一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及一种基于快速热解-气相色谱-质谱联用技术（PY-GC/MS法）快速检 测厚朴酚与和厚朴酚含量的方法。
【背景技术】
[0002] 1930年日本学者杉井首先从厚朴树的树皮中分离得到了厚朴酚。1973年日本学 者藤田分离得到厚朴酚与其异构体和厚朴酚。厚朴酚与和厚朴酚是我国传统中药厚朴的两 个主要活性成分，具有抗茵、抗炎、抗肿瘤、肌肉松弛、降胆周醇和抗衰老等多种药理作用。 随着研究的深入，也发现了两者的不同的生理活性，如在抗氧化作用方面，厚朴酚比和厚朴 酚弱；在肌肉松弛方面，和厚朴酚抑制肌肉收缩作用比厚朴酚缓慢；在防止谷氨酸，天门冬 氨酸诱导的线粒体功能障碍方面，和厚朴酚比厚朴酚更有效。因此，针对中药厚朴建立厚朴 酚与和厚朴酚的含量分析方法对中药的现代化应用有着积极的意义。
[0003] 针对厚朴酚与和厚朴酚的分离和分析方法，国内外也做了很多研究，发明和改进 了很多方法，如分子识别法、机械化学法、逆流色谱分离法等。在众多的方法中高效液相色 谱法是主要和重要的分析方法，该方法配合PDA检测器可以比较灵敏和快速的给出厚朴酚 与和厚朴酚的相对含量；受分析仪器的限制，该方法需要对样品进行较为复杂的前处理， 通过萃取等方法将厚朴酚与和厚朴酚从药材或其复方制剂中分离，随后采用HPLC/UPLC/ SFCLC等液相色谱方法分析。该分析方法的样品处理过程复杂、总体分析时间长。
[0004] 快速热解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)是一种高效的检测易挥发性成 分的技术，近年来发展迅速。低温下的热解过程是一种非常有效的热分离手段，通过控制 热解的温度和时间可以实现低沸点的复杂混合物的初步的气-液或气-固相分离；为气相 色谱提供一种在线的和实时的样品前处理和初步分离能力。分析检测过程中的热解时间、 温度、升温速率、载气流速、分流比、离子化温度等对分析结果的影响是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技术的特点，目前亟需提出一种针对厚朴酚与和厚朴酚的快速、微量检测方法。
【发明内容】
[0005] 本发明的目的在于提供一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，并基于此，初步 判断厚朴等中药材及其制剂质量的高低。
[0006] 为达到上述目的，本发明采用了以下技术方案：
[0007] 1)准确称取厚朴或其复方制剂0. 01~5. OOmg得样品，将样品加入热解杯中；
[0008] 2)采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定；
[0009] 3)经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中厚朴酚与和 厚朴酚的色谱峰，并获得样品中厚朴酚与和厚朴酚的相对含量。
[0010] 所述样品为块状或粉末状固体。
[0011] 所述热解的条件为：热解温度为180~300°C，热解时间为0. 1~2min。
[0012] 所述气相色谱的工作条件为：载气为流速0. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~ 500 :1，升温程序为：初始温度为40~70°C，并保持O~3min，然后以彡20°C /min升至 300。。。
[0013] 所述质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50~85eV，离子源 温度为215~290°C，单四级杆温度为145~185°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电 压为1075~2980V，溶剂延迟为0~6min。
[0014] 所述相对含量采用面积归一化方法进行计算。
[0015] 所述厚朴酚与和厚朴酚的色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。
[0016] 本发明的有益效果体现在：
[0017] 1)分析效率高。现有方法是将厚朴或其制剂通过萃取方法初步分离得到厚朴酚 与和厚朴酚溶液，过滤处理后，利用液相色谱分析，或薄层层析-光谱联用技术（TLC-SP)等 检测其有效成分；该方法的一般分析时间为8~12小时。本发明中通过热分离方法直接对 厚朴或其制剂的低沸点物质进行初步分离，随后采用气相色谱进一步分离厚朴酚与和厚朴 酚，大大节省了分析时间，常规分析时间为〇. 1~〇. 3小时，提高了分析效率。
[0018] 2)所需样品量少，灵敏度好。HPLC检测方法受到仪器的限制，一般需要先分离得 到粗品溶液，因此需要的样品量较大，通常是几克到几十克不等；本发明方法的分析所用样 品量一般为〇. 01~lmg，极大的提高了分析灵敏度。
[0019] 3)本发明优化了热解、色谱、质谱等检测条件，可以快速定性所需的色谱峰，实现 了快速和准确检测。
【具体实施方式】
[0020] 下面结合实施例对本发明作进一步说明。
[0021] 本发明针对厚朴酚与和厚朴酚熔沸点相对较低且易挥发的特点，采用快速热 解-气相色谱/质谱联用技术（PY-GC/MS)，充分将热分离和色谱分离相结合，实现厚朴酚与 和厚朴酚的快速分离，随后采用质谱定性和定量检测，达到快速、微量检测的目的。
[0022] 实施例
[0023] 一种基于PY-GC/MS检测厚朴酚与和厚朴酚的方法，以中药材厚朴为例，但本发明 的保护范围不局限于该实施例，具体步骤如下：
[0024] 一、样品准备
[0025] 将取得的厚朴（西安天本生物工程有限公司，西安）准确称取1.0 Omg (±0. 02mg) 放入50 μ L的热解小杯中；
[0026] 二、热解：
[0027] 热裂解炉采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0028] ①热解温度：210 °C ;
[0029] ②热解时间：0· 25min。
[0030] 三、分离、检测
[0031] 色谱：
[0032] 气相色谱采用安捷伦7890A :
