一种液质联用快速检测白酒中吡嗪类物质的方法
【技术领域】
[0001] 本法明属于白酒风味研究领域，涉及一种检测白酒中化嗦类物质的方法，具体涉 及一种应用高效液相色谱-质谱联用的技术检测白酒中化嗦类物质的方法。 技术背景
[0002] 白酒是W粮谷为主要原料，W大曲、小曲或款曲及酒母等为糖化发酵剂，经蒸煮、 糖化、发酵、蒸觸而制成的中国特有的蒸觸酒。除酒精和水W外，约占白酒2%的微量成分对 酒的香型和品质起着至关重要的作用，该些香味贡献成分种类众多，主要分为醇类、醋类、 酸类、酵丽类化合物、缩酵类、芳香族化合物、含氮化台物和巧喃化合物等。含氮化合物主要 是化嗦类，是酱香、芝麻香型白酒的特征成分之一。化嗦类化合物是一类含1，4-二氮杂 苯母环化合物的总称，该类物质具有类似炒坚果、青椒、烤肉等怡人香味，其香气透散性好， 阔值较低，并且对其他的香味物质具有明显的烘巧和叠加作用。化嗦的衍生物广泛存在于 天然和发酵食品中，如可可、咖啡、威±忌、白兰地、朗姆酒、葡萄酒和啤酒中都能检测到化 嗦类物质。中国传统白酒，尤其是酱香、芝麻香和兼香型白酒中也发现含量较高的化嗦类物 质。研究表明，化嗦类物质是一种对人体有益的物质，尤其是四甲基化嗦(又名川写嗦)是中 药材川写根茎的主要活性生物碱成分，因其具有扩张血管、防止酒精对胃黏膜和肝脏的损 伤、改善微循环和抑制血小板凝集的药理等功能，是白酒中的健康功能因子，赋予了中国白 酒有益健康的功能。
[000引白酒中化嗦类物质间含量差距较大，几个yg/L到mg/L之间，检测工作存在一 定困难。近年来，随着气相色谱质谱联用技术的不断发展和成熟，气相色谱-质谱联用 (GC-MS)技术被广泛应用于化嗦类物质的检测。20世纪70年代开始，液液萃取（LLE)被用 来提取化嗦类物质，Liebich等利用己離-戊焼作为混合溶剂萃取，再Wl0%HCl分离，利用 GC-MS检测朗姆酒中的7种化嗦类物质；Wo化en等利用减压蒸觸的方式，蒸去酒中大部分水 分和己醇，再利用CH2CI2萃取，利用GC-MS检测朗姆酒和威±忌中的化嗦类物质；余斌等采 用调酸旋转蒸发除去大部分水、醇和易挥发成分，测定酒中化嗦类物质，提高了回收率。然 而，该些方法具有需要消耗大量有机溶剂，样品需求量大、步骤繁琐，回收率低，预处理过程 中目标物损失严重等缺点。顶空-固相微萃取技术（HS-SPME)克服了上述缺点，因其无需 有机溶剂，样品需求量低，集采集、萃取、浓缩、进样于一体，可与色谱联用等优点，成为了检 测酒中化嗦类物质前处理方法的首选。专利号200710019764. 5,江南大学徐岩、范文来等 建立了顶空-固相微萃取-气相色谱-火焰离子检测器/质谱检测器（服-SPME-GC-FID/ MS)联用技术检测白酒中9种化嗦类化合物；专利号200910311435. 7,陈华磊等利用 服-SPME-GC-FID/MS联用技术检测啤酒中7种化嗦类物质；吴建峰等利用顶空-固相微萃 取-气相色谱联用对于化嗦类物质更具特异性的氮磯检测器（HS-SPME-GC-NPD)，检测白酒 中9种化嗦类物质。上述方法虽较为成熟，但仍然存在着分析时间长，萃取不充分，目标物 质有损失等缺点，因此需要建立一种新的方法来克服当前存在的技术瓶颈。
[0004] 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS)，它W液相色谱作为分离系统，质谱为检测系 统。样品在质谱部分和流动相分离，被离子化后，经质谱的质量分析器将离子碎片按质量数 分开，经检测器得到质谱图。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的 高分离能力，与MS具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结 合起来，在检测分析领域得到了广泛的应用，常用来检测难挥发性物质。目前尚未发现利用 LC-MS测定白酒中挥发性的风味成分的研究报告。LC-MS技术测定白酒中化嗦类物质克服 了W往检测方法的前处理步骤繁琐、分析时间长、萃取不充分、定量限较高等缺点，具有前 处理简便、分析时间短、样品无损失、检测限低、回收率高、稳定性好等优点，适用于各种香 型白酒中化嗦类物质检测分析，当前相关研究尚属空白。
