尿分析装置及尿或体液中异型细胞的分析方法_2

文档序号:9630343阅读:来源:国知局
槽2u和反应槽2b分配尿样本定量后的等分物。
[0031]试样制备部件2在反应槽2b,将分配的等分物与稀释液19b和染色液18b混合。以此用染色液18b中含有的色素对尿样本中的有形成分染色。在此反应槽2b制备的混合物用于分析尿中的白细胞、上皮细胞、真菌、细菌和异型细胞等有核细胞。以下称在反应槽2b制备的混合物为第一测定试样。
[0032]试样制备部件2在反应槽2u,将分配的等分物与稀释液19u和染色液18u混合。以此用染色液18u中含有的色素对尿样本中的有形成分染色。在此反应槽2u制备的混合物用于分析尿中的红细胞、管型等无核粒子。以下称在反应槽2u制备的混合物为第二测定试样。
[0033]光学检测部件5包括流动室51。反应槽2u、2b通过管与流动室51相通,在反应槽2u、2b制备的测定试样能够向流动室51供应。反应槽2u的第二测定试样先供应到光学检测部件5,然后,反应槽2b的第一测定试样再供应到光学检测部件5。流动室51使供应的第一和第二测定试样形成被鞘液包被的细流。激光照射到流动室51中的第一和第二测定试样流。通过图1所示微机11的控制,使无图示的栗和电磁阀等运作,以此自动进行上述作业。
[0034]染色液18b含有染色核酸的色素。具体而言,染色液18b包括用于特异性染色核酸的嵌入剂(intercalator)或结合于小沟(minor groove)的焚光色素。嵌入剂(intercalator )如有花青类(cyanine)、卩丫啶(acri dine)类和菲啶盐(phenanthridium)类的众所周知的色素。比如,花青类(cyanine)的嵌入剂有SYBR Green 1、噻卩坐橙(Thiazoleorange) 0 口丫啶(acridine)类嵌入剂(intercalator)有B丫啶澄(Acridin orange)0 菲啶盐(phenanthridium)类嵌入剂(intercalator)有鹏化丙啶(propidium 1dide)、溴化乙锭(Ethidium bromide)。结合于小沟的色素如有DAP1、赫斯特(Hoechst) —类众所周知的色素。比如,结合于小沟的赫斯特(Hoechst)色素可列举出Hoechst33342、Hoechst 33258。在本实施方式中,花青类(cyanine)嵌入剂(intercalator)较为理想,特别是SYBR Green1、噻卩坐澄(Thiazole orange)更好。
[0035]稀释液19b含有表面活性剂。具体而言,稀释液19b含有阳离子型表面活性剂,该阳离子型表面活性剂用于破坏细胞膜使染色液18b穿透细胞膜,且使红细胞发生溶血,收缩红细胞碎片等杂质。表面活性剂的种类不限于阳离子型表面活性剂,也可以是非离子型表面活性剂。混合尿样本、染色液18b和稀释液1%,使有核酸的尿中有形成分染色到与其结构和特性相应的程度。
[0036]稀释液19b含有表面活性剂,以此能够使第二测定试样中所含有的红细胞发生溶血,能够精确测定白细胞等有核酸的细胞。使用含有表面活性剂的稀释液1%破坏细胞膜,能够更高效地对核酸进行染色。这也将有益于提高有核酸细胞的测定精度。
[0037]染色液18u含有染色无核酸有形成分的荧光色素。
[0038]稀释液19u是以缓冲剂为主要成分的试剂。稀释液19u含有渗透压补偿剂,以便能够在不让红细胞溶血的情况下获得稳定的荧光信号。
[0039]下面参照图3就光学检测部件5的结构进行说明。光学检测部件5包括:流动室51、聚光透镜52、半导体激光光源53、集光透镜54、第一散射光受光部件55、集光透镜56、分色镜57、第二散射光受光部件58和荧光受光部件59。
[0040]聚光透镜52将光源53照射的激光聚光,在流动室51内的试样流上形成扁平的射束点。射束点在试样流流动方向的直径为3~8 μ m。要稳定地将激光照射到细胞核,最好射束点在流动方向的直径为3.5-7.5 μ m,4~7 μ m更好。本实施方式中射束点在流动方向的直径为4~7μ m。
[0041]集光透镜54将测定试样中的有形成分发出的前向散射光聚集于第一散射光受光部件55。集光透镜56将有形成分发出的侧向散射光和焚光聚集于分色镜57。分色镜57将侧向散射光反射到作为第二散射光受光部件58的光电倍增管,让荧光透过并将其引导至作为荧光受光部件59的光电倍增管。
[0042]第一散射光受光部件55、第二散射光受光部件58和荧光受光部件59将光信号转换成电信号,分别输出前向散射光信号(以下称“FSC”)、侧向散射光信号(以下称“ SSC”)和荧光信号(以下称“FL”)。FSC是表示前向散射光强度的时间变化的信号,SSC是表示侧向散射光强度的时间变化的信号,FL是表示荧光强度的时间变化的信号。荧光受光部件59通过切换驱动电压就能以低灵敏度和高灵敏度两者输出荧光信号。灵敏度的切换由图1所示微机11进行。
