离子和子离子按照每种化合物的质谱图和结 构特性选取，并且在实际样品分析中基质干扰较少。确定各种物质的分子离子，然后分别以 各种化合物的分子离子为母离子，对其子离子进行全扫描选取丰度较强、干扰较小的两对 子离子为定性离子，毒黄素二级质谱图如图2所示，最终确定的两对离子的选择离子流图 如图4所示。最后以多反应监测（MRM)正离子模式优化各种质谱参数。
[0046] LC-MS/MS 检测条件：
[0047] 液相条件 Phenomenex Gemini C18 色谱柱（3. OmmX 150mm，5 μ m)，柱温 30°C;进样 量20yL ;流动相A为水（含有0· 1%甲酸，5mmol/L甲酸铵），B为95%乙腈（含有0· 1% 甲酸，5mmol/L甲酸铵）；梯度洗脱条件见表1 :
[0048] 表1梯度洗脱条件
[0051] 质谱条件离子化方式为电喷雾离子化负模式（ESI-);多反应监测模式（MRM);碰 撞气压力（CAD) :6 ;气帘气压力（CUR) :10 ;电喷雾电压（IS) :-4500V ;离子源温度（TEM): 600。。。
[0052] 化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数如表2所示。
[0053] 表2化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数表
[0055] 实施例4回收率实验
[0056] (1)样品添加：
[0057] 取空白酵米面样品进行三个水平的添加，毒黄素的添加水平为0. 2mg/kg、0. 5mg/ kg、1.0 mg/kg，每个水平做6个平行。
[0058] (2)样品前处理
[0059] 准确称取已经添加毒素的酵米面1.0 g，用5mL超纯水溶液提取毒素，200rpm摇床 震荡30min，20°C以下8000rpm离心10min，取上清液，以2mol/L甲酸调节上清液pH值至 6~7 ;用5mL超纯水重复提取一次，合并两次上清液，用超纯水定容至10mL。此时得到较 为纯净的粗提液。
[0060] (3)富集和净化
[0061] 首先以ImL甲醇和ImL超纯水活化离子交换柱，活化过程流速控制在1-2滴/秒， 取2mL粗提液注入离子交换柱进行净化富集，流速控制在1滴/秒，接着用ImL超纯水淋 洗离子交换柱，以去除杂质，最后以1.0 mL甲醇溶液分两次洗脱毒黄素，氮气吹至近干，以 50%乙腈水溶液定容至0.411^，待液相色谱-串联质谱仏(：-15/^5)检测；
[0062] (4) LC-MS/MS 检测
[0063] 液相条件 Phenomenex Gemini C18 色谱柱（3. OmmX 150mm，5 μ m)，柱温 30°C;进样 量20yL ;流动相A为水（含有0· 1%甲酸，5mmol/L甲酸铵），B为95%乙腈（含有0· 1% 甲酸，5mmol/L甲酸铵）；梯度洗脱条件见表1 :
[0064] 表1梯度洗脱条件
[0066] 质谱条件离子化方式为电喷雾离子化负模式（ESI-);多反应监测模式（MRM);碰 撞气压力（CAD) :6 ;气帘气压力（CUR) :10 ;电喷雾电压（IS) :-4500V ;离子源温度（TEM): 600 cC ο
[0067] 化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数如表2所示。
[0068] 表2化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数表
[0070] *为定量离子
[0071] 实验结果显示，本实验方法的回收率为92. 0%~94. 5%，变异系数为1. 2%~ 6. 3%〇
[0072] 实施例5
[0073] 在市场随机购买2份酵米面样品。利用本方法对2种产品进行毒黄素的检测。
[0074] (1)样品前处理
[0075] 准确称取酵米面I. 0g，用5mL超纯水溶液提取毒素，200rpm摇床震荡30min，20°C 以下8000rpm离心10min，取上清液，以2mol/L甲酸调节上清液pH值至6~7 ;用5mL超纯 水重复提取一次，合并两次上清液，用超纯水定容至10mL。
