猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法。该试纸包括样品吸收区、金标探针区、固相化抗原和抗体区、吸水区和支撑板，样品吸收区、金标探针区、固相化抗原抗体区和吸水区铺设在支撑板上并依次相互部分重叠；金标探针区包被金标探针，为胶体金标记的小鼠抗猪IgG抗体；固相化抗原和抗体区依次有检测线T1包被猪伪狂犬病毒gE蛋白、检测线T2包被猪伪狂犬病毒gB蛋白、检测线T3包被猪伪狂犬病毒gD蛋白和对照线C包被羊抗小鼠IgG抗体。本发明的试纸检测快速，准确率高，特异性强，携带、操作简便，可同时用于PRV野毒感染及疫苗免疫的鉴别诊断和PRV疫苗免疫效果的评估。
【专利说明】猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明涉及一种检测试纸及制备方法，具体涉及一种猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸及制备方法。
【背景技术】
[0003]伪狂犬病(Pseudorabies)是由伪狂犬病毒(Pseudorabies virus, PRV)引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是伪狂犬病最主要的贮存宿主和传染源。健康猪与病猪、带毒猪直接接触可感染本病。成年猪常为隐性感染；受感染的怀孕母猪则出现流产、死胎、弱胎和木乃伊胎等病征；受感染的新生仔猪出现发热及神经症状，甚至衰竭死亡,死亡率可达100%。
[0004]自1902年首次在美国发现伪狂犬病以来，该病己在全球范围内流行。我国自1947年首次发现伪狂犬病以来，至2006年已有31个省(区)、市有关于伪狂犬病的报道。伪狂犬病对我国乃至全球养猪业的健康发展造成了巨大的经济损失，成为严重危害养猪业健康发展的重大传染病之一。
[0005]在PRV与宿主的相 互作用中，病毒的gB和gD囊膜糖蛋白起着重要作用。病毒囊膜糖蛋白gB和gD不仅介导病毒对靶细胞的感染，也是被感染的宿主免疫系统识别的主要抗原。在疱疹病毒中gB蛋白属于最保守的糖蛋白之一，该糖蛋白能诱导机体产生高滴度的中和抗体，且是病毒感染过程中的必须成分。PRV gD为病毒感染必需的结构蛋白，该蛋白参与病毒的穿透过程，是一种重要的中和抗原，也是保护性抗体的主要目标。研究表明，gD基因是预防猪伪狂犬病重组腺病毒疫苗和核酸疫苗的重要靶序列，可以作为血清学诊断抗原。gE糖蛋白是PRV的一种十分重要的糖蛋白，在决定病毒的毒力及神经嗜性等方面起着重要作用，但gE不是PRV增殖所必需的蛋白，常作为缺失的候选基因。
[0006]目前，常用的检测PRV的方法包括乳胶凝集(LAT)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、聚合酶链反应(PCR)等。胶体金免疫层析法作为一种日渐成熟的实验检测方法，以其特异性强、成本低，操作简便，结果可靠、可单份或成批测定、不需任何仪器等优点已被广泛接受。目前已有报道的PRV检测试纸多只能检测针对单一蛋白抗原(gE)的抗体，测试者往往需要借助二次检测才能进一步确定在没有野毒感染的情况下，是否存在PRV抗体。
[0007]
【发明内容】
[0008]本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸。该试纸采用胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗做探针，包被猪伪狂犬病毒gE、gB和gD蛋白抗原和羊抗小鼠IgG抗体进行抗猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的检测。
[0009]本发明的另一目的在于提供上述猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法。
[0010]本发明的再一目的在于提供上述猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的使用方法。
[0011]本发明的目的通过下述技术方案实现:
一种猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸，包括样品吸收区、金标探针区、固相化抗原和抗体区、吸水区和支撑板，样品吸收区、金标探针区、固相化抗原抗体区和吸水区铺设在支撑板上并依次相互部分重叠；所述的金标探针区包被金标探针，为胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗,标记量优选为每mL胶体金标记5~20Pg小鼠抗猪IgG单抗，金标探针包被量优选为5~IOPL ;所述的固相化抗原和抗体区(自金标探针区至吸水区方向)依次有检测线Τ1、Τ2、Τ3和对照线C ;所述的检测线Tl包被有猪伪狂犬病毒gE蛋白，包被量优选为0.5~5Pg ;检测线T2包被有猪伪狂犬病毒gB蛋白，包被量优选为0.5~5μg ;检测线T3包被有猪伪狂犬病毒gD蛋白，包被量优选为0.5~5Pg ;对照线C包被有羊抗小鼠IgG抗体,包被量优选为为I~10Pg。
