人工癸烯酸的快速检测方法
【专利摘要】本发明属于食品检测【技术领域】，特别涉及一种检测纯正天然的蜂王浆和冻干粉中是否掺入人工癸烯酸的快速准确检测方法。本发明的目的在于针对目前市场上存在一些往蜂王浆和冻干粉中掺入人工癸烯酸从而牟取高额利润的伎俩，开发出一种可以快速、准确地对蜂王浆和冻干粉中的人工癸烯酸定性、定量的方法。为了实现上述目的，本发明公开了一种检测蜂王浆和冻干粉中的人工癸烯酸的快速检测方法，主要包括方法的前处理，液相色谱分离和质谱检测三大步骤。该方法以质荷比为225m/z(母离子)、163m/z(子离子)和181m/z(子离子）的特征检测峰的HPLC-MS/MS检测方法。
【专利说明】人工癸烯酸的快速检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于食品检测【技术领域】，特别涉及涉及一种纯正天然的蜂王浆和冻干粉中 是否掺入人工癸烯酸的快速检测方法。
【背景技术】
[0002] 癸烯酸，S卩10-羟基-α -癸烯酸，又称王浆酸，简称10-HDA，是蜂王浆中所含的一 种特有的高效生物活性物质，因此是蜂王浆的一种标志物。纯正天然的蜂王浆中一般含有 1.4%?2.0%的癸烯酸。国家标准规定蜂王浆中10-HDA含量达到1.4%为合格品，达到 1.8%时为优等品；冻干粉中10-!^含量达到5.0%为一等品，达到4.0%为二等品。10-!^ 的含量的高低，直接影响了产品的价格。因此一些不法商贩将人工合成的癸烯酸添加到蜂 王浆及其制品如冻干粉中，以次充好，以假充真，牟取利益，这种掺假不但会极大的损害了 消费者的身体健康，而且也会扰乱了蜂王浆市场的正常秩序，如不尽快提出先进的检测方 法，一旦爆发，又将是一次对蜂王浆行业乃至全国的食品安全问题产生极大的影响。
[0003] 江苏中谱检测有限公司研究开发了蜂王浆及其制品中人工10-HDA的检测方法。 该方法通过对比人工癸烯酸标准品和和蜂王浆的LC-MS/MS图谱的差别，发现了人工癸烯 酸中的特征离子峰，通过检测该特征离子能有效的鉴别蜂王浆中是否添加人工合成的癸烯 酸。该方法对于蜂王浆和冻干粉中人工10-HDA的含量< 0. 1 %为阴性，彡0. 1 %为阳性；对 于浆渣中人工10-HDA的含量< 1%为阴性，彡1%为阳性。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的在于针对目前市场上存在往蜂王浆和冻干粉中掺入人工癸烯酸从 而牟取高额利润的伎俩，开发出一种可以快速、准确地对蜂王浆和冻干粉中的人工癸烯酸 定性、定量的检测方法。
[0005] 为了实现上述发明目的，本发明公开了 一种对蜂王浆和冻干粉中的人工癸烯酸定 性、定量的快速检测方法，其特征主要包括以下步骤：
[0006] 第一步：方法的前处理；
[0007] 第二步：液相色谱分离；
[0008] 第三步：质谱检测。
[0009] 该方法是以质荷比为225m/z的离子峰为人工癸烯酸的特征检测峰，通过差异化 分析方法比较纯天然的蜂王浆及其产品以及掺入了人工癸烯酸的冻干粉及其产品，从而找 出人工癸烯酸的特征标识物，并在试验过程中对最终予以确认的特征标识物进行稳定性试 验，确定了在HPLC-MS/MS中质荷比为225m/z的离子峰为人工癸烯酸的特征检测峰。
[0010] 针对本发明步骤一，本发明公开了已经优化好的前处理方法：称取样品〇. l〇〇g于 25mL容量瓶，无水乙醇溶解、定容，超声提取30min，过微孔滤膜待进样。
