白细胞测定设备及试剂盒的制作方法

白细胞测定设备及试剂盒的制作方法
【专利摘要】白细胞测定设备(1)中，在沿着载体(5)中的来源于血液的试样(S)的展开方向从开口部(11)隔开的位置上设置有能从外部观察载体(5)的展开确认窗口(12)。如果从开口部(11)滴加来源于血液的试样(S)，则来源于血液的试样(S)中所含有的白细胞被载体(5)捕捉在滴加位置(5a)附近，红细胞和/或血红蛋白等在载体(5)中从滴加位置(5a)朝规定方向展开。因此，白细胞测定设备(1)中，通过从展开确认窗口(12)确认从滴加位置(5a)展开的红细胞和/或血红蛋白的颜色，能判别是否使用过，能以简易的构成防止由于测定者的失误而造成的重复使用。
【专利说明】白细胞测定设备及试剂盒
【技术领域】
[0001]本发明涉及白细胞测定设备及试剂盒。
【背景技术】
[0002]白细胞是血液中所含的成分之一，具有将从外部侵入体内的异物排除的作用。发生细菌感染或病毒感染时，人体均呈现出发热症状。细菌感染时，白细胞数增加，病毒感染时，白细胞数保持正常或降低，淋巴细胞增加。因此，通过进行白细胞的测定，能鉴别是细菌感染还是病毒感染。
[0003]因此，白细胞的测定可以使用利用电阻法的自动血细胞计数器(例如参照专利文献I)。然而，自动血细胞计数器是大型且特殊的装置，因此希望开发出能在中小医院或诊疗所等的门诊时或者在床边实施POC(现场检验(Point of care))检查的白细胞测定设备。
[0004]作为这样的白细胞测定设备，例如有使用多孔质膜等载体的设备。例如，专利文献2中公开了一种白细胞测定设备，该设备测定白细胞(特别是粒细胞)内的髓过氧化物酶的过氧化物酶活性。该白细胞测定设备中，将白细胞溶解或破坏，使髓过氧化物酶释放出来后，根据多孔质膜上的氧化敏感性色素供给染料的颜色变化来检测由髓过氧化物酶引起的过氧化氢分解反应的促进。
[0005]此外，例如专利文献3中公开了一种以酯酶活性作为指标的白细胞测定设备。该白细胞测定设备中，根据多孔质膜上的3-乙酰吲哚氧基等色素底物的显色来检测酯酶的水解活性。使用该白细胞测定设备时，将受试者的血液以维持全血的形态滴加于设备，捕捉白细胞，用洗涤液使红血球等其它血液成分通过溢流道向下方透过而将其除去后，进行酯酶活性的测定。
[0006]现有技术文献
[0007]专利文献
[0008]专利文献1:日本专利特开昭51-006788号公报
[0009]专利文献2:日本专利特表平7-500003号公报
[0010]专利文献3:日本专利特表2005-526513号公报

【发明内容】

[0011]发明所要解决的技术问题
[0012]然而，上述专利文献2的白细胞测定设备中，由于不仅红细胞和血浆之类的其它血液成分也含有过氧化物酶，而且红细胞中的血红蛋白也具有过氧化物酶样活性，因此为了进行准确的白细胞测定，需要在测定前进行用于将白细胞从其它血液成分中完全地分离的繁琐的预处理。
[0013]另一方面，专利文献3的白细胞测定设备中，虽然不需要繁琐的预处理，但存在如下问题:虽然将受试者的血液滴加于设备，但血液中的白细胞数少时或者因载体的不良等而未能恰当地进行测定时，没有简易地判别设备是否使用过的方法。因此，担心测定者会错误地将使用过的白细胞测定设备重复使用。
[0014]本发明是为了解决上述课题而完成的发明，其目的是提供一种能以简易的构成防止由于测定者的失误而造成的重复使用的白细胞测定设备及试剂盒。
[0015]解决技术问题所采用的技术方案
[0016]为了解决上述课题，本发明的白细胞测定设备的特征在于，包括:壳体，该壳体设置有滴加来源于血液的试样的开口部；及载体，该载体收纳在壳体内，将从开口部滴加的来源于血液的试样中所含有的成分中的白细胞捕捉在滴加位置附近，使其它成分朝规定方向展开；壳体中，在沿着其它成分的展开方向从开口部隔开的位置上设置有展开确认窗口，该展开确认窗口能从外部观察载体。