[0033] ①分析柱是HP-5MS弹性石英毛细管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0034] ②载气：高纯氦气，流速为1.0 mL/min ;
[0035] ③进样方式为分流进样，分流比为120 :1 ;
[0036] ④进样口温度为280 °C，传输线温度为290 °C ;
[0037] ⑤程序升温：初始温度为60°C，然后以20°C /min升至300°C。
[0038] 质谱（采用安捷伦5975C):
[0039] ①EI源，正离子检测，电子能量为70eV ;
[0040] ②离子源温度为290°C，单四级杆温度为150°C ;
[0041] ③扫描方式为全扫描方式；
[0042] ④电子倍增器电压为2320V，溶剂延迟为3. 75min。
[0043] 四、数据分析及处理
[0044] 色谱图的保留时间和积分面积由工作站自动完成，利用NIST08谱库定性色谱峰。 各挥发性成分的相对含量通过面积归一化法得到。
[0045] 本样品厚朴热解组分中可辨认的峰为29个，成分及其保留时间列于表1。保留时 间及峰面积用安捷伦Chemstation计算，相对含量用面积归一化的方法计算。
[0046] 表1.厚朴中挥发性成分的组成和含量U1= 13. 741厚朴酚，t ^ 14. 861和厚朴 酚）
[0047]
[0048] υ?Ν 丄 丄 OOdcu λ j ^ o
[0049] CN 105136937 A I兄明书 5/5 页
[0050] 五、精密度、重现性及稳定性实验
[0051] 1.精密度实验：以取自同一厚朴的样品6份，按照上述方法连续进样6次，对相对 峰面积大于0. 5%的29个色谱峰进行分析，其相对保留时间和相对峰面积的RSD (相对标准 偏差）分别在1. 91~4. 15%和2. 33~4. 98%之间，说明本发明方法精密度良好。
[0052] 2.重现性实验：取同一批次厚朴的样品6份，按照上述方法连续进样6次。结果 29个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD分别在1. 76~5. 47%和1. 64~4. 45% 之间，说明本发明方法重现性良好。
[0053] 3.稳定性实验：取制备好的样品1份，分别在0、2、4、8、12、24h进样测定，结果29 个色谱峰的相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于4. 26%，说明本发明方法在24h内测 定是稳定的。
[0054] 中药材因产地、季节、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有细微的不同，继而其 复方制剂中的含量也有所不同。因此，需要的热分离、色谱分离和分析条件均不相同，据此 得出本发明中的条件范围。
[0055] 本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别 适用于微量样品检测（样品量可低至10 μg)，并可用于对不同厚朴或其制剂样品间的质量 差别进行定量的比较，应用性广，为该类中药材的质量标准和现代化应用提供了一条参考 的思路和方法。
【主权项】
1. 一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：包括以下步骤： 1) 准确称取厚朴或其复方制剂0.0 l~5. OOmg得样品，将样品加入热解杯中； 2) 采用快速热解-气相色谱-质谱联用仪对加入热解杯中的样品进行测定； 3) 经过步骤2)后，根据测定的原始色谱数据及质谱数据，定性样品中厚朴酚与和厚朴 酚的色谱峰，并获得样品中厚朴酚与和厚朴酚的相对含量。2. 根据权利要求1所述一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：所述样 品为块状或粉末状固体。3. 根据权利要求1所述一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：所述热 解的条件为：热解温度为180~300°C，热解时间为0. 1~2min。4. 根据权利要求1所述一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：所述气 相色谱的工作条件为：载气为流速0. 1~4. OmL/min的氦气，分流比为0~500 :1，升温程 序为：初始温度为40~70°C，并保持0~3min，然后以彡20°C /min升至300°C。5. 根据权利要求1所述一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：所述 质谱的工作条件为：采用EI源、正离子检测，电子能量为50~85eV，离子源温度为215~ 290°C，单四级杆温度为145~185°C，扫描方式为全扫描方式，电子倍增器电压为1075~ 2980V，溶剂延迟为0~6min。6. 根据权利要求1所述一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：所述相 对含量采用面积归一化方法进行计算。7. 根据权利要求1所述一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法，其特征在于：所述厚 朴酚与和厚朴酚的色谱峰的定性采用NIST08软件自动匹配计算。
【专利摘要】本发明提供一种厚朴酚与和厚朴酚的快速检测方法：1)样品的准备；2)PY-GC/MS检测；3)数据分析及定性和定量分析。本发明选择PY-GC/MS技术对厚朴酚与和厚朴酚含量进行检测，是针对厚朴等以厚朴酚与和厚朴酚为主要活性成分的中药材，因产地、季节、炮制等不同而品质不同的问题，提供一种厚朴酚与和厚朴酚快速、微量的检测方法，进而初步判断此类中药材的质量，本发明具有操作简单，检测限低，实验重现性好，实验数据直观可靠等特点，特别适用于微量样品检测，可用于对不同产地、品种、批次的厚朴等样品间的质量差别进行初步的比较，应用性广。
【IPC分类】G01N25/00, G01N30/02
【公开号】CN105136937
【申请号】CN201510598977
【发明人】陈福欣, 龚频, 周安宁, 侯春友
【申请人】西安科技大学
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月18日