本发明涉及药物质量控制方法，尤其涉及一种用“色卡”软件直观反映量效关系的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法。
背景技术：
：中药复方制剂质量控制一直是困扰中药制剂质量监控和走向国际市场的难点和热点问题，也是中药现代化的重要基础和关键。我国中药复方制剂质量标准经历了从无到有、从简单到逐步完善的过程，现在依旧在不断探索之中。2005年版《中华人民共和国药典》中，薄层色谱法广泛用于复方制剂的鉴别；高效液相色谱法成为含量测定的主流。在量化指标方面，也由测定指标性成分向测定活性成分过渡，由测定单一成分向测定多种成分过渡。其中，指纹图谱技术的出现，为解决复方制剂成分复杂问题带来了希望。然而，脱离成分的有效活性和安全活性来考虑指标成分含量测定的指纹图谱检测方法，虽然分析方法先进，但由于其无法表达中药材及中药复方的药效信息，所以大多数研究人员仅把它作为一种简单的质量鉴别手段。气滞胃痛颗粒由柴胡、延胡索（炙）、枳壳、香附（炙）、白芍、炙甘草6味中药制成，具有舒肝理气，和胃止痛的作用。临床用于肝郁气滞，胸痞胀满，胃脘疼痛。袁荭等的临床实验表明气滞胃痛颗粒有较好的抗炎作用，张亚兵等用气滞胃痛颗粒治疗反流性胃炎，也取得了较好的治疗效果。目前，对气滞胃痛颗粒的质量控制已进行了较多的研究，申请人前期已针对气滞胃痛颗粒的质量控制方法进行了专利保护（气滞胃痛颗粒全时段多波长融合指纹图谱质量控制方法，专利号201210223306.4），然而单纯的质量控制方法仅从其化学成分上对其进行规范，而这些化学成分是否与其药效相关并不可知，故本专利在其基础上，针对气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效，建立了一种基于“量效色卡”的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，采用“色卡”这种更为直观的方式，从药效的角度评价气滞胃痛颗粒的质量。技术实现要素：针对上述问题，基于“量效色卡”的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，通过该方法可以应用高效液相色谱法检测的结果评价气滞胃痛颗粒发挥抗炎镇痛作用的药效，为中药复方质量控制开辟新的思路。为实现本发明的上述目的，本发明采用如下技术方案。本发明提供一种基于“量效色卡”的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛质量控制方法，具体步骤为：步骤一、气滞胃痛颗粒指纹图谱的建立：供试品溶液的制备：气滞胃痛颗粒中6味药材柴胡、延胡索、枳壳、香附、甘草按0～10g，白芍按0～15g对用量进行20次拉丁超立方随机抽取，得到20个不同比例的药材配伍组，将各个配伍组药材混匀，置圆底烧瓶中，20倍重量水回流提取2h，滤过，挥干，定容至250mL，取2mL供试品溶液，加入对乙酰氨基酚对照品200μL（浓度为0.1240mg/mL），作为内标液。其余供试品溶液置水浴锅中挥干，计算出膏率后，留作抗炎镇痛药效学实验用。色谱条件：色谱柱AgilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相0.2‰甲酸水（A）-乙腈（B）；流速1.0mL·min-1；柱温为25℃；检测器波长230nm，254nm，283nm，365nm；进样量15μL；流动相梯度洗脱参数为：时间0min、流动相A95%、流动相B5%；时间10min、流动相A90%、流动相B10%；时间61min、流动相A63%、流动相B27%；时间70min、流动相A60%、流动相B40%；时间90min、流动相A50%、流动相B50%。供试品全时段四波长融合图谱建立：取2mL供试品溶液，加入200μL对乙酰氨基酚作为内标液（浓度为0.1240mg/mL）。以对乙酰氨基酚为内标物，采用高效液相色谱法，利用二极管阵列（DAD）检测器，建立20个配伍组的指纹图谱，采用数据处理软件对210nm，230nm，254nm，283nm，365nm四个波长图谱数据进行处理，获得同时反映四个波长信息的全时段四波长融合图谱和一组图谱文件，并确定38个共有峰。步骤二、气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用药效评价：小鼠单核巨噬细胞RAW264.7给予含药血浆，以细胞培养液上清TNF-α、IL-6和NO含量为检测指标，计算药效综合评分。