[0011] 针对本发明步骤二，还公开了人工癸烯酸的液相分离条件为：色谱柱选用 S印axBR-C18 (2. 1 X 100mm，5 μ m);柱温为35°C ;流动相为A.甲醇-B. 0· 1 %甲酸水溶液，流 速为0. 25ml/min ;采用梯度洗脱的方式，以体积百分比计，0?lmin，A :30%、B :70% ;1? 3. 5min，A :30%?95%，B :70%?5% ;3· 5 ?5. 5min，A :95%，B :5% ;5· 51 ?7. Omin，A : 95%?70%，B :5%?30%。所述的液相分离采用在线阀切换技术。
[0012] 最后，针对本发明针对本发明步骤三，公开了所述的质谱检测方法：采用电喷雾离 子源（ESI);毛细管电压：3. 5KV ;干燥气温度：350°C ;干燥气流量（氮气）：5L/min ;鞘气温 度：400°C;雾化器压力：50psig的条件下，进行正离子SRM扫描。人工癸烯酸检测的母离子 为225m/z，子离子包括163m/z和181m/z。
【专利附图】
【附图说明】
[0013] 图1 :冻干粉中人工10-HDA阴性样品色谱图
[0014] 图2 :冻干粉中人工10-HDA阳性样品色谱图
【具体实施方式】
[0015] 1.前处理：称取样品0. 100g于25mL容量瓶，无水乙醇溶解、定容，超声提取 30min，过微孔滤膜待进样。同时配置人工10-HDA的标准品溶液。（规定0. 100g人工10-HDA 标准品定容于25mL容量瓶，人工癸烯酸的浓度为100% )
[0016] 2.人工10-HDA的标准品溶液的配制：精确称量0. 100g人工10-HDA标准品，用 无水乙醇定容于25mL容量瓶中，然后取该标准溶液用无水乙醇分别稀释成0. 05%，0. 1 %、 0. 2%、0. 5%、1. 0%、2. 0%和5. 0%六个标准点制定标准曲线。
[0017] 3.外标法定量，标准曲线方程为 Y = -3· 223E3+7. 759E5*X，R2 = 0· 999。
[0018] 4.检测方法的重复性实验：对天然蜂王浆及其产品添加三个浓度点（包括 0. 05%、0. 5%、5. 0%)的人工癸烯酸，平行测点三次，总体平均回收率均在80?110%范围 内。
[0019] 5.对一批样品，包括蜂王浆、冻干粉和浆渣中的人工10-HDA进行检测，结果如下：
[0020]
【权利要求】
1. 一种蜂王浆和冻干粉中的人工癸烯酸定性、定量的检测方法，包括方法的前处理、 液相色谱分离和质谱检测三个步骤，其特征在于该方法是以质荷比为225m/z (母离子）、 163m/z (子离子）和181m/z (子离子）的特征检测峰的HPLC-MS/MS检测方法。
2. 如权利要求1所述的检测方法，其特征是所述的液相分离条件为：色谱柱优选Sepax BR-C18 (2. 1 X 100mm，5 μ m);流动相为 Α·甲醇-Β· 0· 1 % 甲酸水溶液，流速为 0· 25ml/min。
3. 如权利要求1所述的检测方法，其特征是所述的质谱检测方法为：采用电喷雾离子 源（ESI);毛细管电压：3. 5KV ;干燥气温度：350°C;干燥气流量（氮气）：5L/min ;鞘气温度： 400°C ;雾化器压力：50psig的条件下，进行正离子SRM扫描。
【文档编号】G01N30/06GK104215722SQ201310219465
【公开日】2014年12月17日 申请日期:2013年6月5日 优先权日:2013年6月5日
【发明者】徐锦忠, 王燕, 杨波, 王英俊, 刘秀红, 王祝超 申请人:江苏中谱检测有限公司