,分离得到N-GS ；
(2)氮掺杂石墨烯@羟丙基壳聚糖N-GS0HPCS分散液的制备
将5 mg N-GS与1 mL、5 mg/mL羟丙基壳聚糖溶液进行混合，超声3 h，得到N-GS0HPCS。
[0019]实施例6氮掺杂石墨烯@羟丙基壳聚糖N-GS0HPCS分散液的制备
(1)氮掺杂石墨烯N-GS的制备
将0.5 mg氧化石墨烯分散于5 mL的N，N-二甲基甲酰胺中，超声30 min后，将氧化石墨烯的N，N- 二甲基甲酰胺分散液于153°C下加热5 h，将所得产品在10000 r/min离心10min,分离得到N-GS ；
(2)氮掺杂石墨烯@羟丙基壳聚糖N-GS0HPCS分散液的制备
将10 mg N-GS与1 mL、10 mg/mL羟丙基壳聚糖溶液进行混合，超声10 h，得到N-GS0HPCS。
[0020]实施例7抗体孵化物Ab-AgOSrFe 12019的制备
(1)Ag@SrFe12019的合成
将0.1 g SrFe12019加入到8 mL无水乙醇中，加入0.1 mL 3-氨丙基三乙氧基娃烧，50°C回流2 h，离心分离，真空干燥，制得氨基化SrFe12019;将1 mg氨基化的SrFe 12019加入到50mL质量分数为1 %的六8纳米溶胶中，振荡30 h，在7500 r/min下离心10 min，将所得固体重新分散到1 mL超纯水中，制得Ag@SrFe12019分散液；
(2)抗体孵化物Ab-Ag@SrFe12019的制备
将1 mg Ag@SrFe12019加入到1 mL、10 Kg/mL的乳腺癌易感基因抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡20 h，制得Ab-Ag@SrFe12019抗体孵化物溶液。
[0021 ] 实施例8抗体孵化物Ab-AgOSrFe 12019的制备
(1)Ag@SrFe12019的合成
将0.1 g SrFe12019加入到8 mL无水乙醇中，加入2 mL 3-氨丙基三乙氧基娃烧，55°C回流2 h，离心分离，真空干燥，制得氨基化SrFe12019;将1 mg氨基化的SrFe 12019加入到50mL质量分数为1 %的六8纳米溶胶中，振荡30 h，在7500 r/min下离心10 min，将所得固体重新分散到1 mL超纯水中，制得Ag@SrFe12019分散液；
(2)抗体孵化物Ab-Ag@SrFe12019的制备
将6 mg Ag@SrFe12019加入到1 mL、50 Pg/mL的乳腺癌易感基因抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡20 h，制得Ab-Ag@SrFe12019抗体孵化物溶液。
[0022]实施例9抗体孵化物Ab-Ag@SrFe 12019的制备 (1) Ag@SrFe12019的合成
将0.1 g SrFe12019加入到8 mL无水乙醇中，加入3 mL 3-氨丙基三乙氧基娃烧，85°C回流2 h，离心分离，真空干燥，制得氨基化SrFe12019;将1 mg氨基化的SrFe 12019加入到50mL质量分数为1 %的六8纳米溶胶中，振荡30 h，在7500 r/min下离心10 min，将所得固体重新分散到1 mL超纯水中，制得Ag@SrFe12019分散液；
(2)抗体孵化物Ab-Ag@SrFe12019的制备
将10 mg Ag@SrFe12019加入到1 mL、500 Pg/mL的乳腺癌易感基因抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡20 h，制得Ab-Ag@SrFe12019抗体孵化物溶液。
[0023]实施例10乳腺癌易感基因的检测
(1)使用电化学工作站进行测试，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL、10 mmoL/L、pH 7.00的PBS缓冲溶液中进行测试；
(2)用时间-电流法对乳腺癌易感基因抗原标准溶液进行检测，输入电压为-0.6 V，运行时间50 s，取样间隔0.1 s ;
(3)当背景电流趋于稳定后，每隔50s向10 mL、10 mmoL/L的PBS中注入10 yL、5mol/L的双氧水溶液，然后记录电流变化，绘制工作曲线。
[0024]实施例11乳腺癌易感基因的检测
(1)使用电化学工作站进行测试，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL、40 mmoL/L、pH 7.20的PBS缓冲溶液中进行测试；
(2)用时间-电流法对乳腺癌易感基因抗原标准溶液进行检测，输入电压为-0.2 V，运行时间500 s，取样间隔0.4 s ;
(3)当背景电流趋于稳定后，每隔50s向10 mL、50 mmoL/L的PBS中注入10 μ LU0mol/L的双氧水溶液，然后记录电流变化，绘制工作曲线。
