一种测定克洛己新干混悬剂中多种有效成分的方法与流程

本发明属于分析技术领域，具体涉及一种测定克洛己新干混悬剂中多种有效成分的方法。

背景技术：

克洛己新干混悬剂为江苏正大清江制药依照中国国家药品标准生产的处方制剂，主要用于治疗敏感菌引起的呼吸道感染伴有粘稠痰液不易咳出的患者。

克洛己新干混悬剂的制备方法为：取8.77g盐酸溴己新加入到适量粘合剂的水中，待用。再取适量粉碎过的蔗糖与2000g的头孢克洛原料混合。上述含有盐酸溴己新的溶液与含有头孢克洛原料的蔗糖混合物充分混合，经过烘干，整粒，加入调味剂，包装，即得。其中产品中主要含有头孢克洛和盐酸溴己新，因此，对克洛己新的含量进行控制，实现多种有效成分分离检测，对其质量控制具有重要的现实意义。

技术实现要素：

本发明的目的在于提供一种测定克洛己新干混悬剂中多种有效成分的方法，以测定克洛己新干混悬剂中头孢克洛与盐酸溴己新的含量，进而对克洛己新干混悬剂进行质量控制。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种测定克洛己新干混悬剂中多种有效成分的方法，包括如下步骤：

对照品溶液的制备：称取头孢克洛对照品、盐酸溴己新对照品、加甲醇溶解，制成每1ml含头孢克洛500μg、盐酸溴己新20μg、的混合对照品溶液；

供试品溶液的制备：取克洛己新干混悬剂适量，加甲醇溶解，过滤即得；

色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；流动相：0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.2±0.1水溶液－甲醇=45：55；流速：0.9ml/min~1.1ml/min；检测波长：240~245nm；柱温：35℃~45℃；进样量：8μl~12μl；

理论塔板数：以头孢克洛峰计算大于等于2000；

检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，即得对照品与供试品的图谱，对照头孢克洛，盐酸溴己新线性回归方程，对供试品溶液中头孢克洛、盐酸溴己新进行定性和定量，进而计算得克洛己新干混悬剂中头孢克洛、盐酸溴己新的含量。

所述头孢克洛线性回归方程y=2,339,110.2857x-28,344.9333，r²=1.0000，线性良好。

所述盐酸溴己新线性回归方程y=11,440,278.5714x-35,074.7333，r²=0.9991，线性良好。

本发明进一步改进方案为：

所述流动相为0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.2水溶液－甲醇=45：55，柱温为40℃，检测波长为243nm。

本发明的更进一步改进方案为：

所述流动相为0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.1水溶液－甲醇=45：55，柱温为35℃，检测波长为240nm。

本发明的再进一步改进方案为：

所述流动相为0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.3水溶液－甲醇=45：55，柱温为45℃，检测波长为245nm。

本发明的有益效果为：

本发明检测方法各色谱峰分离较好，基线平稳，峰型好，重复性较好，该方法具有良好的线性关系、精密度、稳定性、回收率，能够准确检测克洛己新干混悬剂中头孢克洛与盐酸溴己新的成分含量，达到对克洛己新干混悬剂进行质量控制的目的。

本发明所使用的仪器与试剂如下：

1、高效液相色谱仪：waters公司e2695-2998型。

2、试剂：对照品头孢克洛、盐酸溴己新购于中国食品药品检定研究院。

克洛己新干混悬剂：正大清江制药有限公司自制。

附图说明：图1为实施例1色谱条件下所得的对照品谱图和供试品谱图；

图2为实施例2色谱条件下所得的对照品谱图和供试品谱图；

图3为实施例3色谱条件下所得的对照品谱图和供试品谱图；

图4为实施例4所得色谱图；

图5为头孢克洛峰面积值和浓度的线性关系图；

图6为盐酸溴己新峰面积值和浓度的线性关系图；

以下通过实施例形式再对本发明的内容做进一步详细说明，但不应就此理解为本发明上述主题范围内仅限于以下实施例。在不脱离本发明上述技术前提下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的相应替换或变更的修改，均包括在本发明内。

实施例1

对照品溶液的制备：称取头孢克洛对照品、盐酸溴己新对照品、加甲醇溶解，制成每1ml含头孢克洛500μg、盐酸溴己新20μg、的混合对照品溶液；

供试品溶液的制备：取批号为20160401的克洛己新干混悬剂2.5g，加甲醇溶解，过滤即得供试品溶液；

色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；流动相：0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.2水溶液－甲醇=45：55；流速：1ml/min；检测波长：243nm；柱温：40℃；进样量：10μl；