所述含药血浆的制备方法：将清洁级SD大鼠100只（200~220g），随机分为20组，每组5只。配伍组灌胃给予拉丁超立方设计20组不同配比药材的混悬溶液（灌胃量=各组生药量×出膏率×70kg×0.018/大鼠体重），每日两次，每次间隔12h，连续3d。大鼠取血前12h禁食不禁水，末次灌胃1h后，无菌摘取大鼠眼球取血适量，置2mL离心管中，静置30min，于高速离心机中，3000r·min-1离心15min，无菌分离血清，合并同组血清，混匀。经56℃、30min灭活处理后，0.22µm微孔滤膜过滤除菌，置-20℃保存备用。所述MTT药效检测方法：将实验细胞分为：阴性对照组（不造模，不给药）、模型组（造模，不给药）、气滞胃痛颗粒组、20个配伍组（造模，给含药血清）和空白孔（调零孔），每组设5个复孔。处理过程如下：取对数生长期、生长状态良好的细胞1瓶，调整细胞浓度为1×105个·mL-1，接种于96孔培养板，每孔100µL，继续培养约24h，待细胞贴壁完全。对照组和模型组加入10%空白血清100µL培养，20个配伍组分别加入各自的10%含药血清100µL。给药2h后模型组和配伍组加LPS(终浓度为1mg·L-1)构建炎症模型，各组细胞经分别处理后于37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h，收集上清液，-20℃冰箱保存备用。细胞采用MTT法，酶标仪492nm处扫描，测定吸光值（OD）。步骤三、气滞胃痛颗粒质量与药效相关性评价。利用灰色关联分析方法，对20个药材配伍组38个共有峰的量化峰面积与抗炎镇痛药效进行关联度分析，得到17个色谱峰，排除色谱峰峰面积低于100的色谱峰，筛选出11个与药效相关的共有峰。步骤四、气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用“量效色卡”的构建。计算筛选出的11个与药效相关共有峰的相对保留时间、相对峰面积，确定峰归属，计算与药效相关的各色谱峰的相对峰面积与关联度的乘积，并加和，以最大值为10换算至百分内，建立量效关系方程为：Y药效评分=（0.9951X1+0.9872X2+0.9823X3+0.9756X4+0.9722X5+0.9612X6+0.9530X7+0.9432X8+0.9387X9+0.9375X10+0.9168X11）/10×100。其中Y药效评分为气滞胃痛颗粒抗炎镇痛的药效评分，X1-11分别为11个色谱峰的相对峰面积。应用VisualBasic（VB）编程语言对以上过程进行程序设计，编制“量效色卡”软件。软件色卡会显示6个均分的颜色区域（红、橙、黄、绿、蓝、紫），共100分，以指针指示气滞胃痛颗粒最终药效评分。将气滞胃痛颗粒11个抗炎镇痛有效成分的高效液相色谱检测结果输入“量效色卡”软件，经待检药品选择、内标物保留时间与峰面积设定、读取数据、标准药效数据选择、读取药效数据、抗炎镇痛药效检测过程，即可通过指针直观反映气滞胃痛颗粒抗炎镇痛的药效。与现有技术相比，本发明的积极效果在于。（1）本发明公开了一种将气滞胃痛颗粒有效成分含量与其抗炎镇痛作用相关联的方法。中药指纹图谱虽然能够标示中药中的多种化学成分，可以在整体上控制中药质量，但其所体现的化学成分是否为药效成分以及与药效的相关程度并不明确。因此，单纯利用指纹图谱来评价中药质量的优劣还存在一定的局限性。本发明通过质量与药效相关性研究，阐明了气滞胃痛颗粒指纹图谱特征与其抗炎镇痛作用药效的相互关系，从而使构建的气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效指纹图谱更有针对性的控制气滞胃痛颗粒的质量。（2）本发明首次将气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效的综合评分，以“量效色卡”的形式表现出来。申请人针对指纹图谱和药效作用的相关性，建立相应的量效关系方程，在此基础上开发相应的软件，将气滞胃痛颗粒抗炎镇痛的药效通过“量效色卡”这一直观的形式表现出来，实现对中药药效的“可视化”预测。（3）本发明首次应用“量效色卡”软件对10批气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用进行了评价，即通过输入指纹图谱数据，直接计算出该药的药效作用，此方法操作简便，可以实现对药效作用的预测和计算，进而评价气滞胃痛颗粒的质量，将此方法应用于企业实际生产，通过测定有效成分含量即可直观反映其药效，对于企业保障药品质量，稳定临床疗效，树立良好口碑意义重大，具有较好的实际应用价值。