丹蒌片指纹图谱检测方法
【专利摘要】本发明涉及一种丹蒌片指纹图谱检测方法，其中色谱条件为：以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0.1%甲酸水溶液为B相组成流动相，采用梯度洗脱方式，检测波长为280±2nm，250±2nm流速0.5-1.5mL/min，柱温20-50°C，进样量1-25yl;指纹图谱共有特征指纹峰15个，其峰面积综合占总峰面积的90%以上;5号色谱峰是葛根素的特征峰，葛根素特征峰的相对保留时间和相对保留面积为1，计算其他峰的相对保留时间和相对峰面积，即得到丹蒌片的标准指纹图谱共有特征峰。本发明方法具有精密度高、稳定、重现性好、加样回收率高、方法简便的特点，能快速、准确地鉴别产品的真伪优劣。
【专利说明】丹蒌片指纹图谱检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及中药制剂的指纹图谱检测方法，具体涉及丹萎片的的指纹图谱检测方 法。
【背景技术】
[0002] 中药指纹图谱是指某种或某几种中药材中所共有的，具有特征性的某类成分的色 谱或光谱的图谱。目前，中药指纹图谱质量控制技术作为控制中药质量均一性和稳定性的 检测手段，是实现中药现代化的一种关键技术，对有效控制中药制剂的质量具有重要意义。 对于成分复杂的中药，过去那种以单一有效成分作为其质量控制指标的做法是不全面的。 色谱指纹图谱质量控制模式以色谱分析为手段，从中获取反应中药内在质量的信息，通过 对指纹特征的分析比较，评价中药内在质量的真实性、一致性和稳定性，是现阶段综合评价 中药质量的最优技术，国家食品药品监督管理局已要求中药制剂实施指纹图谱质量控制。
[0003] 丹萎片由瓜萎皮、薤白、葛根、川芎、丹参、赤芍、泽泻、黄芪、骨碎补、郁金制 成，具有痰消瘀化、血脉和畅、痹宜痛止功效，用于治疗冠心病、心绞痛。中国专利文献 CN102908583A公开了该组合物的质量控制方法，采用薄层色谱法分别以川芎、芍药苷、丹参 酮II A、黄芪甲苷中的一种或多种为对照品在各特定色谱条件下的薄层斑点为对照鉴别，用 高效液相色谱法以葛根素为对照品测定葛根含量，上述方法难以全面表征丹萎片的物理化 学特征，因此对丹萎片的质量控制方法有待进一步提高。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于提供一种丹萎片指纹图谱方法，该方法具有简便、稳定、精密度 高、重现性好、易于掌握的特点。
[0005] 中国专利文献CN102908583A公开了丹萎片由下列重量份数的原料制成：
[0006] 瓜萎皮30-145重量份、薤白15-65重量份、葛根55-220重量份、川芎20-85重量 份、丹参55-220重量份、赤芍20-85重量份、泽泻55-220重量份、黄芪50-180重量份、骨碎 补10-40重量份、郁金20-85重量份；
[0007] 制备方法是：取原料药，川芎、郁金、泽泻粉碎成细粉，过筛，混匀；赤芍、瓜萎皮、 薤白加70%乙醇加热回流提取1-3次，每次1-2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙 醇，浓缩至相对密度为1. 25-1. 30, 65°C测；葛根和丹参，单包，加乙醇回流提取2-4次，每次 0. 5-2小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1. 25-1. 30, 65°C测； 黄芪、骨碎补及丹参醇提后的药渣，加水煎煮1-3次，每次1-2小时，合并煎液，滤过，滤液减 压浓缩至相对密度为1. 25-1. 30, 65°C测；将三种浓缩液与上述细粉混合，减压干燥，粉碎， 加入常规辅料，按照常规工艺，制成片剂等剂型；
