专利名称：一种巴旦油脂肪酸成分指纹图谱的构建方法
技术领域：
本发明涉及中药指纹图谱的建立方法，具体涉及巴旦油脂肪酸成分GC-MS指纹图谱的构建方法。
背景技术：
巴旦仁为巴旦杏干燥成熟的种子，巴旦杏communis L.),又称扁桃，维吾尔名为巴旦姆、巴达姆等，英文名Almond,是蔷薇科Qioseiceeie')李亚科iPmnoideae')桃属(Amygdalus L.)乔木,原产西亚和中亚山区,尤以美国加利福尼亚种植面积最大，中国主要集中在西北和西南地区，又以新疆天山以南的阿克苏，喀什、和田、库尔勒、阿图什种植的较多。巴旦仁，商品名为美国大杏仁，不仅作为营养丰富的坚果可直接食用，还研发出巴旦仁酒、饮料等产品；同样巴旦仁也具有较高的药用价值，在新疆喀什的维吾尔医药中，60%的维吾尔医药制剂都配有它。巴旦仁收载于《卫生部药品标准-维吾尔药分册》，其气微，味甘；具有助护营养力，强身健脑，明目养颜，润肠止咳的功效；用于身体虚弱，咳嗽多痰，胸闷便秘，视弱面暗。现代药理实验表明，巴旦仁具有抗氧化、降低血胆固醇、预防心血管疾病、抗肿瘤、增强免疫能力、保肝等作用。巴旦仁主要含脂肪油、皂苷类、蛋白质、留醇类、磷脂类等化学成分，其中脂肪油占55-66%。巴旦油是通过压榨提取或有机溶剂提取得到的脂肪油，目前主要应用于食品、化妆品领域，巴旦油中的脂肪酸以不饱和脂肪酸为主，主要有油酸、亚油酸、亚麻酸等成分。现代药理学的研究表明，巴旦油具有抗氧化、降低血脂、血胆固醇、保肝等作用，这些作用与其所含的不饱和防酸成分有着直接关系。然而巴旦杏的产地分布较广，种植品的种类繁多，仅在新疆喀什种植品就有十几种，因此不同产地、不同品种的巴旦仁其含油量、脂肪酸成分也有不同；同时，受自然气候、种植条件等多种因素的影响，同一地区同一品种的巴旦油之间也会产生不同程度的差异。鉴于巴旦仁的食、药两用价值，有必要对巴旦油的质量进行控制，目前对巴旦油的研究很多，主要集中在脂肪油的提取方法、成分分析、药理活性这三方面，没有关于巴旦油质量标准研究方面的报道，特别是从整体特征面貌上把握巴旦油的品质和质量。因此，本发明为了控制巴旦油的质量，利用气质联用技术(GC-MS)建立了巴旦油指纹图谱的方法，并确立了巴旦油的标准指纹图谱。
发明内容
本发明的目的是提供一种巴旦油脂肪酸成分指纹图谱的构建方法，该方法是由巴旦油提取，甲酯化供试品溶液的制备，GC-MS分析，分析巴旦油供试品溶液，得到巴旦油脂肪酸成分的指纹图谱这几个步骤完成，通过对比所得巴旦油的GC-MS指纹图谱，确定共有峰9个，得到标准指纹图谱。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征面貌上控制巴旦油的质量，保证其质量稳定、可控，以此弥补巴旦油质量控制的空白，从而为巴旦油的质量控制提供科学的依据。本发明所述的一种巴旦油脂肪酸成分指纹图谱的构建方法，按下列步骤进行:
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，过20目筛，置锥形瓶中，加入正己烷，室温下超声50分钟，滤过，滤液挥干，即得黄色透明巴旦油状液体；
b、甲酯化供试品溶液的制备:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入2mL石油醚和甲苯的混合溶剂，轻轻振摇2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，室温下静置10-15 min，待溶液澄清后加蒸馏水定容，旋转容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液悬浮至容量瓶颈上部，再在上清液中加无水乙醇使其迅速澄清，取上清液经无水硫酸钠干燥后，作为供试品溶液；
C、气相色谱质谱分析:精密吸取供试品溶液0.2 μ L，注入GC-MS色谱仪，色谱条件为:色谱柱:HP-1NN0WAX毛细管柱30 mX0.25mmX0.25 μ m，载气为氦气；进样口温度260°C;进样量0.2 μ L ;分流比100:1 ;升温程序:起始温度为100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升温至180°C，保持2min，以2V /min升温至220°C，保持5min ；
质谱条件:电离方式为EI，电离能量为70eV，离子源发生器温度为230°C，质量扫描范围为 30-350amu ；
d、分析巴旦油供试品溶液，通过对12批次巴旦仁建立的指纹图谱的分析比较，确定了9 个共有特征峰，其保留时间分别为 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674，20.705，24.613，25.207分钟，由这9个共有峰构成巴旦油脂肪酸成分的指纹特征，作为巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱。步骤a中巴旦仁粉末与正己烷的料液质量体积比为1:20。步骤b石油醚和甲苯的混合溶剂的体积比1:1。本发明还提供了一种由上述构建方法得到的巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱，该标准图谱是通过对12批次不同产地的巴旦仁采用上述构建方法得到的色谱图进行分析比较，确定了 9个共有特征峰，9个共有峰的保留时间分别为14.460，14.991，16.559，17.102 ,19.035 ,19.674 ,20.705 ,24.613，25.207 分钟，由这 9 个共有峰构成巴旦油脂肪酸成分的指纹特征，作为巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱。本发明的有益效果在于:通过巴旦油脂肪酸成分的指纹图谱，可反映出巴旦油样品中脂肪酸的主要成分及其比例，能从化学成分的整体面监控巴旦油的质量，且本方法简单、重现性好、精密度高，能应用于快速、准确的检测。