附图说明图1为气滞胃痛颗粒中六个单味药配伍组全时段多波长信息融合色谱图，其中S为对乙酰氨基酚。图2为色卡软件操作界面。图3为1号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图4为2号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图5为3号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图6为4号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图7为5号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图8为6号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图9为7号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图10为8号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图11为9号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。图12为10号气滞胃痛颗粒指纹融合图谱。具体实施方式：1.实验材料。1.1药材与试剂：柴胡、白芍、甘草、延胡索、枳壳、香附药材（辽宁本溪三药有限公司）；对乙酰氨基酚对照品（中国药品生物鉴定所，批号：018-8905）；乙腈（色谱纯美国TEDIA公司）；甲酸（色谱纯天津市科密欧化学试剂有限公司）；气滞胃痛颗粒（辽宁华润本溪三药有限公司，批号：1号：20110710；2号：20110903；3号：20110413；4号：201106035号：20110525；6号：20111224；7号：20111218；8号：201112239号：20110910；10号：20110713）；大鼠前列腺素E2试剂盒（上海朗顿生物科技有限公司，批号：201501013）；白细胞介素-8（IL-8）试剂盒（上海朗顿生物科技有限公司，批号：201501017GH）；角叉菜胶（上海源叶生物科技有限公司，批号：J08J6R2）；小鼠肿瘤坏死因子(TNF-α)、小鼠一氧化氮(NO)、小鼠白细胞介素-6(IL-6)试剂盒(均购自上海源叶生物科技有限公司)；水为超纯水。1.2仪器与设备：Agilent-1290高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；ACCULABALC-11C.4型电子天平（德国赛多利斯集团）；DZTW型调温电热套（北京市永光明医疗仪器厂）；SHZ-DⅢ型循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司）；Milli-Q超纯水处理装置（美国Millipore公司）。1.3细胞株：小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7由中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心提供。1.4实验动物：健康清洁级SD大鼠，体重（200~220g），雌性，由大连医科大学实验动物中心提供，动物许可证号SCXK（辽）2011-0002。动物饲养于空调室内，室温20±2℃，相对湿度50%-60%，颗粒饲料喂养，自由饮水。2.实验方法与结果2.1气滞胃痛颗粒指纹图谱研究2.1.1供试品溶液的制备：应用Isight软件气滞胃痛颗粒中6味药材柴胡、延胡索、枳壳、香附、甘草按0～10g，白芍按0～15g对用量进行20次拉丁超立方随机抽取，得到20个不同比例的药材配伍组，结果见表1。将各个配伍组药材混匀，置圆底烧瓶中，20倍重量水回流提取2h，滤过，挥干，定容至250mL，取2mL供试品溶液，加入对乙酰氨基酚对照品200μL（浓度为0.1240mg/mL），作为内标液。其余供试品溶液置水浴锅中挥干，计算出膏率后，留作抗炎镇痛药效学实验用。表1拉丁超立方随机抽样结果（g）。