一种基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法
【专利摘要】一种基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法。其特征是先合成的荧光银纳米簇原液稀释400倍，取990μL作为探针溶液。分别向探针溶液中加入10μL含不同浓度半胱胺的血清样品，反应5分钟。半胱胺浓度范围是5-120μM。用荧光检测仪测定混合反应后的银纳米簇溶液与空白对照组的荧光强度比，做出荧光强度比与半胱胺浓度的线性关系图。再向探针溶液中加入10μL含未知浓度半胱胺的血清溶液，反应5分钟后，测得反应后的银纳米簇溶液与空白对照组的荧光强度比。根据步骤2）中的关系图计算得出血清样品中半胱胺的浓度。本发明对半胱胺分子有着很好的专一识别能力，操作简单，反应迅速，样品需求量少，并且检测灵敏度较高。
【专利说明】一种基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法
【【技术领域】】
[0001]本发明涉及一种基于荧光银纳米簇检测血清中半胱胺的分析方法。
【技术背景】
[0002]半胱胺(Cysteamine，CS) HSCH2CH2NH2,又称P —巯基乙胺，易溶于水及醇，相当于半胱氨酸的脱羧产物，是乙酰辅酶A的组成部分，是一种天然存在于动物、植物和人体的生物活性物质。半胱胺分子的巯基和氨基富有活性，在生物体内承担着重要的生理学功能。
[0003]半胱胺可以降低生长抑制素含量，提高生长激素水平，促进动物生长。半胱胺可被用于饲料添加以及临床应用。因此发展一种简单、快速、精确、特异、灵敏的测定血清半胱胺的浓度的方法是必要的。
[0004]当前测定血清中半胱胺的方法主要以高效液相色谱法和电化学方法为主。高效液相色谱法灵敏，准确度高，但是设备昂贵。电化学方法相对而言灵敏度低，且需制备电极，操作较为复杂。因此发展一种操作简便，灵敏度高，且不依赖昂贵设备的新方法是非常有意义的。
【
【发明内容】
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[0005]本发明的目的:在于提供一种新型的基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法，以克服现有的检测半胱胺的方法中灵敏度不够高，检测所需时间过长，或需要复杂的步骤及昂贵的大型仪器，难以实现快速、精确、特异、高灵敏的测定的缺陷。
[0006]本发明的思路:硫辛酸修饰的银纳米簇，具有荧光性，最大激发波长和最大发射波长分别为430nm和640nm。该荧光可被半胱胺分子猝灭，因此通过其荧光在猝灭前后的变化可以确定半胱胺的浓度。
[0007]本发明的具体技术方案是:一种新型的基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法，首先合成硫辛酸修饰的银纳米簇。合成的银纳米簇采用Chem.Mater.2010，22，4364 - 4371所述的合成方法，略有修改。所合成的银纳米簇大小为l_3nm，最大激发波长为430nm，最大发射波长为640nm，荧光量子效率为1.7%。合成具体操作方法为:51.5mg硫辛酸粉末溶解于有19mL超纯水中的小烧瓶中，4.8mg硼氢化钠固体加入烧瓶中，硫辛酸与NaBH4的摩尔比为2:1，搅拌反应15min。加入lmL25mM的硝酸银溶液，继续搅拌5min,加入过量的硼氢化钠95mg,,继续搅拌反应120min。反应中硼氢化钠、硫辛酸、硝酸银的摩尔比为为100:10:1。合成的荧光银纳米簇溶液避光4°C保存。其检测方法依次包括以下步骤:
[0008]1)合成的荧光银纳米簇原液稀释400倍，取990 U L作为探针溶液。分别向探针溶液中加入10 U L含不同浓度半胱胺的血清样品，反应5分钟。半胱胺浓度范围是5-120 u M0用荧光检测仪测定混合反应后的银纳米簇溶液与空白对照组的荧光强度比，做出荧光强度比与半胱胺浓度的线性关系图。