[0012]所述的支撑板的材料优选为粘有一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板；所述的样品吸收区的材料优选为玻璃纤维膜；所述的金标探针区的材料优选为聚酯膜；所述的固相化抗原和抗体区的材料优选为硝酸纤维素膜；所述的吸水区的材料优选为吸水滤纸。
[0013]所述的猪伪狂犬病毒gE、gB和gD蛋白抗原可按照常规的基因工程方法进行制备或表达，这些都是本领域技术人员所能掌握或通晓的。
[0014]上述猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，包括如下步骤:将胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗喷涂于聚酯膜上；在硝酸纤维素膜上依次包被检测线Tl (包被猪伪狂犬病毒gE蛋白)、T2 (包被猪伪狂犬病毒gB蛋白)、Τ3 (包被猪伪狂犬病毒gD蛋白)和对照线C (包被羊抗小鼠IgG抗体);将玻璃纤维膜、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装到支撑板上得到猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸。
[0015]更优选的，所述的猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法包括如下步骤:
(I)胶体金标记小鼠抗猪IgG单抗的方法:分别取半径为10~40nm浓度为0.01%的胶体金20mL及小鼠抗猪IgG单抗100~40(^g，在pH值8.5~9.2的条件下通过磁力搅拌振荡使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)和聚乙二醇20000 (PEG20000)作为稳定剂，且使得BSA最终质量浓度为0.1~5%，PEG20000最终质量浓度为0.01~0.1%，采用离心法除去未结合的小鼠抗猪IgG单抗和未稳定的胶体金颗粒及其凝集物，在离心管底部的深红色沉淀为胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物。
[0016](2)将胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗喷涂于聚酯膜上:用20mL含1%BSA的PBS(0.01M, pH值7.4)分别洗涤胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物，离心除去上清液，得到深红色沉淀，纯化后的沉淀用2mL含1%BSA的PBS溶解，用喷涂设备涂于聚酯膜上，冻干。
[0017](3)硝酸纤维素膜的包被:在硝酸纤维素膜依次包被检测线T1、T2、T3和对照线C ；检测线Tl包被猪伪狂犬病毒gE蛋白的量为0.5~5Pg ;检测线T2包被猪伪狂犬病毒gB蛋白的量为0.5?5Pg ;检测线T3包被猪伪狂犬病毒gD蛋白的量为0.5?5Pg ;对照线C包被羊抗小鼠IgG抗体的量为I?IOPg ;每条线宽I?3mm。
[0018](4)试纸组装:用粘上一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板作为支撑载体，上面依次铺设玻璃纤维膜、金标探针的聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，外面用胶带包封制成。
[0019]除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量(mL/g)百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积(g/mL)百分比；其余为重量/重量百分比。
[0020]上述猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的使用方法，包括如下步骤:将该试纸的样品吸收区一端浸入待检血清样品中，5?10分钟后判读结果:对照线C出现红色，表示试纸有效；检测线T1、T2、T3出现红色，分别表明伪狂犬病毒gE、gB、gD抗体阳性；检测线Tl、T2、T3无颜色出现，表明血清中没有对应的伪狂犬病毒gE、gB、gD抗体或抗体量很低。
[0021]本发明相对于现有技术具有如下优点和效果:
(I)检测快速:检测时间只需5?10分钟，能够满足现场检测的需要。
[0022](2)检测准确率高、特异性强:本试纸与其他猪易感病原体抗体没有交叉反应，检测灵敏度与ELISA基本相同。
[0023](3)携带方便，操作简便:本发明不需要借助其它仪器设备，适合各级兽医院、猪场及个人使用。