因素柴胡香附白芍枳壳延胡索甘草13.78.511.05.82.97.226.79.213.01.53.65.235.22.511.32.71.14.841.54.08.56.77.22.455.75.74.04.24.87.666.06.34.87.21.76.277.58.27.30.50.59.783.41.41.69.76.62.694.77.713.61.69.23.7101.37.110.03.76.25.5118.50.89.29.40.51.0128.50.512.36.02.33.0132.29.514.42.37.79.2140.13.23.00.14.16.8154.13.77.63.18.70.2169.22.25.58.78.28.5170.86.76.35.05.51.5182.71.60.28.29.58.1199.65.10.87.65.24.1207.14.63.44.53.01.22.1.2供试品全时段四波长融合图谱建立：（1）色谱条件：色谱柱：AgilentTC-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱；流动相：0.2‰甲酸水（A）-乙腈（B）；流速：1.0mL·min-1；柱温：25℃；检测器波长：230nm，254nm，283nm，365nm；进样量：15μL。流动相梯度洗脱表见表2。表2流动相梯度洗脱表。时间（min）流动相A（%）流动相B（%）0955109010616327706040905050（2）供试品全时段四波长融合图谱建立：以对乙酰氨基酚为内标，通过DAD检测器对20个配伍组色谱图进行紫外全波长（200-400nm）扫描。根据扫描结果确定融合波长为230nm，254nm，283nm，365nm。分别从Agilent1100色谱工作站中导出230nm，254nm，283nm，365nm的dif格式数据文件，使用Matlab软件编程，对dif格式数据进行全时段多波长信息融合，得到一张同时反映四个波长信息的色谱图和一组图谱文件，并确定38个共有峰。以配伍7为例，全时段多波长信息融合色谱图见图1。（3）色谱峰归属分析：以气滞胃痛颗粒中六个单味药材所含化学成分为基础，将配伍组中的各个色谱峰归属其药材来源，并进一步归属其化学成分，使有效成分更加明确，见表3。表3配伍组色谱峰归属表。峰号保留时间（min）药材归属色谱峰定性17.60延胡索28.13白芍没食子酸310.03延胡索413.72514.95香附618.21720.40白芍氧化芍药苷821.05香附922.52白芍芍药苷亚硫酸酯1028.13白芍芍药内酯苷1129.28枳壳1231.23白芍芍药苷1336.63枳壳圣草次苷1438.19白芍芍药内酯苷类似物1539.07甘草芹糖基甘草苷1640.39甘草甘草苷1741.52白芍1842.42枳壳新圣草苷1946.59枳壳芸香柚皮苷2047.20枳壳2149.23枳壳柚皮苷2250.79枳壳橙皮苷2353.37枳壳新橙皮苷2456.10枳壳2557.03甘草2658.46枳壳2759.21甘草异甘草苷2862.19甘草甘草素2967.143068.24枳壳枸橘苷3171.59白芍苯甲酰芍药苷3272.74白芍3373.74柴胡3474.63甘草3576.85甘草异甘草素3677.49香附3779.32甘草甘草酸单铵盐3881.18柴胡柴胡皂苷A应用Matlab软件编程，将20个配伍组色谱图进行全时段多波长信息融合，得到20个配伍组中各个色谱峰峰面积的数据，将色谱峰的峰面积转化成化学成分含量（每天给大鼠灌胃的药物中某化学成分的含量），与体外药效数据进行灰色关联分析。2.2气滞胃痛颗粒抗炎镇痛作用药效评价。2.2.1含药血浆的制备。将清洁级大鼠100只（200~220g），随机分为20组，每组5只。配伍组灌胃给予按表1拉丁超立方设计20组不同配比药材的混悬溶液（灌胃量=各组生药量×出膏率×70kg×0.018/大鼠体重），每日两次，每次间隔12h，连续3d。大鼠取血前12h禁食不禁水，末次灌胃1h后，无菌摘取大鼠眼球取血适量，置2mL离心管中，静置30min，于高速离心机中，3000r·min-1离心15min，无菌分离血清，合并同组血清。经56℃、30min灭活处理后，0.22µm微孔滤膜过滤除菌，置-20℃保存备用。2.2.2MTT法检测药效。将实验细胞分为：阴性对照组（不造模，不给药）、模型组（造模，不给药）、20个配伍组（造模，给含药血清）和空白组（调零孔），每组设5个复孔。