[0025]实施例12乳腺癌易感基因的检测
(1)使用电化学工作站进行测试，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL、200 mmoL/L、pH 7.40的PBS缓冲溶液中进行测试；
(2)用时间-电流法对乳腺癌易感基因抗原标准溶液进行检测，输入电压为0.2 V，运行时间5000 s，取样间隔0.6 s ;
(3)当背景电流趋于稳定后，每隔50s向10 mL、200 mmoL/L的PBS中注入10 yL、20mol/L的双氧水溶液，然后记录电流变化，绘制工作曲线。
【主权项】
1.一种基于片状锶铁氧体双重放大的乳腺癌易感基因免疫传感器的制备，其特征在于，包括以下步骤: (1)将直径为4 mm的玻碳电极用A1203抛光粉打磨，超纯水清洗干净，将6 μ?、0.1 ~ 3mg/mL氮掺杂石墨烯@羟丙基壳聚糖N-GSOHPCS分散液滴加在电极表面上，室温下晾干成膜； (2 )滴加6 μ?的抗体孵化物Ab-Ag@SrFe12019溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干； (3)滴加6PL、质量分数为0.5 ~ 3.5溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干； (4)滴加6μ?、0.001-35 ng/mL的不同浓度的乳腺癌易感基因抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干； (5 )滴加6 μ?抗体孵化物Ab-Ag@SrFe12019溶液于电极表面，超纯水冲洗，4°C冰箱中晾干。2.如权利要求1所述的一种基于片状锶铁氧体双重放大的乳腺癌易感基因免疫传感器的制备方法，所述的氮掺杂石墨烯@羟丙基壳聚糖N-GSOHPCS分散液，其特征在于，制备步骤如下: (1)氮掺杂石墨烯N-GS的制备 将0.5 mg氧化石墨稀分散于1 ~ 5 mL的N, N-二甲基甲酰胺中，超声30 min后，将氧化石墨烯的N，N- 二甲基甲酰胺分散液于153°C下加热0.5 ~ 5 h，将所得产品在7500 ~10000 r/min 离心 10 min，分离得到 N-GS ； (2)氮掺杂石墨烯@羟丙基壳聚糖N-GSOHPCS分散液的制备 将1 ~ 10 mg N-GS与1 mL、0.1-10 mg/mL轻丙基壳聚糖溶液进行混合，超声1 ~ 10h，得到 N-GSOHPCS。3.如权利要求1所述的一种基于片状锶铁氧体双重放大的乳腺癌易感基因免疫传感器的制备方法，所述的抗体孵化物Ab_Ag@SrFe12019，其特征在于，制备步骤如下:(1)Ag@SrFe12019的合成 将0.1 g SrFe12019加入到8 mL无水乙醇中，加入0.1 ~ 3 mL 3-氨丙基三乙氧基娃烧，50 ~ 85°C回流2 h，离心分离，真空干燥，制得氨基化SrFe12019;将1 mg氨基化的SrFe 12019加入到50 mL质量分数为1 %的Ag纳米溶胶中，振荡30 h，在7500 r/min下离心10 min,将所得固体重新分散到1 mL超纯水中，制得Ag@SrFe12019分散液； (2)抗体孵化物Ab-Ag@SrFe12019的制备 将1 ~ 10 mg Ag@SrFe12019加入到1 mL、10 ~ 500 Kg/mL的乳腺癌易感基因抗体Ab溶液中，充分混匀，震荡20 h，制得Ab-Ag@SrFe12019抗体孵化物溶液。4.如权利要求1所述的一种基于片状锶铁氧体双重放大的乳腺癌易感基因免疫传感器的制备方法，用于乳腺癌易感基因的检测，检测步骤如下: (1)使用电化学工作站进行测试，参比电极为饱和甘汞电极，对电极为铂电极，所制备的免疫传感器为工作电极，在10 mL、10 ~ 200 mmoL/L、pH 7.00 ~7.40的PBS缓冲溶液中进行测试； (2)用时间-电流法对乳腺癌易感基因抗原标准溶液进行检测，输入电压为-0.6~ 0.2V，运行时间50 ~ 5000 S，取样间隔0.1 ~ 0.6 S ； (3)当背景电流趋于稳定后，每隔50 s向10 mL、10 ~ 200 mmoL/L的PBS中注入10yL、5 ~ 20 mol/L的双氧水溶液，然后记录电流变化，绘制工作曲线。
【专利摘要】本发明涉及一种片状基于锶铁氧体双重放大的乳腺癌易感基因免疫传感器的制备方法，属于新型功能材料、生物传感检测技术领域。基于片状锶铁氧体大的有效比表面积，优良的催化活性等特点，显著提高了免疫传感器的灵敏度和稳定性，对乳腺癌的早期诊断具有重要的意义。
【IPC分类】G01N33/574, G01N33/532
【公开号】CN105301242
【申请号】CN201510794397
【发明人】任祥, 魏琴, 吴丹, 马洪敏, 庞雪辉, 闫涛, 张勇
【申请人】济南大学
【公开日】2016年2月3日
【申请日】2015年11月18日