15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA;高 效液相检测到峰面积:各丹参酮类化合物面积分别为721-783。
[0054] 本发明涉及一种抑制凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物；由丹 参酮类化合物中的一种、两种、或多种组成；15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮 ΠΑ;浓度范围表示91.61-99.49μΜ。
[0055] 本发明涉及一种促进凝血酶活性的药物组合物，由人参皂苷类化合物中的一种、 两种、或多种组成；人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb;高效液相检测到 峰面积:各皂苷类化合物面积分别为218-284。
[0056] 本发明涉及一种促进凝血酶活性的药物组合物，由人参皂苷类化合物中的一种、 两种、或多种组成；人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb;以浓度范围表示 81.04-105.58μΜ。
[0057] 本发明所记载的调控包括:抑制、或、促进、先抑制后拮抗、先拮抗后抑制等多种方 式。
[0058] 本发明涉及一种调控凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物、人参 皂苷类化合物；
[0059] 由丹参酮类化合物中的一种、两种、或多种组成；15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹 参酮I、丹参酮ΙΙΑ;高效液相检测到峰面积:各丹参酮类化合物面积分别为721-783;
[0060] 由人参皂苷类化合物中的一种、两种、或多种组成;人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人 参皂苷Rd、人参皂苷Rb;高效液相检测到峰面积:各皂苷类化合物面积分别为218-284。
[0061] 本发明涉及一种调控凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物、人参 皂苷类化合物；
[0062] 由丹参酮类化合物中的一种、两种、或多种组成；15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹 参酮I、丹参酮ΠΑ;以浓度范围表示91.61-99.49μΜ。
[0063] 由人参皂苷类化合物中的一种、两种、或多种组成;人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人 参皂苷Rd、人参皂苷Rb;以浓度范围表示81.04-105.58μΜ。
[0064] 本发明涉及一种调控凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物、人参 皂苷类化合物、丹酚酸A;
[0065] 由丹参酮类化合物中的一种、两种、或多种组成；15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹 参酮I、丹参酮IIA;高效液相检测到峰面积:各丹参酮类化合物面积分别为721-783;
[0066]由人参皂苷类化合物中的一种、两种、或多种组成;人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人 参皂苷Rd、人参皂苷Rb;高效液相检测到峰面积:各皂苷类化合物面积分别为218-284。 [0067]丹酚酸A的面积分别为2534。
[0068]本发明涉及一种调控凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物、人参 皂苷类化合物、丹酚酸A;
[0069] 丹参酮类化合物由如下一种、两种、或多种组成；15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹 参酮I、丹参酮ΠΑ;浓度范围表示91.61-99.49μΜ。
[0070] 人参皂苷类化合物由如下一种、两种、或多种组成;人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人 参皂苷Rd、人参皂苷Rb;以浓度范围表示81.04-105.58μΜ。
[0071] 丹酚酸Α，以浓度表示为110.08μΜ。
[0072] 本发明涉及一种具备凝血酶抑制活性的丹酚酸Α的组合物，其组成是:丹酚酸Α、磷 酸缓冲液。
[0073] 本发明涉及一种具备凝血酶抑制活性的丹酚酸A的组合物，由丹酚酸A、磷酸缓冲 液组成。