处理过程如下：取对数生长期、生长状态良好的细胞1瓶，调整细胞浓度为1×105个·mL-1，接种于96孔培养板，每孔100µL，继续培养约24h，待细胞贴壁完全。对照组和模型组加入10%空白血清100µL培养，20个配伍组分别加入各自的10%含药血清100µL。给药2h后模型组和配伍组加LPS(终浓度为1mg·L-1)构建炎症模型，各组细胞经分别处理后于37℃、5%CO2培养箱中继续培养24h，收集上清液，-20℃冰箱保存备用。细胞采用MTT法，酶标仪492nm处扫描，测定吸光值（OD）。2.2.3细胞上清液中TNF-α、IL-6和NO含量检测。将细胞上清液，按TNF-α、IL-6和NO试剂盒说明书操作，用酶标仪测定OD值，计算各组TNF-α、IL-6和NO的含量。TNF-α抑制率=（1-TNF-α含量试验组/TNF-α含量对照组）×100%。IL-6抑制率=（1-IL-6含量试验组/IL-6含量对照组）×100%。NO抑制率=（1-NO含量试验组/NO含量对照组）×100%。以TNF-α抑制率、IL-6抑制率、NO抑制率为指标作综合评价，总分为100分，TNF-α抑制率、IL-6抑制率各占35分，NO抑制率占30分。以各指标的最大值为最高分，以此类推（如TNF-α抑制率最大值为72.58，评为35分，其余各组的评分Yi,TNF-α=35×Xi,TNF-α/72.58），结果见表4。表420个配伍组体外药效学测定结果。组别TNF-α抑制率/%分值/分IL-6抑制率/%分值/分NO抑制率/%分值/分总分161.7529.7742.7116.2225.6730.0075.99272.5835.0076.8729.1910.0211.7175.90362.6130.1991.2134.6416.7319.5584.38461.5829.7062.6423.7910.2011.9265.41556.4527.2232.9012.49-2.07-2.4137.30661.4129.6247.5618.060.810.9448.62759.8428.8664.0924.3414.4916.9370.13864.2330.9774.8828.431.701.9961.399-5.25-2.5360.0422.800.090.1020.371048.1023.1973.2627.820.270.3151.321151.7824.9757.6121.882.502.9349.78128.273.9962.0023.550.810.9428.481333.1315.9758.3622.167.258.4746.601413.446.4892.1635.0012.1614.2255.7015-13.48-6.5066.4825.252.062.4021.151633.7916.2964.0824.338.239.6250.241716.588.0083.4231.684.114.8144.49181.570.7671.0927.005.466.3834.141921.4010.3263.5024.1114.7917.2851.712010.425.0337.5014.2412.4014.4933.762.3气滞胃痛颗粒质量与药效相关性评价。应用灰色系统理论建模软件（GTMS3.0）对20个不同比例药材组的38个共有峰的量化峰面积与气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效进行关联度分析，选取关联度大于0.9的共有峰，结果见表5。表5各共有峰与抗炎镇痛药效相关性。排名峰号归属药材关联系数色谱峰定性111枳壳0.9969216甘草0.9951甘草苷319枳壳0.9872芸香柚皮苷438柴胡0.9823柴胡皂苷A535甘草0.9756异甘草素625甘草0.972272白芍0.9612没食子酸834甘草0.9612915甘草0.955芹糖基甘草苷1040.95461160.9531226枳壳0.94321337甘草0.9387甘草酸单铵盐1412白芍0.9375芍药苷1514白芍0.9292芍药内酯苷类似物1613枳壳0.9212圣草次苷1710白芍0.9168芍药内酯苷经灰色关联分析得到了气滞胃痛颗粒中与抗炎镇痛药效关联较为密切的色谱峰，考虑到个别色谱峰峰面积较低，对相关药效贡献较小，针对以上结果进行了筛选，排除色谱峰峰面积低于100的色谱峰，最终得到与抗炎镇痛药效相关的共有峰如下。