[0008] 或制备方法为取原料药，川芎、郁金、泽泻粉碎成细粉，过筛，混匀；赤芍、瓜萎皮、 薤白加70%乙醇加热回流提取二次，每次1. 5小时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇， 浓缩至相对密度为1. 25-1. 30, 65°C测；葛根和丹参，单包，加乙醇回流提取三次，每次1小 时，合并提取液，滤过，滤液减压回收乙醇，浓缩至相对密度为1.25-1. 30, 65°C测；黄芪、骨 碎补及丹参醇提后的药渣，加水煎煮二次，每次1. 5小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至 相对密度为1. 25-1. 30, 65°C测；将三种浓缩液与上述细粉混合，减压干燥，粉碎，加入常规 辅料，按照常规工艺，制成片剂等剂型。
[0009] 本发明提供一种丹萎片指纹图谱检测方法，其特征在于该方法为：
[0010] 取丹萎片，研磨，称取粉末〇· 2-0. 5g，加入50-80%甲醇溶液，超声提取20-50min， 放至室温，用甲醇补足重量，摇匀，离心，取上清液，即得供试品溶液；
[0011] 其中色谱条件为：以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0. 1%甲酸水溶 液为B相组成流动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间与流动相比例为：
[0012] 0-411^11，六相：4-10%、8相：96-90%，4-2311^114相 ：10-14%、8相：90-86%，23-2511^11， A 相：14-20%、B 相：86-80%，25-28min，A 相：20-21%、B 相：80-79%，28-33min，A 相：21-22%、 B 相：79-78%，33-43minA 相：22-40%、B 相：78-60%，43-48min，A 相：40-90%、B 相：60-10%， 48-53min，A 相：90-100%、B 相：10-0% ;检测波长为 280±2nm，250±2nm，流速 0· 5-L 5mL/ min，柱温 20-50°C，进样量 1-25 μ 1 ;
[0013] 对照品标准液的制备：取5-羟甲基糠醛、丹参素、葛根素、大豆苷、丹酚酸Β、丹酚 酸Α、丹参酮II Α对照品适量，精密称重，加甲醇或乙醇或乙腈，制得5-羟甲基糠醛浓度为 0.443-14. 175 μ g/mL、丹参素浓度为 2. 85-123. 1 μ g/mL、葛根素浓度为 11. 625-372 μ g/ mL、大豆苷浓度为3. 83-122. 5 μ g/mL、丹酚酸B浓度为4. 93-157. 75 μ g/mL、丹酚酸A浓度 为2. 45-78. 46 μ g/mL、丹参酮II A浓度为0. 1992-6. 375 μ g/mL的混合对照品溶液，与供试 品溶液相同色谱条件进行测定，得到各自特征峰的保留时间；
[0014] 测定法：将供试品溶液注入高效液相色谱仪即得；
[0015] 所述丹萎片由如下原料份的原料药制成：瓜萎皮30-145份、薤白15-65份、葛根 55-220份、川芎20-85份、丹参55-220份、赤芍20-85份、泽泻55-220份、黄芪50-180份、 骨碎补10-40份和郁金20-85份。
[0016] 所述乙腈、0. 1%甲酸水溶液的体积比为55. 2-82. 8 :44. 8-17. 2。
[0017] 所述色谱条件为：以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0. 1%甲酸水 溶液为B相组成流动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间与流动相比例为：0-4min，A相： 4-10%、B 相：96-90%，4-23min，A 相：10-14%、B 相：90-86%，23-25min，A 相：14-20%、B 相： 86-80%，25-28min，A 相：20-21%、B 相：80-79%，28-33min，A 相：21-22%、B 相：79-78%， 33-43minA 相：22-40%、B 相：78-60%，43-48min，A 相：40-90%、B 相：60-10%，48-53min， A 相：90-100%、B 相：10-0% ;检测波长为 280±2nm，250±2nm，流速 0· 5-1. 5mL/min，柱温 20-50°C，进样量，10μ 1，理论板数 N 葛根素（250nm)=5. 54 (tR/Wh/2)2=85077. 9，N 葛根素 (280nm)=5. 54 (tR/Wh/2) 2=76326. 9。