[0017]该白细胞测定设备中，在沿着载体中的来源于血液的试样的侧向流动的展开方向从开口部隔开的位置上设置有展开确认窗口，该展开确认窗口能从外部观察载体。如果从开口部滴加来源于血液的试样,则来源于血液的试样中所含有的白细胞被载体捕捉在滴加位置附近，红细胞和/或血红蛋白等在载体中从滴加位置朝规定方向展开。因此，该白细胞测定设备中，通过从展开确认窗口确认从滴加位置展开的红细胞和/或血红蛋白的颜色，能判别是否使用过，能以简易的构成防止由于测定者的失误而造成的重复使用。
[0018]此外，展开确认窗口较好是沿着展开方向设置有一个以上。设置有一个以上的展开确认窗口时，能更可靠地确认红细胞和/或血红蛋白的展开状态。
[0019]此外，较好是在载体的试样滴加位置上含浸有白细胞的显色反应用的试剂的一部分或全部。通过分别确认开口部的颜色和展开确认窗口的颜色，能同时进行白细胞测定设备是否使用过的判別和白细胞的测定(定性或定量)。
[0020]此外，本发明的试剂盒的特征在于，包含所述白细胞测定设备、白细胞的显色反应用的试剂和/或洗涤液和/或稀释液。
[0021]该试剂盒中，在沿着载体中的来源于血液的试样的侧向流动的展开方向从开口部隔开的位置上设置有展开确认窗口，该展开确认窗口能从外部观察载体。如果从开口部滴加来源于血液的试样，则来源于血液的试样中所含有的白细胞被载体捕捉在滴加位置附近，红细胞和/或血红蛋白等在载体中从滴加位置朝规定方向展开。因此，通过从展开确认窗口确认从滴加位置展开的红细胞和/或血红蛋白的颜色，能判别是否使用过，能以简易的构成防止由于测定者的失误而造成的重复使用。
[0022]发明的效果
[0023]利用本发明的白细胞测定设备及试剂盒，能以简易的构成防止由于测定者的失误而造成的重复使用。此外，无需对照显色用的试剂，就能判断测定是否恰当地进行。
【专利附图】

【附图说明】
[0024]图1是表示本发明的白细胞测定设备的一种实施方式的立体图。
[0025]图2是将盖部去除来表示图1所示的白细胞测定设备的立体图。
[0026]图3是表示载体中的来源于血液的试样的展开情况的俯视图。
[0027]图4是表示使用白细胞测定设备时的开口部和展开确认窗口处的白细胞的试剂显色、红细胞和/或血红蛋白的着色与白细胞的测定结果是否恰当之间的关系的图。
[0028]图5是表示本发明的变形例的白细胞测定设备的立体图。[0029]图6是表示本发明的另一变形例的白细胞测定设备的立体图。
[0030]图7是表示本发明的又一变形例的白细胞测定设备的立体图。
[0031]图8是表示本发明的又一变形例的白细胞测定设备的立体图。
[0032]图9是表示本发明的又一变形例的白细胞测定设备的立体图。
[0033]图10是表示本发明的又一变形例的白细胞测定设备的立体图。
【具体实施方式】
[0034]以下，参照附图对本发明的白细胞测定设备及试剂盒的优选实施方式进行详细说明。另外，以下说明中，对于同一要素使用同一符号，省略重复说明。
[0035]图1是表示本发明的白细胞测定设备的一种实施方式的立体图。此外，图2是将盖部去除来表示图1中的白细胞测定设备的立体图。如图1和图2所示，白细胞测定设备I由壳体2和载体5构成，该壳体2包括主体部3和盖部4，呈扁平的近似长方体形状，该载体5配置在壳体2内，呈长方形状。该白细胞测定设备I是用于测定来源于血液的试样S (参照图3)中所含的白细胞的设备，通过将来源于血液的试样S滴加于壳体2内的载体5，将白细胞捕捉在滴加位置5a，另一方面，使红细胞等其它血液成分在载体5中展开而将其分离。
[0036]作为测定对象的来源于血液的试样S是至少包含红细胞和白细胞的试样。即，来源于血液的试样S既可以是全血，也可以是将全血用稀释液稀释后的试样，也可以是选择性地包含红细胞和白细胞的试样。作为稀释液，只要是等渗的溶液即可，可使用生理盐水、磷酸缓冲生理盐水等。从减轻对受试者的负担的观点来看，较好是抑制采血量，从确保测定的准确性的观点来看，较好是充分确保来源于血液的试样S。
