专利名称：高效液相色谱法测定焦性没食子酸的制作方法
技术领域：
本发明涉及ー种采用内标法作为定量分析方法的高效液相色谱法測定焦性没食子酸的新方法，属于化学分析方法技术领域。
背景技术：
焦性没食子酸，又名焦倍酚，连苯三酚，是以五倍子为原料的精深加工的多用途化エ产品。它广泛用于农药、医药、化妆品、液晶材料、染料中间体、橡塑助剂、化学分析试剂等领域。对于焦性没食子酸的检测，现有文献报道的方法有比色法、气相色谱法、薄层色谱法、分光光度法和高效液相色谱外标法。
日本焦性没食子酸产品エ业标准中对焦性没食子酸的測定采用气相色谱法，但由于焦性没食子酸在高温条件下容易发生分解，经检测结构的准确性带来了一定的影响。文献《精细化工中间体》1996. 26 (4):49-51 ;《高效液相法测定焦酸》1999. 29 (4)43-44。中所报道的高效液相色谱法測定焦性没食子酸方法，定量方法采用外标法。使用外标法，必须要有焦性没食子酸的标样，但焦性没食子酸标样不仅难以制备，且容易氧化变质，不易保存。采用高效液相色谱测定焦性没食子酸时，定量方法也有采用归一法的，但由于在检测条件下，焦性没食子酸与没食子酸、单宁酸等杂质的灵敏度不一样，所以检测的结果不确定性大导致结果不准确。
发明内容
本发明的目的是提供ー种能克服现有焦性没食子酸检测技术中要么标准样品难以获取和保存，要么检测结果不确定度大，准确度低等各方面的不足，即提供一种高效液相色谱内标定量检测技术，该方法简单、结果准确可靠。其技术方案是以没食子酸及酚类物质及其衍生物或苯甲酸及其衍生物的标样作为内标物质，用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下，采用内标法对焦性没食子酸进行定量检测。包括配制焦性没食子酸标准溶液，没食子酸标样，測定没食子酸含量求焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子，焦性没食子酸含量的測定。I.选择仪器和试剂
液相色谱仪LC-10ATVP，带色谱工作站和紫外检测器；色谱柱；Diamonsiltm, C18, 250X4. 6mm ；甲醇(色谱纯)通过0. 45um孔径的滤膜过滤；焦性没食子酸已知样99. 5% ;没食子酸标样99. 9%。2.实验方法
2.I控制高效液相色谱仪的操作条件流动相甲醇(色谱纯)；水(纯净水)；磷酸(试剂级)各成分按体积百分比30-50 :50-70 :0. 1-1. 0混合，通过0. 45um孔径的滤膜过滤，流速
I.Oml/min ;检测波长280um ;柱温、室温；进样量20ul。保留时间，焦性没食子酸3. 35min,没食子酸2. 94min。2. 2酸制标准溶液。2. 2. I焦性没食子酸标准溶液20mg/ml。2. 2. 2 没食子酸标样0. lmg/ml。2. 2. 3测定没食子酸的含量。准确称取一定重量(如10. Og准确至0. 0002g)样品于容量瓶中，宜取50ml容量瓶中，以流动相溶解并定容，摇匀得试样溶液A。分别准确移取试样溶液A拉开一点距离4_6ml于两个容量瓶中，其中ー个以流动相直接定容后摇匀，另ー个准确加入4-6ml没食子酸标样(0. 0lmg/ml),以流动相摇匀，在 色谱操作条件下检测，分别测定其没食子酸成分的色谱峰面积。样品中没食子酸的质量百分含量X1按照下式计算
权利要求
1.一种高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在干以没食子酸及酚类物质及其衍生物或苯甲酸及其衍生物的标样作为内标物质，用液相色谱仪在一定的色谱操作条件下，采用内标法对焦性没食子酸进行定量检测；包括配制焦性没食子酸标准溶液，没食子酸标样，測定没食子酸含量求焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子、焦性没食子酸含量的測定。
2.根据权利要求I所述的高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在于使用焦性没食子酸的主要生产原料没食子酸作为内标物质。
3.根据权利要求I所述的高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在于选择仪器和操作条件流动相，液相色谱仪LC-10ATVP，带色谱工作站和紫外检测器；色谱柱；色谱操作条件的流动相为甲醇(色谱纯)水(纯净水)磷酸(试剂级)各成分按体积百分比30-50 50-70 0. 1-1. 0混合，通过0. 45um孔径的滤膜过滤，流速0. 8-1. 2ml/min ；检测波长260-300nm ;柱温、室温；进样量20ul ;保留时间焦性没食子酸3. 35min，没食子酸 2. 94min。
4.根据权利要求I所述的高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在于焦性没食子酸标准溶液的配制，20mg/ml ;准确称取含焦性没食子酸2. OOg (准确至0. 0002g)的已知样于以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀；100ml容量瓶中；没食子酸标样0. lmg/ml ;准确称取含没食子酸0. IOg(准确至0. 0002g)的标样于IOOOml容量瓶中，以流动相溶解并稀释至刻度，摇匀备用。
5.根据权利要求I所述的高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在于没食子酸含量的測定，准确称取10. Og(准确至0. 0002g)没食子酸标样于50ml容量瓶中，以流动相溶解并定容，摇匀得试样溶液A，再分别准确移取试样溶液A4-6ml于两个50ml的容量瓶中，其中ー个以流动相直接定容后摇匀，另ー个准确加入4-6ml没食子酸标样(0. Olmg/ml)，以流动相定容后摇匀，在以上色谱操作条件下检测，分别测定其没食子酸成分的色谱峰面积；用发明的公式(I)计算出样品中没食子酸的质量百分含量ん。
6.根据权利要求I所述的高效液相色谱测定焦性没食子酸的方法，其特征在于先测定焦性没食子酸与没食子酸色谱响应值校正因子，分别准确移取4-6ml焦性没食子酸标准溶液(20mg/ml)于5个50ml的容量瓶中，分别准确加入I. 0ml、2. 0ml、5. 0ml、10. 0ml、20ml没食子酸标准溶液(0. lmg/ml)，以流动相定容启摇匀，在以上色谱操作条件下检测，分别进行測定，根据测定结果计算焦性没食子酸与没食子酸两种成分的浓度与其色谱响应值峰面积比值之间的校正因子，求得校正因子平均值f = 29. 79 ;再准确称取0. Ig样品(称准至.0.0002g)于IOOml容量瓶中，以流动相定容后摇匀；准确移取5ml此溶液于50ml容量瓶中，准确加入I. 8-2. 2ml没食子酸标准溶液(0. lmg/ml)，以流动相定容并摇匀后，进行液相色谱测定，样品中焦性没食子酸的质量百分比X按照本发明公式(2)计算得出。
全文摘要
一种通过使用焦性没食子酸的主要原料没食子酸作为内标物质，使用高效液相色谱内标定量分析，精准检测焦性没食子酸的方法。该发明有效克服了由于焦性没食子酸标准样品难以制备和保存的不利因素，同时避免了采用外标法作为定量分析时测定焦性没食子酸含量时仪器不稳定带来的检测不确定度，也避免了采用归一法作为定量分析方法时由于各类物质在同一检测条件下灵敏度不一致所带来的检测不确定度，该方法方便快速，检测结果准确可靠。
文档编号G01N30/02GK102759584SQ20121020415
公开日2012年10月31日 申请日期2012年6月20日 优先权日2012年6月20日
发明者刘林, 吴黔, 窦广振, 谢正宝, 谢龙生, 邓自西 申请人:遵义林源医药化工有限责任公司