[0018] 所述指纹图谱共有特征指纹峰有15个，其峰面积综合占总峰面积的90%以上； 250nm波长下，5号色谱峰是葛根素的特征峰，葛根素特征峰的相对保留时间和相对保留面 积为1，计算其他峰的相对保留时间和相对峰面积，即得到丹萎片的标准指纹图谱共有特征 峰为：
[0019] 1号峰：相对保留时间0. 323-0. 326,相对峰面积0. 001-0. 007
[0020] 2号峰：相对保留时间0· 399-0. 401，相对峰面积0· 005-0. 009
[0021] 3号峰：相对保留时间0. 416-0. 419,相对峰面积0. 005-0. 010
[0022] 4号峰：相对保留时间0· 701-0. 705,相对峰面积0· 127-0. 186
[0023] 5号峰：相对保留时间1，相对保留面积1
[0024] 6号峰：相对保留时间1. 089-1. 095,相对峰面积0. 036-0. 044
[0025] 7号峰：相对保留时间L 131-L 142,相对峰面积0· 162-0. 204
[0026] 8号峰：相对保留时间1. 183-1. 194,相对峰面积0· 110-0. 136
[0027] 9号峰：相对保留时间1. 423-1. 436,相对峰面积0· 175-0. 236
[0028] 10号峰：相对保留时间1. 631-1. 657,相对峰面积0· 023-0. 048
[0029] 11号峰：相对保留时间2. 455-2. 530,相对峰面积0· 008-0. 124
[0030] 12号峰：相对保留时间2. 500-2. 577,相对峰面积0· 052-0. 112
[0031] 13号峰：相对保留时间2. 579-2. 664,相对峰面积0· 019-0. 048
[0032] 14号峰：相对保留时间3. 225-3. 318,相对峰面积0· 014-0. 023
[0033] 15号峰：相对保留时间3. 372-3. 483,相对峰面积0· 007-0. 018。
[0034] 优选的25nm下以葛根素的色谱峰（5号色谱峰）的相对保留时间和相对保留面积 为1得到的丹萎片指纹图谱中共有特征峰为：
[0035] 1号峰：相对保留时间0· 323,相对峰面积0· 001-0. 007
[0036] 2号峰：相对保留时间0· 399,相对峰面积0· 005-0. 009
[0037] 3号峰：相对保留时间0· 416,相对峰面积0· 005-0. 010
[0038] 4号峰：相对保留时间0· 701，相对峰面积0· 127-0. 186
[0039] 5号峰：相对保留时间1，相对保留面积1
[0040] 6号峰：相对保留时间1. 089,相对峰面积0· 036-0. 044
[0041] 7号峰：相对保留时间1. 131,相对峰面积0· 162-0. 204
[0042] 8号峰：相对保留时间1. 183,相对峰面积0. 110-0. 136
[0043] 9号峰：相对保留时间1. 423,相对峰面积0· 175-0. 236
[0044] 10号峰：相对保留时间1. 631,相对峰面积0· 023-0. 048
[0045] 11号峰：相对保留时间2. 455,相对峰面积0· 008-0. 124
[0046] 12号峰：相对保留时间2. 500,相对峰面积0· 052-0. 112
[0047] 13号峰：相对保留时间2. 579,相对峰面积0· 019-0. 048
[0048] 14号峰：相对保留时间3. 225,相对峰面积0· 014-0. 023
[0049] 15号峰：相对保留时间3. 372,相对峰面积0· 007-0. 018。
[0050] 所述指纹图谱共有特征指纹峰有15个，其峰面积综合占总峰面积的90%以上； 5号色谱峰是葛根素的特征峰，葛根素特征峰的相对保留时间和相对保留面积为1，计算 280nm下其他峰的相对保留时间和相对峰面积，即得到丹萎片的标准指纹图谱共有特征峰 为：