[0037]因此，为全血时，来源于血液的试样S的量较好为1μ I?100 μ I左右，更好为3μ I?50μ I左右,进一步更好为5 μ I?10 μ I左右。此外，为稀释血液时,考虑到下述的红细胞和/或血红蛋白在载体5中的移动距离，较好为100μ I?350 μ I左右。为选择性地包含红细胞和白细胞的试样时，较好为3 μ I?350 μ I左右，较好为5 μ I?100 μ I左右。
[0038]此外，滴加来源于血液的试样S后，可以进一步滴加反应试剂液或洗涤液，以谋求白细胞和红细胞的分离的促进和红细胞的展开的促进。该方法在来源于血液的试样S为微量时(特别是因为使用全血而只能得到微量的试样时)有效。洗涤液只要不对白细胞测定的反应造成影响就没有特别限定，
[0039]从成本和对白细胞的测定的影响的观点来看，例如优选使用生理盐水、磷酸缓冲生理盐水、蒸馏水、纯净水。除此之外，可使用含有皂苷、Triton(注册商标)Χ-100、十二烷基硫酸钠等表面活性剂的溶液。
[0040]反应试剂液是包含白细胞的反应用的试剂、即基于白细胞内部的酶、蛋白质或表面抗原等的显色反应用的试剂的溶液。反应试剂液可以根据白细胞测定方法适当地准备，例如进行下述实施例4中所示的髓过氧化物酶的POD活性测定时，可使用过氧化氢水溶液和包含3，3’，5，5’-四甲基联苯胺(TMB)的TMB溶液(和光纯药株式会社制)。此外，例如进行下述实施例5中所示的白细胞酯酶活性测定时，可使用ρΗ8.6的0.1M硼酸缓冲液。这里，酯酶底物3-(N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)吲哚预先含浸于载体使其干燥。还有，例如进行下述实施例6中所示的酶免疫法时，可使用用含有150mM NaCl的pH7.2的IOmM磷酸缓冲液将酶标记抗体(ALP标记抗中性粒细胞抗体)稀释而得的溶液、以及BCIP/NBT磷酸酶底物(KPL公司(今卟夕方一 F'.τ > K * ^ 'J — * 9术9卜'J 一文社)制)。
[0041]如果进行含有蒸馏水、纯净水、表面活性剂的溶液等非等渗的洗涤液或反应试剂液的滴加，则红细胞和白细胞溶解，而通过白细胞的溶解，内部的酶等释放出来，其结果是，能得到促进白细胞测定反应的效果。此外，通过红细胞的溶解，血红蛋白流出，与红细胞同样地在载体5中展开。还有，滴加试样、洗涤液、反应试剂液后，也可以进一步滴加反应停止液，停止反应的进行。此时，可以不受到判别测定结果所需的时间的限制，简易地进行白细胞的测定。
[0042]以下，对白细胞测定设备I的构成要素进行详述。壳体2是主要为了防止对测定者的感染和对测定环境的污染而覆盖载体5的非透明或半透明的构件。壳体2的主体部3是一面侧开口的有底容器，在主体部3的底部的内表面设置有多个载体5定位用的导向器
6。此外，盖部4设置成相对于主体部3自由地装卸。在利用导向器6将载体5安设于主体部3的状态下将盖部4安装于主体部3，从而成为能进行白细胞的测定的状态。另外，主体部3和盖部4可以通过铰链连结。
[0043]壳体2的材料只要不对测定造成阻碍就没有特别限定，例如使用ABS (丙烯腈-丁二烯-苯乙烯)树脂、聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚偏氯乙烯树脂、聚苯醚、热塑性聚氨酯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚氧乙烯、氟树脂、聚碳酸酯、聚酰胺、缩醛树脂、丙烯酸树月旨、聚对苯二甲酸乙二醇酯等热塑性树脂、或酚醛树脂、环氧树脂、有机硅树脂、不饱和聚酯等热固性树脂。
[0044]壳体2的盖部4上如图1所示，形成有用于滴加来源于血液的试样S的圆形的开口部11、用于确认载体5中的来 源于血液的试样S的展开状态的矩形的展开确认窗口 12。开口部11呈直径从盖部4的外壁侧向内壁侧逐渐减小的锥形，确保来源于血液的试样S容易流向载体5侧。