[0024](4)检测试纸在常温下即可保存，无需特殊的设备和仪器。保存期可达2年，且检测重复性好。
[0025](5)能一步同时检测猪伪狂犬病毒gE、gB和gD三种抗体，在鉴别野毒感染的同时能评价疫苗免疫效果，为实验筛猪、疫病流行学调查、疫苗效果评价和猪场净化提供了新的高效的工具。
【专利附图】
【附图说明】
[0026]图1是猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的平面结构区域图；其中，1-样品吸收区，2-金标探针区，3-固相化抗原和抗体区，31-检测线Tl，32-检测线T2，33-检测线T3，34-对照线C，4-吸水区。
[0027]图2是猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸纵切面结构图(用具体材料代表各个区域)，其中，5-粘有一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板(支撑板)，6_玻璃纤维膜(样品吸收区)，7_聚酯膜(金标探针区)，8_硝酸纤维素膜(固相化抗原和抗体区)，9-吸水滤纸(吸水区)。
【具体实施方式】
[0028]下面结合实施例和附图对本发明进行具体的说明，本发明的实施例仅用于说明本发明的技术方案，并非限定本发明的实质。
[0029]实施例1
猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸平面结构区域图如图1所示，试纸水平面自下而上依次为:样品吸收区1、金标探针区2、固相化抗原和抗体区3和吸水区4，固相化抗原和抗体区3包被有检测线Tl 31、检测线T2 32、检测线T3 33和对照线C 34。
[0030]猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸纵切面结构图(用具体材料代表各个区域)如图2所示，粘有一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板5为支撑板，玻璃纤维膜6为样品吸收区，聚酯膜7为金标探针区，硝酸纤维素膜8为固相化抗原和抗体区，吸水滤纸9为吸水区，聚酯膜7上包被有金标探针；玻璃纤维膜6、聚酯膜7、硝酸纤维素膜8、吸水滤纸9铺设在聚乙烯板5上并依次相互部分重叠。
[0031]金标探针为胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗,标记量为每mL胶体金标记5Pg单抗，金标探针包被量为ΙΟμ?。检测线Tl 31包被猪伪狂犬病毒gE蛋白的量为0.5Pg ;检测线T2 32包被猪伪狂犬病毒gB蛋白的量为0.5Pg;检测线T3 33包被猪伪狂犬病毒gD蛋白的量为0.5Pg ;对照线C 34包被羊抗小鼠IgG抗体的量为Mg。
[0032]上述猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸制备方法如下:
(I)所述伪狂犬病毒gE蛋白、gB蛋白和gD蛋白制备方法包括下述步骤:
1)提取猪伪狂犬病毒(PRV)基因组，参照GenGank发表的PRV中国株基因序列，分别针对gE、gB和gD基因设计引物，其中，
gE 上游引物:5’ -ATGGATTCATGCTGAGGGAGGCACCCCCG-3’， gE 下游引物:5’ -CGAAGCTTTAATAACGGCCGGTCGCCCAC-3’ ； gB 上游引物:5’ -GGATCCGCGCACGTGAACGACATG-3’， gB 下游引物:5’ -AAGCCTGAGCGCGTGCAGCTGGTT-3’ ； gD 上游引物:5’ -GGATCCATGCTGCTCGCAGCGCTAT-3’ ； gD 下游引物:5’ -AAGCTTGTCAGGAATCGCATCACGT-3’ ；
2)将步骤I)所述的基因设计引物分别扩增gE基因片段、gB基因片段和gD基因片段，再将扩增的gE基因片段、gB基因片段和gD基因片段分别克隆到pGEM-T-Vector上，再将克隆后的基因片段分别插入到pET-32a原核表达载体中，构建pET-32a-gE、pET_32a-gD和pET-32a-gB的重组表达载体；
3)将构建的pET-32a-gE、pET-32a-gD和pET_32a-gB的重组表达载体分别转化至大肠杆菌BL21 (DE3)中，进行诱导表达；
4)将步骤3)制得的表达产物经His*Bind亲和层析法纯化后，获得重组蛋白gE、gB和gD。
[0033](2)胶体金标记小鼠抗猪IgG单抗的方法:分别取半径为40nm浓度为0.01%的胶体金20mL及小鼠抗猪IgG单抗IOOPg,在pH8.5的条件下通过磁力搅拌振荡使其结合,加牛血清白蛋白(BSA)和聚乙二醇20000 (PEG20000)作为稳定剂，且使得BSA最终质量浓度为