[0051] 1号峰：相对保留时间0· 323-0. 326,相对峰面积0· 033-0. 208
[0052] 2号峰：相对保留时间0· 399-0. 401，相对峰面积0· 084-0. 160
[0053] 3号峰：相对保留时间0· 416-0. 419,相对峰面积0· 060-0. 170
[0054] 4号峰：相对保留时间0· 701-0. 705,相对峰面积0· 165-0. 259
[0055] 5号峰：相对保留时间1，相对峰面积1
[0056] 6号峰：相对保留时间1. 089-1. 095,相对峰面积0. 039-0. 052
[0057] 7号峰：相对保留时间1. 131-1. 142,相对峰面积0. 230-0. 290
[0058] 8号峰：相对保留时间1. 183-1. 194,相对峰面积0. 112-0. 130
[0059] 9号峰：相对保留时间1. 423-1. 436,相对峰面积0. 205-0. 273
[0060] 10号峰：相对保留时间1. 631-1. 657,相对峰面积0· 037-0. 089
[0061] 11号峰：相对保留时间2. 455-2. 530,相对峰面积0· 023-0. 343
[0062] 12号峰：相对保留时间2. 500-2. 577,相对峰面积0· 059-0. 129
[0063] 13号峰：相对保留时间2. 579-2. 664,相对峰面积0· 065-0. 253
[0064] 14号峰：相对保留时间3. 225-3. 318,相对峰面积0· 025-0. 047
[0065] 15号峰：相对保留时间3. 372-3. 483,相对峰面积0· 017-0. 043。
[0066] 所述指纹图谱采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，各检 测波长下的相似度均大于〇. 90.
[0067] 所述供试品溶液制备方法中50-80%甲醇溶液由0. 5-5mol/L的磷酸甲醇溶液或 0. 5-5mol/L的盐酸乙腈溶液或0. 5-5mol/L的磷酸乙腈溶液中的任意一种替换；超声提取 20-50min由加热回流5-60分钟或回流提取1-12小时或微波萃取0. 1-4小时的任意一种替 换。
[0068] 所述供试品溶液制备方法中50-80%甲醇溶液由0. 5-5mol/L的磷酸甲醇溶液或 0. 5-5mol/L的盐酸乙腈溶液或0. 5-5mol/L的磷酸乙腈溶液中的任意一种替换；超声提取 20-50min由加热回流5-60分钟或回流提取1-12小时或微波萃取0. 1-4小时的任意一种替 换。
[0069] 所述供试品溶液制备方法中50-80%甲醇溶液由0. 5-5mol/L的磷酸甲醇溶液或 0. 5-5mol/L的盐酸乙腈溶液或0. 5-5mol/L的磷酸乙腈溶液中的任意一种替换；超声提取 20-50min由加热回流5-60分钟或回流提取1-12小时或微波萃取0. 1-4小时的任意一种替 换。
[0070] 本发明所述的丹萎片原料药组成优选为：
[0071] 瓜萎皮86重量份、薤白40重量份、葛根138重量份、川弯52重量份、丹参138重量 份、赤芍52重量份、泽泻138重量份、黄芪114重量份、骨碎补26重量份、郁金52重量份； 或
[0072] 瓜萎皮137重量份、薤白20重量份、葛根216重量份、川弯22重量份、丹参216重 量份、赤芍22重量份、泽泻216重量份、黄芪60重量份、骨碎补39重量份、郁金22重量份； 或
[0073] 瓜萎皮35重量份、薤白60重量份、葛根60重量份、川弯82重量份、丹参60重量 份、赤芍82重量份、泽泻60重量份、黄芪168重量份、骨碎补13重量份、郁金82重量份；或
[0074] 瓜萎皮117重量份、薤白28重量份、葛根186重量份、川弯32重量份、丹参186重 量份、赤芍32重量份、泽泻186重量份、黄芪80重量份、骨碎补34重量份、郁金32重量份； 或
[0075] 瓜萎皮55重量份、薤白52重量份、葛根90重量份、川弯72重量份、丹参90重量 份、赤芍72重量份、泽泻90重量份、黄芪148重量份、骨碎补18重量份、郁金72重量份；或