[0045]从开口部11来看，展开确认窗口 12在载体5的长度方向上隔开规定的距离，在该位置上，壳体2内的载体5露出。开口部11和展开确认窗口 12之间的距离可根据来源于血液的试样S的滴加量、构成载体5的纤维滤器(下述)的孔径、膜厚、宽度等来适当改变。
[0046]关于该距离，较好是来源于血液的试样S的滴加量越多距离越长，较好是滴加量越少距离越短。此外，较好是纤维滤器的孔径越大距离越长，较好是孔径越小距离越短。较好是纤维滤器的膜厚越薄距离越长，较好是膜厚越厚距离越短。还有，较好是载体5的宽度越窄距离越长，较好是宽度越宽距离越短。此外，考虑到白细胞测定设备I的使用难易程度和成本等，该距离较好为5mm以上，另一方面，较好为IOOmm以下，更好为50mm以下。
[0047]此外，展开确认窗口 12的性质除了上述矩形以外，也可以是圆形、椭圆形、多边形、星形等。还有，较好是开口部11和展开确认窗口 12为不同形状，或者展开确认窗口 12的尺寸比开口部11小。此时，可防止测定者错误地将来源于血液的试样S滴加于展开确认窗口 12。展开确认窗口 12只要能从壳体2的外部观察载体5即可，既可以是开口部，也可以在开口部设置具有透明性的膜等。此外，也可以是在展开确认窗口 12的位置上使壳体2透明的形态。展开确认窗口 12还可以是沿着壳体的长度方向细长地延伸的形状。除了该展开确认窗口 12以外，壳体2还可以设置有用于促进来源于血液的试样S的展开的通气孔，为了同样的目的，可以在壳体2内配置吸收垫。[0048]另外，壳体2的颜色较好是选择在测定前后不会妨碍从开口部11和展开确认窗口12看见的载体5的颜色的识别的颜色。例如，红细胞和/或血红蛋白的颜色在刚滴加于载体5后为红色，而随着时间的推移变成茶褐色。因此，作为壳体2的颜色，较好是避免采用红?茶褐色。
[0049]如果基于国际照明委员会(CIE)的Yxy表色系统中的xy色度图(CIE1931)来表示壳体2的颜色的优选值，则Y的值没有限定，而X的值较好为0.6以下。此外，X的值为0.5以上时，y的值较好为0.3以上，更好为0.4以上。X的值为0.4以上时，y的值较好为0.2以上，更好为0.25以上。X的值为0.32以上时，y的值较好为0.15以上，更好为0.2以上。X的值小于0.32时，y的值无特别限定。Yxy表色系统中，Y的值是与亮度相对应的反射率，xy是色度。
[0050]载体5是捕捉、分离来源于血液的试样S中所含有的白细胞的构件。载体5的大小可以考虑到来源于血液的试样的量和载体5的成本等来适当设定，壳体2像白细胞测定设备I那样呈扁平的近似长方体形状时，例如为宽3mm?7mm作用、长20mm?150mm左右、厚
0.3mm?1.2mm左右的长方形状。为了使红细胞、血红蛋白及其它液体成分通过侧向流动而展开，载体5的膜厚较好为0.3mm?1.2mm,更好为0.7mm?1.0mm。此时，壳体2的大小例如可以是宽3mm?20mm左右、长20mm?160mm左右。此外，壳体2的厚度较好为0.5mm?15mm,更好为Imm?8mm。另外,壳体2的大小和厚度可以考虑到本发明的白细胞测定设备的构成、使用难易程度、成本和载体5的大小、厚度等来适当设定。载体5除了上述长方形状以外，可以采用矩形和圆形等形状，为矩形时，较好是一边为20mm?50mm左右，为圆形时，较好是直径为20mm?50mm左右。此外，载体5为矩形时,较好是壳体2的一边为20mm?60mm左右,载体5为圆形时,较好是壳体2的直径为20mm?60mm左右。
[0051]载体5的材料只要是能均一地捕捉白细胞的材料就没有特别限定，例如可使用采用聚氨酯、聚偏氟乙烯、聚砜、聚乙烯、聚丙烯、乙酸纤维素、聚酯、聚酰胺、聚丙烯腈等合成纤维、玻璃纤维等无机纤维、纤维素、绵、丝绸、羊毛等天然纤维等的纤维滤器。