理论塔板数：以头孢克洛峰计算大于等于2000；

检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图1所示。

根据检测结果，每袋克洛己新干混悬剂中，头孢克洛不得少于237.5mg，盐酸溴己新不得少于8.24mg。

实施例2

对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。

色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；流动相：0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.1水溶液－甲醇=45：55；流速：1ml/min；检测波长：240nm

柱温：35℃；进样量：10μl；

理论塔板数：以头孢克洛峰计算大于等于2000；

检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图2所示。

根据检测结果，每袋克洛己新干混悬剂中，头孢克洛不得少于237.5mg，盐酸溴己新不得少于8.24mg。

实施例3

对照品溶液和供试品溶液的制备同实施例1。

色谱条件如下：

色谱柱：十八烷基键合硅胶色谱柱；流动相：0.005mol/l四丁基氢氧化铵，ph调节至3.3水溶液－甲醇=45：55；流速：1.1ml/min；检测波长：246nm；柱温：45℃；进样量：10μl；

理论塔板数：以头孢克洛峰计算大于等于2000；

检测方法：精密吸取对照品溶液与供试品溶液，注入高效液相色谱仪，测定，记录图谱，如图2所示。

根据检测结果，每袋克洛己新干混悬剂中，头孢克洛不得少于237.5mg，盐酸溴己新不得少于8.24mg。

实施例4：干扰试验

对照品溶液的制备同实施例1。

全辅料溶液的制备：取1克蔗糖、0.02g粘合剂，加甲醇定容至500ml，摇匀，过滤即得；

色谱条件同实施例1。

检测方法：精密吸取对照品溶液、全辅料溶液和空白溶剂甲醇，注入液相色谱仪，测定，记录图谱，如图4所示。

根据测量结果，辅料与空白溶剂在主峰位置均无吸收峰，对含量测定无干扰。

实施例5：头孢克洛线性回归方程

将对照品头孢克洛分别配制成0.1mg/ml~0.6μg/ml的6个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值（s）对浓度（c）进行线性回归，求得头孢克洛的线性回归方程：y=2,339,110.2857x-28,344.9333r²=1.0000线性良好。以峰面积值s对浓度c作图,得一直线图，见图5。

实施例6：盐酸溴己新线性回归方程

将对照品盐酸溴己新分别配制成0.004mg/ml~0.024mg/ml的10个不同浓度的标准溶液，按照实施例1的色谱条件，各精密量取10μl注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以峰面积值（s）对浓度（c）进行线性回归，求得盐酸溴己新的线性回归方程：y=11,440,278.5714x-35,074.7333r²=0.9991线性良好。以峰面积值s对浓度c作图，得一直线图，见图6。

实施例7：进样精密度试验

对照品溶液制备方法和色谱条件同实施例1，取对照品溶液，连续进样5次，记录色谱图，测定结果见表1。

表1进样精密度试验结果

结论：由表1可见，头孢克洛rsd%为0.1%（n=5）、盐酸溴己新rsd%为0.4%（n=5），表明进样精密度较好。

实施例8：回收率试验

分别取头孢克洛、盐酸溴己新配成对照溶液，各样品按照实施例1的色谱条件和检测方法测定，计算回收率，测定结果见表2，表3。

表2头孢克洛回收率试验结果

表3盐酸溴己新回收率试验结果

结论：由表2，表3可见，头孢克洛平均回收率为98.57%，rsd为0.84%，盐酸溴己新平均回收率为99.21%，rsd为1.97%，表明回收率较好。

实施例9：重复性试验

按照实施例1的色谱条件，取批号为20160401的样品6份，分别过滤精密称定，测定结果见表4。

表4重复性测定结果（n=6）

结论：由表4可见，试验结果头孢克洛rsd为1.79%，盐酸溴己新rsd为1.85%，表明重复性较好。

实施例10：色谱条件耐用性流速变化

按照实施例1的实验方法，将流速变为：0.9ml/min、1.1ml/min，考察头孢克洛和盐酸溴己新之间的峰分离度，结果见表6。

表5流速变化测试结果表

结论：本色谱条件下测定，可见将流速在0.9ml/min~1.1ml/min条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。

实施例11：色谱条件耐用性进样量变化

按照实施例1的实验方法，将进样量变为：8μl、12μl考察头孢克洛和盐酸溴己新之间的峰分离度，结果见表7。

表6进样量变化测试结果表

结论：本色谱条件下测定，可见将流速在8μl~12μl条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。

实施例12：色谱条件耐用性柱温变化

按照实施例1的实验方法，将进样量变为：35℃、45℃考察头孢克洛和盐酸溴己新之间的峰分离度，结果见表7。

表7进样量变化测试结果表

结论：本色谱条件下测定，可见将流速在35℃~45℃条件允许范围内变化对分离度检测没有明显影响。