[0076] 瓜萎皮97重量份、薤白35重量份、葛根156重量份、川弯42重量份、丹参156重量 份、赤巧42重量份、泽泻156重量份、黄苗100重量份、骨碎补30重量份、郁金42重量份； 或
[0077] 瓜萎皮75重量份、薤白45重量份、葛根120重量份、川弯62重量份、丹参120重量 份、赤芍62重量份、泽泻120重量份、黄芪128重量份、骨碎补22重量份、郁金62重量份。
[0078] 所述供试品是按照上述中国专利文献CN102908583A公开的制备方法制成。
[0079] 本发明具有下述优点：
[0080] 本发明方法具有精密度高、稳定、重现性好、方法简便的特点，能快速、准确地鉴别 产品的真伪优劣。
[0081] 实验例1对照品指纹图谱的建立方法
[0082] 1仪器与试药
[0083] 1. 1 仪器
[0084] Agilentl260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），METTLER TOLEDO百万分 之一微量电子天平。
[0085] 1. 2 试药
[0086] 甲醇；乙腈(天津市康科德科技有限公司色谱纯）；甲酸(色谱纯，TEDIA); Millipore超纯水；丹萎片为吉林康乃尔药业有限公司生产。
[0087] 2方法与结果
[0088] 2. 1色谱条件
[0089] 以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0. 1%甲酸水溶液为B相组成流 动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间与流动相比例为：〇-4min，A相：4-10%、B相：96-90%， 4-2311^11，六相 ：10-14%、8相：90-86%，23-2511^11，六相：14-20%、8相 ：86-80%，25-2811^11，六相： 20-21%、B 相：80-79%，28-33min，A 相：21-22%、B 相：79-78%，33-43min A 相：22-40%、B 相： 78-60%，43-48min，A 相：40-90%、B 相：60-10%，48-53min，A 相：90-100%、B 相：10-0% ;检测 波长为250nm，流速0. 5-1. 5mL/min，柱温20-50°C，进样量10μ 1，理论板数按葛根素峰计， 应不低于85077. 9。
[0090] 2. 2特征指纹图谱的测定
[0091] 对照品的制备：取5-羟甲基糠醛、丹参素、葛根素、大豆苷、丹酚酸Β、丹酚酸Α、 丹参酮II Α对照品适量，精密称重，加甲醇，制得5-羟甲基糠醛浓度为0. 443、丹参素浓度 为2.85118/1^、葛根素浓度为11.625118/1^、大豆苷浓度为3.83118/1^、丹酚酸8浓度为 4. 93 μ g/mL、丹酚酸A浓度为2. 45 μ g/mL、丹参酮II A浓度为0. 1992 μ g/mL的混合对照品 溶液，照中国药典2005版或2010版一部附录高效液相色谱法试验，与供试品溶液相同色谱 条件进行测定，得到各自特征峰的保留时间。
[0092] 实验例2丹萎片的标准指纹图谱的建立方法
[0093] 1仪器与试药
[0094] 1. 1 仪器
[0095] Agilentl260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），METTLER TOLEDO百万分 之一微量电子天平。
[0096] 1. 2 试药
[0097] 甲醇；乙腈(天津市康科德科技有限公司色谱纯）；甲酸(色谱纯，TEDIA); Millipore超纯水；丹萎片为吉林康乃尔药业有限公司生产(按CN102908583A实施例1)。
[0098] 2方法与结果
[0099] 2. 1色谱条件