[0074]丹酚酸A被溶解于磷酸缓冲液中，磷酸缓冲液的制备方法是:精密称取1.9120g磷 酸二氢钾、13.8920g磷酸氢二钾（三水）及乙二胺四乙酸（EDTA)37.24mg，加入超纯水约 960mL超声促溶，取出，定容至1000mL即得含75mmol/L磷酸根离子、200ymol/L EDTA，pH 7.4 的磷酸盐缓冲液。
[0075] 根据本发明的一个具体实施例，本发明从中药经典名方丹七方(包含丹参和三七） 中发现了具有药用价值的活性成分及多成分组合相互作用关系。该三类成分间组合的多成 分相互作用关系被清楚揭示。
[0076] 结果显示丹参酮类可以抑制凝血酶，人参皂苷类可以稳定促进凝血酶，而酚酸类 几乎对凝血酶活性无影响。
[0077] 其中的人参皂苷类可以拮抗丹参酮类引起凝血酶抑制:PPT型人参皂苷(Rg和Rh) 剂量依赖性的拮抗丹参酮引起的凝血酶抑制;PH)型人参皂苷(Rb和Rd)具有更强的拮抗作 用，可以中和甚至反转丹参酮引起的凝血酶抑制。人参皂苷的拮抗作用为控制丹参酮药效 和降低其副作用提供了一种新的方式，尤其是在多靶点疗法中会扮演重要角色。
[0078] 丹参酮内部成员间为加和作用，其中的三对组合，丹参酮IIA和15，16-二氢丹参 酮，丹参酮ΠΑ和隐丹参酮，15，16-二氢丹参酮和丹参酮，具有较低的IC5Q值和稳定的加和作 用，在联合用药和降低受体耐药性方面具有潜在的应用价值。
【附图说明】
[0079] 图1:丹七方提取物的色谱图（a)和改造后化合物库的色谱图（b)。
[0080] 图2:丹七方中酚酸类、皂苷类、丹参酮类代表性化合物和结构特征。
[0081] 图3:丹七方半制备液相色谱图。
[0082] 图4:丹七方提取物色谱对应的活性分布图(a)和和改造后化合物库色谱对应的活 性分布图(b)。
[0083] 图5:丹参酮类内部三种组合在不同组合比例下的CI值分布。
[0084] 图6:丹酚酸A的活性与其在磷酸缓冲液中放置时间的关系图。
【具体实施方式】
[0085] 实施例1
[0086] 背景:丹七方具有活血化瘀的功效，临床上常用于冠心病、心绞痛及气滞血瘀所致 的胸痹、心悸气短、胸闷气短等的治疗。丹七方由丹参(Radix Salvia miltiorrhiza)和三 七(Radix Panax notoginseng)两味中药组成。因其含有多种成分，作用于多种革El点，潜在 的多成分相互作用非常复杂。现代研究表明，中医中的"瘀"证与血栓症密切相关。血栓形成 是血浆中的凝血酶酶原受到一些血小板和血浆因子激活而生成凝血酶，进而生成纤维蛋白 凝块。凝血酶作为其中的关键靶点发挥了重要的作用。目前针对凝血酶的治疗药物有阿加 曲班、达比加群和美拉加群等。本实施例将围绕凝血酶揭示丹七方中的活性分子和多成分 组合的相互作用。
[0087] 试剂与耗材：乙腈、甲酸(HPLC级，德国Merck公司）；Aglilent Zorbax SB-C18半制 备柱，规格为250 X 9 ·4mm，5μηι(美国Agilent公司）；Aglilent Extend_C18分析柱，规格为 250 X 4.6mm，5μηι(美国Agi 1 ent公司）；凝血酶(沈阳拜英生物技术有限公司）、凝血酶底物S-2238(北京艾德豪克仪器技术有限公司）、DMS0(美国Sigma公司）、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、 乙二胺四乙酸(江苏南京化学试剂有限公司）
[0088] 步骤1:对丹七方的提取物进行色谱分离和化合物结构鉴定，根据结构相似性将化 合物分成不同的化学家族。
[0089] 丹七方提取物的纯水溶液用于高效液相色谱分析和分离条件优化。
[0090] 高效液相色谱分析在Agi lent 1260液相系统偶联6530四极杆-飞行时间串联质谱 系统(美国Agilent公司）中进行。
[0091 ]分离色谱柱分别为AglilentExtend-C18分析柱（250X4·6mm，5μm)和Aglilent 2〇^^158-(：18半制备柱（250\9.4臟，54111)〇
[0092] 其中分析色谱柱用于与质谱串联而进行结构鉴定。
[0093] 半制备色谱柱用于后续的色谱峰收集。
[0094] 分析色谱柱的流动相为0.02%甲酸水溶液和0.02%甲酸乙腈溶液。
[0095] 分析色谱柱的洗脱梯度为：
[0096] Omin, 10% ；
[0097] 9min,21% ；
[0098] 18min,22% ；
[0099] 23min,24% ；
[0100] 33min,27% ；
[0101] 40min,33% ；
[0102] 52min,41% ；
[0103] 64min,70% ；
[0104] 72min,72% ；
[0105] 80min,100%;
[0106] 90min，100%。
[0107] 紫外检测波长 0-56.5min 为 203nm，56.5-90min 为 281nm。
[0108] 分析色谱柱流速0.5mL/mi