据检品和鲎试剂反应的吸光度值的动态变化情况从标准曲线上得出检品中的内毒素含量，具有快速检测且灵敏度高并不受抗生素影响等优点。
文档编号G01N21/31GK202119709SQ201120213970
公开日2012年1月18日 申请日期2011年6月23日 优先权日2011年6月23日
发明者不公告发明人 申请人:厦门市鲎试剂实验厂有限公司