[0100] 以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0. 1%甲酸水溶液为B相组成流 动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间与流动相比例为：〇-4min，A相：4-10%、B相：96-90%， 4-2311^11，六相 ：10-14%、8相：90-86%，23-2511^11，六相：14-20%、8相 ：86-80%，25-2811^11，六相： 20-21%、B 相：80-79%，28-33min，A 相：21-22%、B 相：79-78%，33-43min A 相：22-40%、B 相： 78-60%，43-48min，A 相：40-90%、B 相：60-10%，48-53min，A 相：90-100%、B 相：10-0% ;检测 波长为250nm和280nm，流速0. 5-1. 5mL/min，柱温20-50°C，进样量10 μ 1，理论板数按葛根 素峰计，应不低于85077. 9。
[0101] 2. 2指纹图谱的测定
[0102] 2. 2. 1丹萎片指纹图谱制备
[0103] 供试品溶液的制备：取丹萎片，研磨，称取粉末0. 2g，加入50%甲醇溶液配成10mg/ ml溶液，超声提取20min，放至室温，用甲醇补足重量，摇勻，离心，取上清液，即得供试品溶 液；
[0104] 将供试品溶液10 μ 1注入高效液相色谱仪，与5号峰(葛根素的特征峰）的相对保 留时间和相对峰面积为1，计算其他峰的相对保留时间和相对峰面积，即得到丹萎片250nm 和280nm下的标准指纹图谱（图1和图2)。
[0105] 2. 2. 2共有峰的确定
[0106] 通过12批丹萎片指纹图谱测定，比较其色谱图，确定共有峰有15个，其中以5号 指纹峰(葛根素的特征峰）为参照物，其峰面积超过总峰面积的10%，列举12批样品共有峰 的相对保留时间以及250nm、280nm波长下的相对峰面积统计结果见表1、表2、表3。
[0107] 表112批丹篓片共有峰的相对保留时间统计结果
[0108]
【权利要求】
1. 一种丹萎片指纹图谱检测方法，其特征在于该方法为： 取丹萎片，研磨，称取粉末〇. 2-0. 5g，加入50-80%甲醇溶液，超声提取20-50min，放至 室温，用甲醇补足重量，摇匀，离心，取上清液，即得供试品溶液； 其中色谱条件为：以十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0. 1%甲酸水溶液 为B相组成流动相；采用梯度洗脱方式，其洗脱时间与流动相比例为：0-4min，A相：4-10%、 B 相：96-90%，4-23min，A 相：10-14%、B 相：90-86%，23-25min，A 相：14-20%、B 相：86-80%， 25-28min，A 相：20-21%、B 相：80-79%，28-33min，A 相：21-22%、B 相：79-78%，33-43minA 相：22-40%、B 相：78-60%，43-48min，A 相：40-90%、B 相：60-10%，48-53min，A 相：90-100%、 B 相：10-0% ;检测波长为 280±2nm，250±2nm 流速 0· 5-1. 5mL/min，柱温 20-50°C，进样量 1-25 μ 1 ； 对照品标准液的制备：取5-羟甲基糠醛、丹参素、葛根素、大豆苷、丹酚酸Β、丹酚酸 Α、丹参酮II Α对照品适量，精密称重，加甲醇或乙醇或乙腈，制得5-羟甲基糠醛浓度为 0.443-14. 175 μ g/mL、丹参素浓度为 3.85-123. 1 μ g/mL、葛根素浓度为 11. 625-372 μ g/ mL、大豆苷浓度为3. 83-122. 5 μ g/mL、丹酚酸B浓度为4. 93-157. 75 μ g/mL、丹酚酸A浓度 为2. 45-78. 46 μ g/mL、丹参酮II A浓度为0. 1992-6. 375 μ g/mL的混合对照品溶液，与供试 品溶液相同色谱条件进行测定，得到各自特征峰的保留时间； 测定法：将供试品溶液注入高效液相色谱仪即得； 所述丹萎片由如下原料份的原料药制成：瓜萎皮30-145份、薤白15-65份、葛根 55-220份、川芎20-85份、丹参55-220份、赤芍20-85份、泽泻55-220份、黄芪50-180份、 骨碎补10-40份和郁金20-85份。
2. 根据权利要求1所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，乙腈、0. 1%甲酸水溶液的体 积比为 55. 2-82. 8 :44· 8-17. 2。