[0043]再次参照图1就尿样本分析装置100的结构进行说明。测定单元10具有:放大光学检测部件5的输出信号的放大电路50、对放大电路50的输出信号进行滤波处理的滤波电路6、将滤波电路6的输出信号(模拟信号)转换为数字信号的A/D转换器7、对数字信号进行一定波形处理的数字信号处理电路8、连接在数字信号处理电路8上的存储器9、微机11及LAN适配器12。
[0044]光学检测部件5、放大电路50、滤波电路6、A/D转换器7、数字信号处理电路8和存储器9构成了测定测定试样并生成测定数据的测定部件10a。
[0045]光学检测部件5用前置放大器放大FSC、SSC、FL各信号。放大的各信号输入到放大电路50。从光学检测部件5输出侧延伸的FL的信号频道在前置放大器和放大电路50之间一分为二。其中一个信号频道连接放大电路50的高放大率放大器(High amplifier,高放大器)。另一个信号频道连接低放大率放大器(L ow amplifier,低放大器)。因此,从一个粒子相应的FL获取以高灵敏度放大的FLH和以低灵敏度放大的FLL。以下称输入高放大器的FL为“FLH”,输入低放大器的FL称为“FLL”。
[0046]放大电路50按照设定的增益放大FSC、SSC、FLH和FLL四种信号。放大电路50能够设定不同数种增益。微机11能够通过设定放大电路50的增益来调节放大电路50的灵敏度。
[0047]信息处理部件13通过LAN适配器12用LAN电缆与测定单元10连接。
[0048]图4为信息处理部件13的结构图。信息处理部件13是个人计算机。信息处理部件13具主机400、输入部件408和显示部件409。主机400具有CPU401、R0M402、RAM403、硬盘404、输入输出接口 405、图像输出接口 406和通信接口 407。
[0049]CPU401执行存储在R0M402的计算机程序和下载到RAM403中的计算机程序。RAM403用于读取存储在R0M402和硬盘404的计算机程序。RAM403还作为执行这些计算机程序时的CPU401的工作空间。
[0050]硬盘404装有计算机程序,该计算机程序用于分析测定单元10传过来的测定数据、输出分析结果。
[0051]输入部件408连接输入输出接口 405。显示部件409连接图像输出接口 406。测定单元10连接通信接口 407,能够与信息处理部件13传输数据。
[0052](尿样本分析装置的作业)
下面就本实施方式涉及的尿样本分析装置的作业进行说明。
[0053]参照图5的流程图,就尿样本分析装置100的尿样本测定处理进行说明。首先,在步骤S101,信息处理部件13的CPU401通过输入部件408接受用户的实施测定的指示。收到实施测定指示后,CPU401在步骤S102向测定单元10发送指示开始测定的指示数据。在步骤S103,测定单元10接收指示数据。微机11在步骤S104实施测定试样制备处理,在步骤S105实施无核成分测定处理,在步骤S106实施有核成分测定处理。
[0054]参照图6说明测定试样制备处理。在测定试样制备处理中,首先,在步骤S201、S202,微机11控制样本分配部件1,让吸管17从试管TB吸移一定量尿样本,并分别向反应槽2u和反应槽2b分装一定量尿样本。
[0055]微机11控制试样制备部件2实施以下步骤S203~S207。在步骤S203和步骤S204,向反应槽2u定量分装一定量稀释液19u和染色液18u。在步骤S205及步骤S206,向反应槽2b定量分装一定量稀释液19b和染色液18b。反应槽2u和反应槽2b分别由无图示加热器加热到一定温度,在加热的状态下在步骤S207用螺旋桨状的搅拌器(无图示)搅拌各槽内的混合物。通过步骤S201~S207的作业,在反应槽2u制备无核成分测定用第二测定试样,在反应槽2b制备有核成分测定用第一测定试样。步骤S207的处理结束后,微机11将处理返回主程序。
[0056]下面就无核成分测定处理进行说明。在无核成分测定处理中,与鞘液一起,第二测定试样从反应槽2u供应到流动室51,在流动室51形成鞘液包被的第二测定试样的试样流。形成的试样流受到光源53的激光光束照射,在流动室51形成射束点。每当粒子通过射束点,就会产生前向散射光、焚光和侧向散射光。前向散射光、焚光和侧向散射光分别被第一散射光受光部件55、荧光受光部件59和第二散射光受光部件58接受并转换为电信号,输出FSC、FLH、FLL和SSC。输出的FSC、FLH、FLL和SSC由放大电路50放大。
[0057]放大电路50所放大的FSC、FLH、FLL及SSC由滤波电路6施以滤波处理后,由A/D转换器7转换为数字信号,由数字信号处理电路8施以信号处理。以此,就通过流动室51的每个粒子提取前向散射光强度(FSCP)、前向散射光脉冲宽度(FSCW)、荧光强度(FLHP)、荧光脉冲宽度(FLLW)、侧向散射光强度(SSCP )等分析用参数。分析用参数作为测定数据存入存储器9,至此无核成分测定处理结束。
[0058]下面参照图7就有核成分测定处理进行说明。在有核成分测定处理中,首先,在步骤S311,微机11以第一设定值设定第一散射光受光部件55、第二散射光受光部件58和荧光受光部件59的
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