一组检测生脉注射液质量的血清蛋白标志物及其应用

文档序号:26098876发布日期:2021-07-30 18:09阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一组检测生脉注射液质量的心肌缺血生物标志物,所述的生物标志物包括proteinid分别为q4km73、m0r5j4、m0r590、q5m871、d3zjw6、q63514、q5m8c6、p15650、d4a901的蛋白质中的一种或多种。

2.根据权利要求1所述的生物标志物,其特征在于,所述的生物标志物包括proteinid分别为m0r590、q5m871、m0r5j4的蛋白质中的一种或多种。

3.检测权利要求1-2任一项所述的生物标志物的试剂在制备诊断心肌缺血的制剂中的应用。

4.检测权利要求1-2任一项所述的生物标志物的试剂在生脉注射液药效学研究中的应用。

5.检测权利要求1-2任一项所述的生物标志物的试剂在制备评价生脉注射液质量的试剂中的应用。

6.一种检测试剂盒,其特征在于,所述的试剂盒中包括检测权利要求1-2任一项所述的生物标志物的试剂。

7.一种生脉注射液质量评价血清生物标志物的筛选方法,其特征在于,所述方法包括以下步骤:

(1)样品提取:取生脉组注射生脉注射液的心肌缺血大鼠、模型组未注射生脉注射液的心肌缺血大鼠和对照组普通大鼠血清样本,去除高丰度蛋白质,得到低丰度组分溶液;超滤浓缩,加入裂解液,离心,取上清;采用bca法进行蛋白质定量;

(2)tmt标记:各血清样品消化后,对照组、模型组和生脉组各三个生物学重复样本分别以126、127n,127c,128n,128c,129n,129c,130n和130c标记;每组标记后的肽段等量混合,采用highphrpspincolumn进行分级,分级样品冻干后用12μl0.1%fa复溶,在280nm的uv光谱下测定肽段浓度;

(3)色谱分离与质谱分析:采用液相色谱分离样品,分离后的样品进行质谱分析,搜索质谱数据,得到差异蛋白。

8.根据权利要求7所述的生脉注射液质量评价血清生物标志物的筛选方法,其特征在于,所述的液相色谱条件为:缓冲液a液为0.1%甲酸水溶液,b液为0.1%甲酸乙腈水溶液,其中乙腈为84%;色谱柱以95%的a液平衡,流速为300nl/min;分级后的肽段样品分别进行1.5小时梯度洗脱,液相梯度为:0min-80min,b液线性梯度从0%-55%;80min-85min,b液线性梯度从55%-100%;85min-90min,b液维持在100%。

9.根据权利要求7所述的生脉注射液质量评价血清生物标志物的筛选方法,其特征在于,所述的质谱分析条件为:检测方式为正离子,母离子扫描范围300–1800m/z,一级质谱质荷比为200m/z,分辨率为70,000,agc靶点为3e6,一级最大注射时间为10ms,扫描范围数为1,动态排除时间为40.0s;每次全扫描后采集10个碎片图谱ms2scan,ms2激活类型为hcd,隔离窗为2m/z,二级质谱质荷比为200m/z,分辨率为35,000,microscans为1,二级最大注射时间为60ms,归一化碰撞能量为30ev,underfill为0.1%,质谱分析90分钟。


技术总结
本发明公开了一组检测生脉注射液质量的血清蛋白标志物及其应用,属于中药领域。本发明利用血清蛋白质组学方法,筛选得到了一组受异丙肾上腺素(ISO)诱导的心肌缺血调控,同时生脉注射液干预对其具有回调作用的蛋白,并选择了其中的三个蛋白进行了PRM验证,结果也验证了所述蛋白质作为生脉注射液质量标志物的可靠性。本发明还提供了一种有效的用于生脉注射液质量评价的血清标志物筛选方法,此方法能够有效的筛选血清中生脉注射液的标志物,为进一步筛选更多生脉注射液药效学指标奠定了基础。本发明公开的标志物同时能够作为心肌缺血的诊断标志物,并且在生脉注射液质量评价和药效学研究中具有广泛的应用价值。

技术研发人员:詹淑玉;张小平;丁宝月;张洁;姬翔宇;魏真真;刘国强;吕晓庆;郑永霞
受保护的技术使用者:嘉兴学院;嘉兴市第一医院
技术研发日:2021.04.27
技术公布日:2021.07.30
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