3. 根据权利要求1或2所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，其中色谱条件为：以 十八烷基键合硅胶柱为填充剂，以乙腈为A相，0. 1%甲酸水溶液为B相组成流动相；采用 梯度洗脱方式，其洗脱时间与流动相比例为：〇-4min，A相：4-10%、B相：96-90%，4-23min，A 相：10-14%、B 相：90-86%，23-25min，A 相：14-20%、B 相：86-80%，25-28min，A 相：20-21%、 B 相：80-79%，28-33min，A 相：21-22%、B 相：79-78%，33-43min A 相：22-40%、B 相：78-60%， 43-48min，A 相：40-90%、B 相：60-10%，48-53min，A 相：90-100%、B 相：10-0% ;;检测波长为 280 ± 2nm，250 ± 2nm，流速 0· 5-L 5mL/min，柱温 20-50°C，进样量，10 μ 1，N 葛根素（250nm) =5.54(七1?/奶1/2) 2=85077.9州葛根素（28〇11111)=5.54&1?/奶1/2) 2=76326.9。
4. 根据权利要求1或2所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，指纹图谱共有特征指纹 峰有15个，其峰面积综合占总峰面积的90%以上；5号色谱峰是葛根素的特征峰，葛根素特 征峰的相对保留时间和相对保留面积为1，计算250nm下其他峰的相对保留时间和相对峰 面积，即得到丹萎片的标准指纹图谱共有特征峰为： 1号峰：相对保留时间0. 323-0. 326,相对峰面积0. 001-0. 007 2号峰：相对保留时间0. 399-0. 401，相对峰面积0. 005-0. 009 3号峰：相对保留时间0. 416-0. 419,相对峰面积0. 005-0. 010 4号峰：相对保留时间0. 701-0. 705,相对峰面积0. 127-0. 186 5号峰：相对保留时间1，相对峰面积1 6号峰：相对保留时间1. 089-1. 095,相对峰面积0. 036-0. 044 7号峰：相对保留时间1. 131-1. 142,相对峰面积0. 162-0. 204 8号峰：相对保留时间1. 183-1. 194,相对峰面积0. 110-0. 136 9号峰：相对保留时间1. 423-1. 436,相对峰面积0. 175-0. 236 10号峰：相对保留时间1. 631-1. 657,相对峰面积0. 023-0. 048 11号峰：相对保留时间2. 455-2. 530,相对峰面积0. 008-0. 124 12号峰：相对保留时间2. 500-2. 577,相对峰面积0. 052-0. 112 13号峰：相对保留时间2. 579-2. 664,相对峰面积0. 019-0. 048 14号峰：相对保留时间3. 225-3. 318,相对峰面积0. 014-0. 023 15号峰：相对保留时间3. 372-3. 483,相对峰面积0. 007-0. 018。
5. 根据权利要求4所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，丹萎片指纹图谱中共有特 征峰为： 1号峰：相对保留时间0. 323,相对峰面积0. 001-0. 007 2号峰：相对保留时间0. 399,相对峰面积0. 005-0. 009 3号峰：相对保留时间0. 416,相对峰面积0. 005-0. 010 4号峰：相对保留时间0. 701，相对峰面积0. 127-0. 186 5号峰：相对保留时间1，相对保留面积1 6号峰：相对保留时间1. 089,相对峰面积0. 036-0. 044 7号峰：相对保留时间1. 131，相对峰面积0. 162-0. 204 8号峰：相对保留时间1. 183,相对峰面积0. 110-0. 136 9号峰：相对保留时间1. 423,相对峰面积0. 175-0. 236 10号峰：相对保留时间1. 631，相对峰面积0. 023-0. 048 11号峰：相对保留时间2. 455,相对峰面积0. 008-0. 124 12号峰：相对保留时间2. 500,相对峰面积0. 052-0. 112 13号峰：相对保留时间2. 579,相对峰面积0. 019-0. 048 14号峰：相对保留时间3. 225,相对峰面积0. 014-0. 023 15号峰：相对保留时间3. 372,相对峰面积0. 007-0. 018。