[0009]2)合成的荧光银纳米簇原液稀释400倍，取990 ii L作为探针溶液。加入1OyL含未知浓度半胱胺的血清溶液，反应5分钟后，测得反应后的银纳米簇溶液与空白对照组的荧光强度比。根据步骤2)中的关系图计算得出血清样品中半胱胺的浓度。
[0010]本发明对半胱胺分子有着很好的专一识别能力，操作简单，反应迅速，样品需求量少，并且检测灵敏度较高。
【【专利附图】
【附图说明】】
[0011]图1:荧光银纳米簇溶液的激发以及发射图。
[0012]图2:稀释10倍的荧光银纳米簇溶液加入ImM半胱胺水溶液后荧光强度的变化。
[0013]图3:银纳米簇溶液分别500 PM待测物的半胱胺，半胱氨酸，谷胱甘肽，纵坐标为加入待测物之后的荧光F和加入之前的荧光Ftl的比值。
[0014]图4:加入不同浓度半胱胺血清样品后银纳米簇溶液的荧光强度变化。
[0015]图5:加入不同浓度半胱胺之后的荧光和加入之前的荧光的比值F/匕与半胱胺浓度的线性关系曲线。
【【具体实施方式】】
[0016]以下实例将结合附图对本发明做进一步阐述，以便为更好的理解本发明提供依据。
[0017]实施例1专一性试验
[0018]分别配置500 PM的半胱胺、半胱氨酸、谷胱甘肽水溶液，各取0.5mL分别加入到
0.5mL稀释10倍的荧光银纳米簇溶液，混匀反应5min。如图3可见只有加入半胱胺溶液，银纳米簇溶液的荧光才会消失。半胱氨酸和谷胱甘肽几乎对银纳米簇的荧光没有影响。这说明半胱氨酸，谷胱甘肽这些生物体中常见的半胱胺类似物不会对测定造成干扰，因此本方法的专一性比较好。
[0019]实施例2检测范围及线性关系的测定
[0020]分别配制0、5、10、20、40、60、80、100、120iiM的半胱胺牛血清溶液，分别取IOuL加入到990 u L稀释400倍的银纳米簇溶液中，混匀反应5min,荧光检测仪测其反应后的荧光强度F，加入不含半胱胺的牛血清反应后的荧光强度为匕。具体荧光检测设置的参数为激发430nm，扫描速度1200nm/min，激发宽度10nm，发射宽度20nm。做出F/匕与半胱胺浓度的关系图，如图5所示。可知半胱胺浓度为5 — 120UM时，线性关系较好，线性回归方程为 F/F0=-0.0067c+l.0064，c 为半胱胺浓度，R2 为 0.9986。
[0021]本方法可用于检测实际血清样品中半胱胺的浓度，回收率如表1所示。
[0022]表1`
[0023]
【权利要求】
1.一种基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法，其特征在于合成的硫辛酸修饰的银纳米簇的荧光可被半胱胺分子猝灭，因此通比较过猝灭前后的荧光变化来测定半胱胺的浓度；测定半胱胺浓度通过以下步骤来实现: 步骤1:向荧光银纳米簇溶液中加入含有已知浓度半胱胺的血清溶液，用荧光检测仪测定混合反应后的溶液与空白对照组的荧光强度比，做出荧光强度比与半胱胺浓度的关系图； 步骤2:向荧光银纳米簇溶液加入半胱胺浓度待测的血清溶液，测得其与空白对照组的荧光强度比，根据步骤I中的关系图计算得出待测的血清溶液中半胱胺溶液的浓度。
2.如权利要求1中所述基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法，其特征在于在半胱胺浓度测定中，荧光银纳米簇溶液为原液稀释400倍，体积为990 u L0
3.如权利要求1中所述基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法，其特征在于，在半胱胺浓度测定中，待测的血清溶液中半胱胺浓度的适用范围为5—120 ii M，体积为10 u L0
4.如权利要求1中所述基于荧光银纳米簇的检测血清中半胱胺的方法，其特征在于在半胱胺浓度测定中，待测的血清溶液与荧光银纳米簇溶液反应时间为5分钟，反应温度为室温。
【文档编号】G01N21/64GK103630521SQ201310652621
【公开日】2014年3月12日 申请日期:2013年12月5日 优先权日:2013年12月5日
【发明者】苏磊, 薛峰, 舒桐, 张学记 申请人:北京科技大学