表6各共有峰与抗炎镇痛药效相关性。峰号归属药材关联系数色谱峰定性16甘草0.9951甘草苷19枳壳0.9872芸香柚皮苷38柴胡0.9823柴胡皂苷A35甘草0.9756异甘草素25甘草0.97222白芍0.9612没食子酸60.95326枳壳0.943237甘草0.9387甘草酸单铵盐12白芍0.9375芍药苷10白芍0.9168芍药内酯苷2.4量效色卡软件的程序设计应用VisualBasic（VB）编程语言对色卡软件进行程序设计，以对乙酰氨基酚为内标，计算各色谱峰相对保留时间及相对峰面积，以相对保留时间确定峰归属，计算与药效相关的各色谱峰的相对峰面积与关联度的乘积，并加和，以最大值为10换算至百分内，建立量效关系方程为：Y药效评分=（0.9951X1+0.9872X2+0.9823X3+0.9756X4+0.9722X5+0.9612X6+0.9530X7+0.9432X8+0.9387X9+0.9375X10+0.9168X11）/10×100。其中Y药效评分为气滞胃痛颗粒抗炎镇痛的药效评分，X1-11分别为11个色谱峰的相对峰面积。最终得到气滞胃痛颗粒对抗炎镇痛药效的药效评分。应用VB程序开发工具设计软件操作界面，以及评分输出方式。此项目VB工程共包含2个窗体，2个模块和1个用户控件，其中窗体包含欢迎界面和主要操作窗体，图2所示，主窗体中共有5个click事件和7个change事件，他们都被相应的程序设计语言所控制，由于仪器设备不同，同一色谱条件下谱峰的保留时间可能不同，因此本程序设计时采用手动输入内标峰的保留时间及峰面积，以避免由于仪器不同所导致的偏差。在2个模块中输入了程序所用到的公用的函数、过程、常数、自定义结构、全局变量等。由图2可以看出，色卡被平均分为六个颜色区域（红、橙、黄、绿、蓝、紫），共100分，以指针指示气滞胃痛颗粒最终药效评分。通过待检测样品选择，导入待检测样品融合图谱数据，输入内标物保留时间和峰面积，读取待检测样品数据，待检测数据容量中显示待检测样品共有峰数量，选择标准药效数据，即筛选出的与抗炎镇痛相关的11个共有峰的图谱数据，标准药效容量中显示为11，以标准药效数据中相对保留时间作为指标，通过量效关系方程读取待检测样品药效数据，最后检测抗炎镇痛药效，即可通过指针指示分数直观反映气滞胃痛颗粒抗炎镇痛的药效。2.510批气滞胃痛颗粒指纹图谱。2.5.1供试品溶液的制备。取10个批次的气滞胃痛颗粒，各2.5g，混匀，研细，精密称取2.5g，置具塞锥形瓶中，精密加入蒸馏水100mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率33kHz）60分钟，取出，放冷，再称定重量，用蒸馏水补足减失的重量，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25mL，加在AB-8树脂柱（0.3-1.25mm，20g，内径1.5cm）上，用蒸馏水150mL洗涤，再用200mL95%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加20%乙腈使溶解并转移至10mL容量瓶中，加20%乙腈定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得，加入对乙酰氨基酚作为内标，终浓度0.02067mg·mL-1。2.5.2色谱条件。同第一部分“2.1.2”项下色谱条件。使用Matlab软件编程，对4个波长下的指纹图谱进行多波长融合，融合结果见图3-12。2.5.310批气滞胃痛颗粒药效评分。将融合后的结果导出，按色卡软件操作过程操作，得到各组抗炎镇痛药效评分，如表7所示。表7各组药效评分及综合评分。编号1号2号3号4号5号6号7号8号9号10号评分70.0165.69108.7467.5551.9761.5356.8461.1153.5367.242.610批气滞胃痛颗粒抗炎镇痛体内药效验证。2.6.1动物分组及给药。将健康SD大鼠按体重随机分为12组，每组10只，分别为空白组、模型组、10批次气滞胃痛颗粒组。除空白组、模型组外，其余大鼠每天灌胃给药1次，0.15g·d-1。空白组、模型组灌服等体积蒸馏水。各组大鼠于第三天给药后40min后，模型组注射生理盐水15mL·kg-1，其余各组腹腔注射0.7%冰醋酸15mL·kg-1，记录注射后20min内发生扭体总数，结果见表8。表8冰醋酸致大鼠扭体反应。