6. 根据权利要求1或2所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，指纹图谱共有特征指纹 峰有15个，其峰面积综合占总峰面积的90%以上；5号色谱峰是葛根素的特征峰，葛根素特 征峰的相对保留时间和相对保留面积为1，计算280nm下其他峰的相对保留时间和相对峰 面积，即得到丹萎片的标准指纹图谱共有特征峰为： 1号峰：相对保留时间0. 323-0. 326,相对峰面积0. 033-0. 208 2号峰：相对保留时间0. 399-0. 401，相对峰面积0. 084-0. 160 3号峰：相对保留时间0. 416-0. 419,相对峰面积0. 060-0. 170 4号峰：相对保留时间0. 701-0. 705,相对峰面积0. 165-0. 259 5号峰：相对保留时间1，相对峰面积1 6号峰：相对保留时间1. 089-1. 095,相对峰面积0. 039-0. 052 7号峰：相对保留时间1. 131-1. 142,相对峰面积0. 230-0. 290 8号峰：相对保留时间1. 183-1. 194,相对峰面积0. 112-0. 130 9号峰：相对保留时间1. 423-1. 436,相对峰面积0. 205-0. 273 10号峰：相对保留时间1. 631-1. 657,相对峰面积0. 037-0. 089 11号峰：相对保留时间2. 455-2. 530,相对峰面积0. 023-0. 343 12号峰：相对保留时间2. 500-2. 577,相对峰面积0. 059-0. 129 13号峰：相对保留时间2. 579-2. 664,相对峰面积0. 065-0. 253 14号峰：相对保留时间3. 225-3. 318,相对峰面积0. 025-0. 047 15号峰：相对保留时间3. 372-3. 483,相对峰面积0. 017-0. 043。
7. 根据权利要求1或2或5任一所述的指纹图谱检测方法，其特征在于，所述指纹图谱 采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》进行评价，各检测波长下的相似度均大 于 0. 90。
8. 根据权利要求1或2或5任一所述的指纹图谱检测方法，所述供试品溶液制备方 法中50-80%甲醇溶液由0· 5-5mol/L的磷酸甲醇溶液或0· 5-5mol/L的盐酸乙腈溶液或 0. 5-5mol/L的磷酸乙腈溶液中的任意一种替换；超声提取20-50min由加热回流5-60分钟 或回流提取1-12小时或微波萃取0. 1-4小时的任意一种替换。
9. 根据权利要求3所述的指纹图谱检测方法，所述供试品溶液制备方法中50-80%甲 醇溶液由〇· 5-5mol/L的磷酸甲醇溶液或0· 5-5mol/L的盐酸乙腈溶液或0· 5-5mol/L的磷 酸乙腈溶液中的任意一种替换；超声提取20-50min由加热回流5-60分钟或回流提取1-12 小时或微波萃取〇. 1-4小时的任意一种替换。
10. 根据权利要求4所述的指纹图谱检测方法，所述供试品溶液制备方法中50-80%甲 醇溶液由〇· 5-5mol/L的磷酸甲醇溶液或0· 5-5mol/L的盐酸乙腈溶液或0· 5-5mol/L的磷 酸乙腈溶液中的任意一种替换；超声提取20-50min由加热回流5-60分钟或回流提取1-12 小时或微波萃取〇. 1-4小时的任意一种替换。
【文档编号】G01N30/06GK104215702SQ201310218829
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年6月4日 优先权日:2013年6月4日
【发明者】吴思丹, 庞玉华, 张鹏 申请人:吉林康乃尔药业有限公司