【发明内容】
[0005] 本发明为了克服现有检测技术存在的前处理步骤繁琐、分析时间长、萃取不充分、 定量限较高等缺点，提供了一种利用高效液相色谱-质谱联用技术测定白酒中化嗦类物质 的分析方法，可W快速、简便、准确的测定各种香型白酒中化嗦类物质。
[0006] 本发明通过W下技术方案实现： 一种液质联用快速检测白酒中化嗦类物质的方法，将待测酒样经超纯水稀释3~8倍 过滤后，用高效液相色谱实现化嗦类物质的分离，分离后的化嗦类物质用质谱仪检测定性， 再利用外标法实现白酒中化嗦类物质定量分析。
[0007] 本发明的进一步改进方案是： 所述化嗦类物质定性分析，是通过对比酒样中未知物质的保留时间和分子质量与9种 化嗦标准品的保留时间和分子质量得到。
[0008] 所述化嗦类物质定量分析包括如下步骤： 将待测酒样检测后得到的分子质量和保留时间的峰面积代入相应的9种化嗦类物质 的混标样标准曲线中，查出酒样中各化嗦类物质的含量。
[0009] 所述化嗦类物质为2-甲基化嗦（2-MPX2, 6-二甲基化嗦（2, 6-DMPX2-己基化嗦 (2-EPX2, 3, 5-H甲基化嗦（2, 3, 5-TMPX2-己基-6-甲基化嗦（2-E-6-MPX2, 3, 5, 6-四甲 基化嗦（TTMPX5-己基-2, 3-二甲基化嗦（5-E-2, 3-DMPX2, 3-二己基化嗦（2, 3-DEP)和 2, 3-二己基-5-甲基化嗦（2, 3-DE-5-MP) 9种物质。
[0010] 本发明的更进一步改进方案是： 所述高效液相色谱的色谱条件为；仪器；戴安Ultimate3000高效液相色谱；色谱柱：HypersilGOLD色谱柱100mmX2. 1mm，3ym;流动相；A为5ml甲酸馈水溶液，B为己 膳；流速；〇. 30血/min;柱温；40 °C;进样量；5yL;梯度洗脱程序；0-7min，5%B-60%B; 7-7. 1min,60%B-95%B；7.1-10min,95%B-95%B； 10-10.1min,95%B-5%B〇
[0011] 所述质谱仪的质谱条件为；仪器；赛默飞Q-Exactive高分辨质谱；离子源：电喷 雾离子源（ESI);扫描模式：正离子全扫模式（Full-MS);銷气压力；35arb;辅助气压力；10 arb;毛细管电压；3. 80kv;毛细管温度；350°C;探针温度；30(TC;分辨率；70, 000 ;扫描范 围；50-200m/z。
[0012] 本发明的有益效果： 1.建立了一种利用高效液相色谱-质谱联用的技术，分析白酒中9种化嗦类物质的方 法，该方法具有前处理简便、分析时间短、样品无损失、检测限低、回收率高、稳定性好等特 点，能最大限度的反映样品中化嗦类物质的真实含量，可w快速、简便、准确的测定各种香 型白酒中化嗦类物质。
[0013] 2.本发明使得9种化嗦类物质在8min内实现分离，在0.93~513yg/L的检测 范围内具有良好的线性关系，其相关系数R2均大于0. 999,最低定量限均小于1. 0yg/l， 最低检测限均低于0. 1yg/L，回收率为96. 6 8%。
[0014] 3. 9种化嗦类物质混标当天和隔天的重复进样峰面积和含量的RSD均小于3%，保 留时间的标准偏差小于等于0.009min(0.54s)，说明该方法具有良好的稳定性。
【附图说明】
[0015] 图1为9种化嗦类物质标准曲线图。
[0016] 图2为9种化嗦类物质标准样液相色谱图。
[0017] 图3为芝麻香型原酒样品液相色谱图。
[0018] 图4为酱香型白酒样品液相色谱图。
[0019] 图5为2-MP的质谱图。
[0020] 图6为2, 6-DMP的质谱图。
[00川 图7为2-EP的质谱图。
[0022] 图8为2, 3, 5-TMP的质谱图。
[002引 图9为2-E-6-MP的质谱图。
[0024]图10为TTMP的质谱图。
[00巧]图11为5-E-2, 3-DMP的质谱图。
[0026] 图12为2, 3-DEP的质谱图。
[0027]图 13 为 2, 3-DE-5-MP的质谱图。
[002引 其中：1=2-MP、2=2, 6-DMP、3 = 2-EP、4 = 2, 3,5-TMP、5 = 2-E-6-MP、6=TTMP、 7=5-E-2