[0052]此外，为了适合于白细胞的捕捉、分离，纤维滤器的孔径例如为3μπι?ΙΟμπι左右。另外，为了提高白细胞捕捉效率，可以使用纤维滤器的表面具有正的表面电荷的纤维滤器、涂布有甲基丙烯酸羟基乙酯和甲基丙烯酸二乙氨基乙酯的共聚物之类的白细胞选择附着性物质的纤维滤器。
[0053]该载体5通过主体部3的导向器6以定位好的状态配置在壳体2内，使得如图2所示，在俯视下与开口部11和展开确认窗口 12重叠。载体5中，与开口部11重叠的部分成为滴加来源于血液的试样S的滴加位置5a。在滴加位置5a处可以预先含浸有白细胞的显色反应用的试剂的一部分或全部。
[0054]试剂根据白细胞的测定方法来适当选择。白细胞的测定方法只要是基于白细胞内部的酶、蛋白质或白细胞表面抗原的方法即可，无特别限定。作为白细胞的测定方法，可例举例如基于白细胞酯酶、弹性蛋白酶、髓过氧化物酶等来源于白细胞的酶活性的显色的测定，或者将弹性蛋白酶、髓过氧化物酶、乳铁蛋白、中性粒细胞、CD4等的免疫法的测定结果换算成白细胞数的方法等，除了白细胞数的测定以外，白细胞内部的酶活性等的测定方法也可以用白细胞测定设备I来实施。各测定可以是定性测定和定量测定中的任一种。显色的测定通过规定的光学装置或目测来进行。[0055]具有以上构成的白细胞测定设备I中，如图3所示，如果从开口部11向载体5滴加来源于血液的试样S，则来源于血液的试样S中所含有的成分中，只有白细胞被捕捉在来源于血液的试样S的滴加位置5a附近。另一方面，红细胞和/或血红蛋白之类的其它成分通过毛细现象和液体成分一起通过纤维滤器，主要沿着载体5的长度方向展开。在滴加位置5a，发生由试剂和白细胞内部的酶、蛋白质或白细胞表面抗原的反应而引起的显色，基于该显色状态，进行白细胞的定性测定(白细胞的正常、异常的判定)、白细胞数的定量测定、白细胞内部的酶活性的定性测定或定量测定等。
[0056]另一方面，白细胞测定设备I中，在沿着载体5中的来源于血液的试样S的展开方向从开口部11隔开的位置上设置有使载体5露出的展开确认窗口 12。因此，通过从展开确认窗口 12确认从滴加位置5a展开的红细胞和/或血红蛋白的颜色，能判别白细胞测定设备I是否使用过，能以简易的构成防止由于测定者的失误而造成的重复使用。另外，展开至展开确认窗口 12的位置的红细胞和/或血红蛋白在测定结束后也留在该位置。因此，即使经过时间的推移，也能判别白细胞测定设备I是否使用过。
[0057]上述白细胞测定设备I可以是将反应试剂和/或洗涤液和/或稀释液制成套装而得的试剂盒。此外，也可以是在白细胞测定设备I内的空间中以液状试剂的形式具有反应试剂这样的构成的试剂盒。还有，该试剂盒也可以包含反应停止液、用于判定白细胞的显色的色调表、采血用的穿刺器等。
[0058]使用白细胞测定设备I时的开口部11和展开确认窗口 12处的白细胞的试剂显色、红细胞和/或血红蛋白的着色与白细胞的测定结果是否恰当之间的关系如图4所示。如该图所示，在开口部11处确认到白细胞的试剂显色、在展开确认窗口 12处确认到红细胞和/或血红蛋白的着色的情况下(情况1)，测定结果恰当，无需重新测定。在开口部11处确认到白细胞的试剂显色、并且确认到红细胞和/或血红蛋白的着色、而在展开确认窗口 12处未确认到红细胞和/或血红蛋白的着色的情况下(情况2)，测定结果不恰当，需要重新测定。在开口部11处未确认到白细胞的试剂显色、而在展开确认窗口 12处确认到红细胞和/或血红蛋白的着色的情况下(情况3)，测定结果恰当，无需重新测定。在开口部11处未确认到白细胞的试剂显色、在展开确认窗口 12处未确认到红细胞和/或血红蛋白的着色的情况下(情况4)，测定结果不恰当，需要重新测定。如上所述，在白细胞测定设备I中，从开口部11滴加来源于血液的使用S后，经过一定时间后，在展开确认窗口 12处确认红细胞和/或血红蛋白的着色的有无，从而能判断测定是否恰当地进行。