[0076] 取空白酵米面进行添加回收实验，毒黄素添加水平为0. 5mg/kg，前处理方法与样 品方法相同。
[0077] (2)富集和净化
[0078] 首先以ImL甲醇和ImL超纯水活化离子交换柱，活化过程流速控制在1-2滴/秒， 取2mL粗提液注入离子交换柱进行净化富集，流速控制在1滴/秒，接着用ImL超纯水淋 洗离子交换柱，以去除杂质，最后以1.0 mL甲醇溶液分两次洗脱毒黄素，氮气吹至近干，以 50%乙腈水溶液定容至0.411^，待液相色谱-串联质谱仏(：-15/^5)检测；
[0079] (3) LC-MS/MS 检测
[0080] 液相条件 Phenomenex Gemini C18 色谱柱（3. OmmX 150mm，5 μ m)，柱温 30°C;进样 量20yL ;流动相A为水（含有0· 1%甲酸，5mmol/L甲酸铵），B为95%乙腈（含有0· 1% 甲酸，5mmol/L甲酸铵）；梯度洗脱条件见表1 :
[0081] 表1梯度洗脱条件
[0083] 质谱条件离子化方式为电喷雾离子化负模式（ESI-);多反应监测模式（MRM);碰 撞气压力（CAD) :6 ;气帘气压力（CUR) :10 ;电喷雾电压（IS) :-4500V ;离子源温度（TEM): 600。。。
[0084] 化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数如表2所示。
[0085] 表2化合物的多反应监测离子对及质谱相关参数表
[0087] *为定量离子
[0088] (4)检测结果
[0089] 方法的回收率为92. 5%。
[0090] 样品的检测结果通过回收率校正后，获得最终的检测结果：酵米面1号样品中毒 黄素含量为〇. 32mg/kg，酵米面2号样品中毒黄素含量为未检出。
【主权项】
1. 一种毒黄素的液相色谱-串联质谱检测方法，其特征在于，包括下列步骤： (1) 样品前处理 准确称取经过粉碎、均质过的待检测样品1.Og，用超纯水溶液提取毒素，200rpm摇 床震荡30min，20°CW下8000巧m离屯、lOmin，取上清液，W2mol/L甲酸调节上清液抑值至 6~7 ;用5mL超纯水重复提取一次，合并两次上清液，用超纯水定容至lOmL;得到纯净的粗 提液； (2) 富集和净化 富集净化使用固相萃取柱，固相萃取柱为弱阳离子交换柱，粒径33μm，孔径85μm，表 面积800m2/g，离子容量1.Omeq/g;具体步骤是： 首先WImL甲醇和ImL超纯水活化离子交换柱，活化过程流速控制在1-2滴/秒，取 2mL粗提液注入离子交换柱进行净化富集，流速控制在1滴/秒，接着用ImL超纯水淋洗离 子交换柱，W去除杂质，最后W1.OmL甲醇溶液分两次洗脱毒黄素，氮气吹至近干，W50% 乙腊水溶液（v/v)定容至0. 4mU待液相色谱-串联质谱化C-MS/M巧检测； (3) LC-MS/MS检测 液相条件化enomenexGeminiC18反相色谱柱（3. 0mmX150mm，5μm)，柱溫30°C;进样 量20μL;流动相A为水（含有0.1%甲酸（v/v)，5mmol/L甲酸锭），B为95%乙腊（含有 0. 1%甲酸(v/v)，5mmol/L甲酸锭）；梯度洗脱；梯度洗脱条件如下：质谱条件离子化方式为电喷雾离子化负模式巧SI-);多反应监测模式（MRM);碰撞气 压力（CAD) :6 ;气帘气压力（CUR) :10 ;电喷雾电压（I巧：-4500V;离子源溫度灯EM) :600°C; 毒黄素的多反应监测离子对及质谱相关参数如下表：*为定量离子。
【专利摘要】本发明公开了一种毒黄素的液相色谱-串联质谱检测方法，包括下列步骤：(1)样品前处理；(2)富集和净化；（3）LC-MS/MS检测。本发明的方法操作简便、定性定量能力较强，可作为检测酵米面质量和评估食品安全风险的可靠方法。
【IPC分类】G01N30/88
【公开号】CN105319313
【申请号】CN201510903474
【发明人】吴振兴, 赵华梅, 吴兴海, 静平, 曹文卿, 许艳丽
【申请人】山东出入境检验检疫局检验检疫技术中心
【公开日】2016年2月10日
【申请日】2015年12月9日