0.1%，PEG20000最终质量浓度为0.01%，采用离心法除去未结合的小鼠抗猪IgG单抗和未稳定的胶体金颗粒及其凝集物，在离心管底部的深红色沉淀为胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物。
[0034](3)将胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗喷涂于聚酯膜上:用20mL含1%BSA的PBS(0.01M, pH值7.4)分别洗涤胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物，离心除去上清液，得到深红色沉淀，纯化后的沉淀用2mL含1%BSA的PBS溶解，用喷涂设备涂于聚酯膜上，冻干。[0035](4)硝酸纤维素膜的包被:在硝酸纤维素膜依次包被检测线T1、T2、T3和对照线C ；检测线Tl包被猪伪狂犬病毒gE蛋白的量为0.5μg ;检测线T2包被猪伪狂犬病毒gB蛋白的量为0.5μg ;检测线T3包被猪伪狂犬病毒gD蛋白的量为0.5μg ;对照线C包被羊抗小鼠IgG抗体的量为lKg。每条线宽I~3mm。
[0036](5)试纸组装:用粘上一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板作为支撑载体，上面依次铺设玻璃纤维膜、金标探针的聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，外面用胶带包封后切成2~4mm宽的试纸制成。
[0037]实施例2:
除检测线Tl包被量为5Pg ;检测线T2包被量为5Pg，检测线T3包被量为5Pg，对照线C包被量为IOgg,金标探针胶体金标记小鼠抗猪IgG单抗标记量为每mL胶体金标记20Pg单抗，金标探针包被量为5PL ;胶体金标记猪圆环病毒2型单克隆抗体的方法:分别取半径为IOnm浓度为0.01%的胶体金20mL及小鼠抗猪IgG单抗40(^g，在pH9.0的条件下通过磁力搅拌振荡使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)和聚乙二醇20000 (PEG20000)作为稳定剂，且使得BSA最终质量浓度为2%，PEG20000最终质量浓度为0.05%，采用离心法除去未结合的小鼠抗猪IgG单抗和未稳定的胶体金颗粒及其凝集物，在离心管底部的深红色沉淀为胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物，其余与实施例1相同。
[0038]实施例3
除检测线Tl包被量为2Pg ;检测线T2包被量为2Pg，检测线T3包被量为2Pg，对照线C包被量为5Pg,金标探针胶体金标记小鼠抗猪IgG单抗标记量为每mL胶体金标记IOPg单抗，金标探针包被量为8PL ;胶体金标记猪圆环病毒2型单克隆抗体的方法:分别取半径为20nm浓度为0.01%的胶体金20mL及小鼠抗猪IgG单抗20(^g，在pH9.0的条件下通过磁力搅拌振荡使其结合，加牛血清白蛋白(BSA)和聚乙二醇20000 (PEG20000)作为稳定剂，且使得BSA最终质量浓度为2%，PEG20000最终质量浓度为0.05%，采用离心法除去未结合的小鼠抗猪IgG单抗和未稳定的胶体金颗粒及其凝集物，在离心管底部的深红色沉淀为胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物，其余与实施例1相同。
[0039]实施例4
猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸的使用方法:
检测时，抽取被测者少量血清样品，用PBS (0.01M, pH 7.4)稀释一倍，将该试纸的样品吸收区一端浸入稀释的样品中，5~10分钟后判读结果:对照线C出现红色，表示试纸有效；检测线T1、T2、T3出现红色，分别表明猪伪狂犬病毒gE、gB、gD抗体阳性。检测线TI或T2或T3无颜色出现，表明血清中猪伪狂犬病毒gE或gB或gD抗体阴性。
[0040]实施例5
本发明试纸的敏感性和特异性试验。
[0041]敏感性试验:按照实施例4所述的检测方法，利用实施例1、2、3制得的试纸检测PRV全病毒阳性血清(阳性血清I)和PRVgE缺失阳性血清(阳性血清2)，并与间接ELISA法进行比较。将PRV阳性血清I和2进行1:100稀释后，再进行2倍倍比稀释，应用实施例1、
2、3制备的试纸进行检测，最低检测量均分别为1:3200和1:6400，应用间接ELISA法检测(具体为:包被gE蛋白抗原，检测阳性血清I ;包被gB蛋白抗原，检测阳性血清2，二抗均为抗猪IgG酶标二抗)PRV阳性血清I和2的最低检测量均分别为1:3200和1:6400。[0042]特异性检测:按照实施例4所述的检测方法，利用实施例1、2、3制得的试纸检测猪伪狂犬病gE缺失疫苗免疫血清、猪PRV攻毒血清、纯化的猪PRV-gE抗体、纯化的猪PRV-gB抗体、纯化的猪PRV-gD抗体、猪PCV2阳性血清、猪蓝耳病毒抗体阳性血清、猪瘟病毒抗体阳性血清、猪细小病毒阳性血清、猪乙脑病毒阳性血清和猪PRV阴性血清。结果见表1。