组别/指标扭体次数（±S）抑制率（％）空白——模型16.10±2.19—1号4.50±2.38**752号12.30±3.33253号4.60±2.04**754号9.50±2.66*43.755号11.40±2.5631.256号5.70±3.52**68.757号13.60±4.2318.758号6.10±1.11**62.59号7.90±3.89**56.2510号8.20±3.78*50注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01大鼠连续给药7天，于末次给药前，采用自制足体积测量装置测量大鼠左后足体积并记录，给药后30min，除空白组外，于大鼠左后肢足跖皮下注射角叉菜胶致炎，空白组注射等体积生理盐水，2h后，大鼠摘眼球取血，分离血清备用，脱颈椎处死大鼠，用同样方法，测量大鼠左后足体积并记录。留左足样本和大鼠胃组织于-80℃保存。结果见表9。表9各组肿胀抑制率（±S）。组别剂量（g·d-1）足肿胀度肿胀抑制率（%）空白—0.250±0.014**—模型—0.848±0.076—1号0.150.650±0.08223.222号0.150.576±0.019*32.053号0.150.541±0.011*36.184号0.150.536±0.010**36.775号0.150.725±0.00814.386号0.150.727±0.02114.157号0.150.573±0.095*32.398号0.150.820±0.0363.219号0.150.608±0.00728.2610号0.150.515±0.078**39.19注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.012.6.2大鼠血清PGE2、IL-8含量检测。各组大鼠取血后，静置30min，3000r离心15min，分离血清，按试剂盒操作说明检测，结果见表10。表10对PGE2及IL-8素的影响（±S）。组别样本量PGE2（ng·L-1）IL-8（ng·L-1）空白组10337.38±4.70**236.83±2.12**模型组10403.86±2.11305.08±6.261号10359.55±2.43*280.73±4.502号10351.93±3.11**263.88±3.48*3号10352.77±3.16**258.59±2.85**4号10373.93±6.09277.06±6.675号10347.22±3.96**271.19±7.79*6号10359.08±2.34*298.91±8.737号10376.70±7.65267.76±3.62*8号10384.35±3.12259.92±3.90**9号10379.56±3.47268.97±2.14*10号10381.79±4.28282.68±6.95注：与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.012.6.310批气滞胃痛颗粒抗炎镇痛体内药效综合评价。以体内扭体抑制率、足肿胀抑制率、PGE2相对含量、IL-8相对含量为指标，对10批气滞胃痛颗粒抗炎镇痛体内药效进行综合评价，按照评分公式：综合评分=[给药组扭体抑制率/扭体抑制率mas+给药组足肿胀抑制率/足肿胀抑制率mas+（1-给药组PGE2含量/PGE2含量mas）+（1-给药组IL-8含量/IL-8含量mas）]，各指标统计时，具有统计学差异者相对抑制率（或含量）赋予真实比值，不具有统计学差异者计分为0，结果见表11。表11气滞胃痛颗粒抗炎镇痛体内药效综合评分结果。组别/指标扭体抑制率足肿胀抑制率PGE2相对含量IL-8相对含量综合评分1号100.0601.062号00.820.080.121.023号10.920.080.132.144号0.580.94001.525号000.10.090.196号0.9200.0700.987号00.8300.10.938号0.83000.130.969号0.75000.10.8510号0.671001.67应用“量效色卡”软件可以得到10批气滞胃痛颗粒抗炎镇痛药效的评分，与药效实验综合评分结果相对比，经软件所得评分结果与药效评分结果基本一致，说明此软件可在一定程度上反应气滞胃痛颗粒的药效，能够用于气滞胃痛颗粒质量控制当中。当前第1页1 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