[0059]在展开确认窗口 12处确认到红细胞和/或血红蛋白的着色的情况下，将开口部11处的白细胞的试剂显色的程度通过规定的测定法参照设定好的标准来进行“白细胞在正常范围内”、“白细胞为高值”之类的判定和白细胞数的换算等。此外，在展开确认窗口 12处无法确认到红细胞和/或血红蛋白的着色的情况下，白细胞的分离未良好地进行，白细胞以外的血液成分留在滴加位置5a而对白细胞测定反应造成影响的可能性高。此外，白细胞以外的成分既有抑制显色的可能性，也有促进反应的可能性。因此，无论开口部11处的白细胞的试剂显色的有无，都判断为测定结果不恰当，需要进行重新测定。
[0060]本发明不限于上述实施方式。例如，上述实施方式中在壳体2的盖部4上设置开口部11和展开确认窗口 12，但也可以像例如图5所示的白细胞测定设备21那样，在壳体2的盖部4上设置开口部11，在主体部3上设置展开确认窗口 12。此外，也可以像例如图6所示的白细胞测定设备31那样，将开口部11设置于盖部4的长度方向的一端侧，从该开口部11向盖部4的另一端侧沿着载体5的长度方向设置多个展开确认窗口 12。此时，能更详细地确认红细胞和/或血红蛋白的展开状态。
[0061]此外，上述实施方式中使用长方形状的载体5，但也可以像例如图7所示的白细胞测定设备41那样，使用正方形状的载体45。此时，壳体42只要是与载体45的形状相匹配地在俯视下为正方形状的形状即可。图7所示的例子中，在壳体42的盖部44的上表面的中央设置有开口部11，展开确认窗口 12在开口部11的周围与载体45的四个角相对应地设置4处。该例子中，如果向载体45滴加来源于血液的试样S，则红细胞和/或血红蛋白从滴加位置45a以放射状展开。因此，通过在上述位置设置展开确认窗口 12，能容易地确认红细胞和/或血红蛋白的展开状态。
[0062]此外，壳体2未必一定要由主体部3和盖部4构成，也可以像例如图8所示的白细胞测定设备51那样，是用与载体5同样呈长方形状的上板52和下板53将载体5夹住的构成。此时，例如只要在上板52上设置开口部11和展开确认窗口 12即可。此外，也可以像图9所示的白细胞测定设备61那样，使壳体2的宽度和载体5大致相等，相对于壳体2无间隙地配置载体5。还有，开口部11未必一定要设置成锥形，也可以像图10所示的白细胞测定设备71那样，采用直径恒定的截面为圆形的开口部72。
[0063]实施例
[0064]下面示出本发明的实施例，但是本发明不被这些实施例所限定。
[0065]实施例1中，将GE医疗公司(G E、> 77社)制GF/DVA裁切成宽4mm、长IlOmm作为载体，将其安设于宽20mm、长120mm的壳体，构成白细胞测定设备。在壳体上，在长度方向的端部设置开口部，并且在距离开口部5mm的位置、距离开口部50mm的位置和距离开口部IOOmm的位置上分别设置展开确认窗口(下面，从开口部开始从近到远依次记作展开确认窗口 A?C)。从开口部向该白细胞测定设备滴加5μ I的血液后，滴加100μ I的生理盐水。其结果是，白细胞被捕捉在滴加位置，红细胞和部分溶血的血红蛋白沿着载体的长度方向展开，在展开确认窗口 A处能确认到红色。
[0066]实施例2中，使用与实施例1同样的白细胞测定设备，从开口部滴加50 μ I的血液。其结果是，白细胞被捕捉在滴加位置，红细胞沿着载体的长度方向展开，在展开确认窗口 A处能确认到红色。然后，向开口部滴加200 μ I的蒸馏水，结果在展开确认窗口 B处能确认到红色。然后，向开口部滴加300 μ I的蒸馏水，结果在展开确认窗口 C处能确认到红色。
[0067]实施例3中，将GE医疗公司制GF/DVA裁切成边长为20mm的正方形作为载体，将其安设于边长为30mm的正方形的壳体，构成白细胞测定设备。在壳体上，在中央设置开口部，并且与载体的四个角相对应地在距离开口部5mm的位置上设置四个展开确认窗口(下面记作展开确认窗口 A?D)。从开口部向该白细胞测定设备滴加50μ I的血液后，滴加100μ I的生理盐水。其结果是，白细胞被捕捉在滴加位置，红细胞和部分溶血的血红蛋白从滴加位置以放射状展开，在展开确认窗口 A?D处全都能确认到红色。