图1为本发明的巴旦油样品脂肪酸成分的指纹图谱，其中图中标示了 9个共有特征峰的峰号。图2为本发明的巴旦油脂肪酸成分标准指纹图谱，其中图中标示了 9个共有特征峰的峰号。
具体实施例方式以下通过一具体实施例对本发明做进一步的阐述。仪器:Agilent7890A-5975C GC-MS (美国 Agilent 公司)，色谱柱:HP_INN0WAX 毛细管柱(30 mX0.25mmX0.25 u m)；
样品:12批巴旦仁经鉴定为蔷薇科扁桃属植物扁桃的干燥成熟种子；
试药:正己烷、甲苯为分析纯；
实施例1
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，过20目筛，置锥形瓶中，加入正己烷，室温下超声50分钟，滤过，滤液挥干，即得黄色透明巴旦油状液体，其中巴旦仁粉末与正己烷的料液质量体积比为1:20 ；
b、甲酯化供试品溶液的制备:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入体积比为1:1石油醚和甲苯的混合溶剂2 mL，轻轻振摇2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，室温下静置10-15 min，待溶液澄清后加蒸馏水定容，旋转容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液悬浮至容量瓶颈上部，再在上清液中加无水乙醇使其迅速澄清，取上清液经无水硫酸钠干燥后，作为供试品溶液；
C、气相色谱质谱(GC-MS)分析:精密吸取供试品溶液0.2 u L，注入GC-MS色谱仪，色谱条件为:色谱柱:HP-1NNOWAX毛细管柱30 mX 0.25mmX 0.25 y m，载气为氦气；进样口温度260°C ;进样量0.2iiL;分流比100:1 ;升温程序:起始温度为100°C，保持2min，以温度IO0C /min的速率程序升温至180°C，保持2min，以温度2V /min升温至220°C，保持5min ；
质谱条件:电离方式为EI，电离能量为70eV，离子源发生器温度为230°C，质量扫描范围为 30-350amu ；
d、分析巴旦油供试品溶液，通过对12批次巴旦仁建立的指纹图谱的分析比较，确定了9 个共有特征峰，其保留时间分别为 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674,20.705 ,24.613，25.207分钟，由这9个共有峰构成巴旦油脂肪酸成分的指纹特征，作为巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱；
对得到的标准指纹图谱中的共有峰的归属:精密吸取棕榈酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、硬脂酸甲酯对照品溶液，在步骤c的色谱条件下进样分析，对比相对保留时间可知，指纹图谱中第1、5、6、7号共有峰分别为棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯色谱峰。实施例2
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，过20目筛，置锥形瓶中，加入正己烷，室温下超声50分钟，滤过，滤液挥干，即得黄色透明巴旦油状液体，其中巴旦仁粉末与正己烷的料液质量体积比为1:20 ；
b、甲酯化供试品溶液的制备:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入体积比为1:1石油醚和甲苯的混合溶剂2 mL，轻轻振摇2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，室温下静置10-15 min，待溶液澄清后加蒸馏水定容，旋转容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液悬浮至容量瓶颈上部，再在上清液中加无水乙醇使其迅速澄清，取上清液经无水硫酸钠干燥后，作为供试品溶液；
C、气相色谱质谱(GC-MS)分析:精密吸取供试品溶液0.2 ii L，注入GC-MS色谱仪，色谱条件为:色谱柱:HP-1NN0WAX毛细管柱30 mX0.25mmX0.25 y m，载气为氦气；进样口温度2600C ;进样量0.2iiL;分流比100:1 ;升温程序:起始温度为100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升温至180°C，保持2min，以2V /min升温至220°C，保持5min ； 质谱条件:电离方式为EI，电离能量为70eV，离子源发生器温度为230°C，质量扫描范围为 30-350amu ；
d、分析巴旦油供试品溶液，通过对12批次巴旦仁建立的指纹图谱的分析比较，确定了9 个共有特征峰，其保留时间分别为 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674，20.705，24.613，25.207分钟，由这9个共有峰构成巴旦油脂肪酸成分的指纹特征，作为巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱；