[0043]表1.本发明试纸的特异性检测结果
【权利要求】
1.一种猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸，其特征在于:包括样品吸收区、金标探针区、固相化抗原和抗体区、吸水区和支撑板，样品吸收区、金标探针区、固相化抗原抗体区和吸水区铺设在支撑板上并依次相互部分重叠；所述的金标探针区包被金标探针，为胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗；所述的固相化抗原和抗体区有包被猪伪狂犬病毒gE蛋白的检测线Tl、包被猪伪狂犬病毒gB蛋白的检测线T2、包被猪伪狂犬病毒gD蛋白的检测线T3和包被羊抗小鼠IgG抗体的对照线C。
2.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸，其特征在于:所述的支撑板的材料为粘有一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板；所述的样品吸收区的材料为玻璃纤维膜；所述的金标探针区的材料为聚酯膜；所述的固相化抗原和抗体区的材料为硝酸纤维素膜；所述的吸水区的材料为吸水滤纸。
3.根据权利要求1所述的猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸，其特征在于:所述的金标探针的标记量为每mL胶体金标记5~20Pg小鼠抗猪IgG单抗，金标探针的包被量为5~IOPL ;所述的检测线Tl包被猪伪狂犬病毒gE蛋白的量为0.5~5Pg，检测线T2包被猪伪狂犬病毒gB蛋白的量为0.5~5Pg，检测线T3包被猪伪狂犬病毒gD蛋白的量为0.5~5Pg，对照线C包被羊抗小鼠IgG抗体的量为I~l(^g。
4.权利要求1-3任一项所述的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于包括如下步骤:将胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗喷涂于聚酯膜上；在硝酸纤维素膜上包被检测线T1、T2、T3和对照线C ;将玻璃纤维膜、聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸组装到支撑板上得到猪伪狂犬病毒gE、gB和gD抗体的胶体金免疫层析检测试纸。
5.根据权利要求4所述的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于包括如下步骤: (O胶体金标记小鼠抗猪IgG单抗:分别取半径为10~40nm浓度为0.01%的胶体金20mL及小鼠抗猪IgG单抗100~40(^g，在pH值8.5~9.2的条件下通过磁力搅拌振荡使其结合，加牛血清白蛋白和聚乙二醇20000作为稳定剂，且使得BSA最终质量浓度为0.1~5%,PEG20000最终质量浓度为0.01~0.1%，采用离心法除去未结合的小鼠抗猪IgG单抗和未稳定的胶体金颗粒及其凝集物，在离心管底部的深红色沉淀为胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物； (2)将胶体金标记的小鼠抗猪IgG单抗喷涂于聚酯膜上:用20mL含1%BSA的PBS分别洗涤胶体金一小鼠抗猪IgG单抗复合物，离心除去上清液，得到深红色沉淀，纯化后的沉淀用2mL含1%BSA的PBS溶解，用喷涂设备涂于聚酯膜上，冻干； (3)硝酸纤维素膜的包被:在硝酸纤维素膜包被检测线Tl、T2、T3和对照线C;检测线Tl包被猪伪狂犬病毒gE蛋白的量为0.5~5Pg ;检测线T2包被猪伪狂犬病毒gB蛋白的量为0.5~5Pg ;检测线Τ3包被猪伪狂犬病毒gD蛋白的量为0.5~5μ8 ;对照线C包被羊抗小鼠IgG抗体的量为I~IOPg ;每条线宽I~3mm ； (4)试纸组装:用粘上一层聚氯乙烯衬膜的聚乙烯板作为支撑载体，上面依次铺设玻璃纤维膜、金标探针的聚酯膜、硝酸纤维素膜和吸水滤纸，外面用胶带包封制成。
6.权利要求 1-3任一项所述的胶体金免疫层析检测试纸的制备方法，其特征在于包括如下步骤:将权利要求1-3任一项所述的的样品吸收区一端浸入待检血清样品中，5~10分钟后判读结果:对照线C出现红色，表示试纸有效；检测线T1、T2、T3出现红色，分别表明伪狂犬病毒gE、gB、gD抗体阳性；检测线Tl、T2、T3无颜色出现，表明血清中没有对应的伪狂犬病毒gE、gB 、gD抗体或抗体量很低。
【文档编号】G01N33/68GK103792373SQ201410089066
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2014年3月12日 优先权日:2014年3月12日
【发明者】廖园园, 漆世华, 秦伟, 朱薇, 刘洁, 孙庆歌, 郑良益, 谢红玲, 温文生, 冯钊 申请人:武汉中博生物股份有限公司