[0068]实施例4中，将GE医疗公司制VFE裁切成宽4mm、长70mm作为载体，将其安设于宽16mm、长80mm的壳体，构成白细胞测定设备。在壳体上，在中央设置开口部，并且在距离开口部8mm的位置上设置一个展开确认窗口(下面记作展开确认窗口 A)。从开口部向该白细胞测定设备滴加5 μ I的血液后,滴加50 μ I的蒸馏水。然后，滴加过氧化氢和50μ I的包含3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺(TMB)的POD活性测定用的反应试剂液(和光纯药株式会社制TMB溶液)。其结果是，在开口部处能确认到由于白细胞的POD活性而导致的蓝色的显色。此外，红细胞和部分溶血的血红蛋白从滴加位置沿着载体的长度方向展开，在展开确认窗口 A处能确认到红色。
[0069]实施例5中，将GE医疗公司制GF/DVA裁切成宽4mm、长70mm作为载体，在设定于载体中央的滴加位置滴加溶解有IOmg的3-(N-甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)吲哚的乙醇溶液50 μ I作为反应试剂，在60°C下干燥10分钟。接着，将该载体安设于与实施例4同样的壳体，构成白细胞测定设备。从开口部向该白细胞测定设备滴加5μ I的血液后，滴加100 μ I的ΡΗ8.6的0.1M硼酸缓冲液，开始反应。其结果是，在开口部处能确认到由于白细胞的酯酶活性而导致的靛青的蓝色的显色。此外,红细胞和部分溶血的血红蛋白从滴加位置沿着载体的长度方向展开，在展开确认窗口 A处能确认到红色。
[0070]实施例6中，构成与实施例1同样的白细胞测定设备。从开口部向该白细胞测定设备滴加5 μ I的血液后，滴加用含有150mM NaCl的pH7.2的IOmM磷酸缓冲液将酶标记抗体(ALP标记抗中性粒细胞抗体)稀释而得的溶液50μ1。此外，从开口部滴加包含5_溴-4-氯-3-吲哚氧基磷酸酯(BCIP)和氮蓝四唑(NBT)的作为发色试剂的KPL公司制BCIP/NBT磷酸酶底物100μ I。其结果是，未反应的酶标记抗体被洗掉，在开口部处能确认到由于与白细胞结合的酶标记抗体的ALP活性而导致的紫色的显色。此外，红细胞和部分溶血的血红蛋白沿着载体的长度方向展开,在展开确认窗口 A处能确认到红色。
[0071]符号的说明
[0072]I, 21，31，41，51，61，71…白细胞测定设备、2，42…壳体、5，45…载体、5a，45a…滴加位置、11，72…开口部、12...展开确认窗口、S...来源于血液的试样。
【权利要求】
1.白细胞测定设备，其特征在于，包括: 壳体，该壳体设置有滴加来源于血液的试样的开口部；及 载体，该载体收纳在所述壳体内，将从所述开口部滴加的所述来源于血液的试样中所含有的成分中的白细胞捕捉在滴加位置附近，使其它成分朝规定方向展开； 所述壳体中，在沿着所述其它成分的展开方向从所述开口部隔开的位置上设置有展开确认窗口，该展开确认窗口能从外部观察所述载体。
2.如权利要求1所述的白细胞测定设备，其特征在于，沿着所述展开方向设置有一个以上的所述展开确认窗口。
3.如权利要求1或2所述的白细胞测定设备，其特征在于，在所述载体的所述滴加位置上含浸有所述白细胞的显色反应用的试剂的一部分或全部。
4.试剂盒，其特征在于，包含权利要求1?3中任一项所述的白细胞测定设备、所述白细胞的显色反应用的试剂和/或洗涤液和/或稀释液。
【文档编号】G01N33/52GK103718040SQ201280036646
【公开日】2014年4月9日 申请日期:2012年8月10日 优先权日:2011年8月24日
【发明者】阿部敏明, 和田厚文, 大山干人 申请人:荣研化学株式会社