对得到的标准指纹图谱中的共有峰的归属:精密吸取棕榈酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、硬脂酸甲酯对照品溶液，在步骤c的色谱条件下进样分析，对比相对保留时间可知，指纹图谱中第1、5、6、7号共有峰分别为棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯色谱峰。 实施例3
a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，过20目筛，置锥形瓶中，加入正己烷，室温下超声50分钟，滤过，滤液挥干，即得黄色透明巴旦油状液体，巴旦仁粉末与正己烷的料液质量体积比为 1:20 ；
b、甲酯化供试品溶液的制备:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入体积比1:1石油醚和甲苯的混合溶剂2 mL,轻轻振摇2 min,使油脂溶解,再加入3 mL 0.4 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，室温下静置10-15 min，待溶液澄清后加蒸馏水定容，旋转容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液悬浮至容量瓶颈上部，再在上清液中加无水乙醇使其迅速澄清，取上清液经无水硫酸钠干燥后，作为供试品溶液；
C、气相色谱-质谱(GC-MS)分析:精密吸取供试品溶液0.2 μ L，注入GC-MS色谱仪，色谱条件为:色谱柱:HP-1NN0WAX毛细管柱30 mX0.25mmX0.25 μ m，载气为氦气；进样口温度260°C;进样量0.2 μ L ;分流比100:1 ;升温程序:起始温度为100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升温至180°C，保持2min，以2V /min升温至220°C，保持5min ；
质谱条件:电离方式为EI，电离能量为70eV，离子源发生器温度为230°C，质量扫描范围为 30-350amu ；
d、分析巴旦油供试品溶液，通过对12批次巴旦仁建立的指纹图谱的分析比较，确定了9 个共有特征峰，其保留时间分别为 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674，20.705，24.613，25.207分钟，由这9个共有峰构成巴旦油脂肪酸成分的指纹特征，作为巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱；
对得到的标准指纹图谱中的共有峰的归属:精密吸取棕榈酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯、硬脂酸甲酯对照品溶液，在步骤c的色谱条件下进样分析，对比相对保留时间可知，指纹图谱中第1、5、6、7号共有峰分别为棕榈酸甲酯、硬脂酸甲酯、油酸甲酯、亚油酸甲酯色谱峰。
权利要求
1.一种巴旦油脂肪酸成分指纹图谱的构建方法，其特征在于按下列步骤进行: a、巴旦油提取:取巴旦仁粉末，过20目筛，置锥形瓶中，加入正己烷，室温下超声50分钟，滤过，滤液挥干，即得黄色透明巴旦油状液体； b、甲酯化供试品溶液的制备:取0.16g-0.19g巴旦油加入10 mL容量瓶中，再加入2mL石油醚和甲苯的混合溶剂，轻轻振摇2 min，使油脂溶解，再加入3 mL 0.4 mol/L氢氧化钾-甲醇溶液，室温下静置10-15 min，待溶液澄清后加蒸馏水定容，旋转容量瓶，使全部石油醚-甲苯-甲醇溶液悬浮至容量瓶颈上部，再在上清液中加无水乙醇使其迅速澄清，取上清液经无水硫酸钠干燥后，作为供试品溶液； C、气相色谱质谱分析:精密吸取供试品溶液0.2 μ L，注入GC-MS色谱仪，色谱条件为:色谱柱:HP-1NNOWAX毛细管柱30 mX0.25mmX0.25 μ m，载气为氦气；进样口温度260°C;进样量0.2 μ L ;分流比100:1 ;升温程序:起始温度为100°C，保持2min，以10°C /min的速率程序升温至180°C，保持2min，以2V /min升温至220°C，保持5min ； 质谱条件:电离方式为EI，电离能量为70eV，离子源发生器温度为230°C，质量扫描范围为 30-350amu ； d、分析巴旦油供试品溶液，通过对12批次巴旦仁建立的指纹图谱的分析比较，确定了9 个共有特征峰，其保留时间分别为 14.460，14.991，16.559，17.102，19.035，19.674,20.705 ,24.613，25.207分钟，由这9个共有峰构成巴旦油脂肪酸成分的指纹特征，作为巴旦油脂肪酸成分的标准指纹图谱。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤a中巴旦仁粉末与正己烷的料液质量体积比为1:20。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于步骤b中石油醚和甲苯的混合溶剂的体积比 1:1。
全文摘要
本发明涉及一种巴旦油脂肪酸成分指纹图谱的构建方法，该方法是由巴旦油提取，甲酯化供试品溶液的制备，GC-MS分析，分析巴旦油供试品溶液，得到巴旦油脂肪酸成分的指纹图谱步骤完成，通过对比所得巴旦油的GC-MS指纹图谱，确定共有峰9个，得到标准指纹图谱。该方法简便、稳定、精密度高、重现性好，能从整体特征面貌上控制巴旦油的质量，保证其质量稳定、可控，以此弥补巴旦油质量控制的空白，从而为巴旦油的质量控制提供科学的依据。
文档编号G01N30/02GK103175923SQ201310077220
公开日2013年6月26日 申请日期2013年3月12日 优先权日2013年3月12日
发明者阿吉艾克拜尔·艾萨, 徐江玲 申请人:中国科学院新疆理化技术研究所