n。
[0109] 柱温 25°C。
[0110] 半制备色谱柱的流动相为0.2%甲酸水溶液和乙腈溶液。
[0111] 半制备色谱柱的洗脱梯度为：
[0112] Omin, 10% ；
[0113] 10min,22% ；
[0114] 18min,23% ；
[0115] 23min,24% ；
[0116] 33min,27% ；
[0117] 40min,33% ；
[0118] 52min,41% ；
[0119] 54min,70% ；
[0120] 62min,72% ；
[0121] 70min,100%;
[0122] 77min，100%。
[0123] 紫外检测波长 0-60min 为 203nm，60-77min 为 281nm。
[0124] 半制备色谱柱流速2mL/min。
[0125] 柱温 25°C。
[0126] 质谱检测条件如下：电喷雾正离子模式下采集数据，质量扫描范围为m/z 100~ 1000,毛细管电压3.5kV，雾化气压力35psig，干燥气体积流量10L/min，干燥气温度325°C， Skimmer 65V，二级碰撞能量为20、40、80eV。
[0127] 测定样品前采用混标调谐液校准质量轴。
[0128] 18个色谱峰的确定是与购自中国药品生物制品检定所的标准品进行质谱数据比 对(见表1)，色谱峰所在的位置请见图la。
[0129] 通过分析对比化学结构的相似性，丹七方中的化合物可以归属为3个化学家族，即 酚酸类、皂苷类、丹参酮类(见图2)。
[0130] 每个家族都具有各自特征性的化学基团：
[0131] 酚酸类多是咖啡酸（C9H8〇4)和丹参素(C9H1Q0 5)的聚合物，羧基和酚羟基是其特征 性基团；
[0132] 人参皂苷的疏水性母核由17碳原子围绕成4个环，母核上连有亲水性的糖基；
[0133] 丹参酮的基本结构也是由17碳原子围绕成4个环，不同的是母核上具有众多的共 辄双键和C环上具有醌基。
[0134] 基于化学结构相似性进行分类对于后续的化合物库改造、多成分组合相互作用的 发现必不可少。
[0135] 步骤2 :对色谱图进行分解并逐个收集每个色谱峰的馏分，记录其色谱峰面积。取 丹七方提取物用纯水配成200mg/mL的溶液，进样100微升，半制备色谱见图3。通过保留时间 设置时间窗，对各个峰进行收集，收集程序见表2。
[0136] 步骤3:选择丹酚酸A、人参皂苷Rhl、丹参酮IIA分别作为丹酚酸、人参皂苷、丹参酮 家族的代表化合物，并测试记录其在100μΜ浓度下的色谱峰面积，分别为2302、269、787。每 个化学家族中的其他化合物以重新组合的方式向该标准看齐，从而获得新的天然产物化合 物库。
[0137] 原来药材提取物与改造后的天然化合物库的色谱对比见图1。
[0138] 在原提取物图1的a中，各个成分含量未知且参差不齐，色谱峰响应有高有低。
[0139] 而在改造后的天然化合物库图1的b中，同一家族的色谱峰响应相近，同一化学家 族的化合物面积处于同一数量级（表3):酚酸类面积为2044-2601，皂苷类面积为218-284， 丹参酮类面积为721-783.
[0140] 根据收录在中国药典中的一测多评方法，即对于结构具有高度相似性的化合物群 可以用一个标准品来评定其他多个化合物，新化合物库中的各个化合物的含量接近标准 100μΜ。从而完成了从中药粗提物到适用于筛选的化合物库的改造。
[0141] 步骤4:高通量筛选技术采用多孔道酶标仪对中药提取物进行活性成分扫描。如图 4所示，在原提取物中，色谱峰11显示出较好的活性;而在新的化合物库中，色谱峰11、15、 16、17、18具有明显的活性。通过对比化合物鉴定结果，色谱峰11、15、16、17、18分别为丹酚 酸Α、15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮ΙΙΑ。通过改造化合物库，原提取物中的 微量成分丹参酮家族被筛选出来。为了最终确定筛选结果的准确性，我们从中检所购买了 对应的标准品进行验证。结果如表4所示，15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮 ΙΙΑ具有较强的凝血酶抑制活性，IC5Q分别为92.46、101.59、332.65、39.26μΜ。这结果表明改 造后的天然化合物库对于筛选微量活性成分具有明显优势。丹酚酸Α的活性并不好，在125μ Μ时的活性值仅为-0.82 %。
[0142] 考虑到丹酚酸Α著名的不稳定性，可以推断丹酚酸Α本身可能不具有抑制凝血酶的 活性，而它在缓冲液中的转化产物具有抑制凝血酶的活性。因此，我们将丹酚酸A放置于磷 酸缓冲液中分别放置1、2、3、4小时后进行活性测试，发现其抑制凝血酶的活性呈递增趋势 (图5)，从而证明了丹酚酸A通过转化为其他成分而间接发挥作用。
[0143] 磷酸缓冲液的配制方法：
[0144] 步骤5:上述实验结果表明，丹参酮类成分是丹七方中具有凝血酶抑制活性的化学 家族。因此，围绕该家族展开了家族内和家族间的多成分相互作用联系。在丹参酮内部，考 虑到15，16-二氢丹参酮（92.46以]\〇、隐丹参酮（101.59以]\〇、丹参酮11八(39.26以]\〇的1(： 5()值较 为接近，有潜在的组合应用的价值;而丹参酮I (332.65μΜ)的IC5Q明显高于上述三个化合物， 在本实验中暂不与其他化合物组合应用。应用Combination Index作为指标（当Cl = 1，加和 作用;CI>1，拮抗作用;CI<1，协同作用），我们设计了7种不同组合比例如1:10、1:5、1:2、1 :1、2:1、5:1、10:1用来测试丹参酮IIA和15，16-二氢丹参酮I(表5)，15，16-二氢丹参酮I和 隐丹参酮(表6)，丹参酮IIA和隐丹参酮(表7)的IC 5Q值。这些数值用于计算CI指数，如图所 示，几乎所有组合的CI指数位于0.9-1.1之间，表明这些丹参酮内部为加和作用。
[0145]对于丹参酮类与酚酸类、皂苷类的家族间的相互作用，因为涉及的组别过多，我们 采用是否具有"浓度依赖性的相互作用"作为指标用于判断其作用关系，即用低、中、高三个 浓度的酚酸类或皂苷类化合物对丹参酮抗凝血酶活性的干扰是否具有浓度依赖性作为判 断标准。结果表明，PPT型的人参皂苷可以浓度依赖性的拮抗丹参酮(表8) WPD型的人参皂 苷则具有更强的拮抗作用，当PPD型人参皂苷与丹参酮的比例为1:1时，Rd可以使丹参酮的 抑制率降为0-10% (表9)，几乎抵消了丹参酮对凝血酶的抑制作用；而Rbl则甚至反转了丹 参酮的抑制作用，表现为促进(表9)。酚酸类则没有表现出浓度依赖性的干预作用(表10)， 这可能与酚酸类本身对凝血酶就没有明显活性有关。
[0146] 实施例2
[0147] 本发明涉及一种丹七方的药物活性成分的重新组合方法;该方法的步骤1-4同实 施例1;
[0148] 步骤5:对步骤1中药物的制备方法进行改进，使得步骤1中提取物中含量过少的活 性化合物的含量增加，使得步骤1中提取物中因含量过大的化合物的含量减少，从而得到重 新组合的药物提取物。
[0149] 实施例3
[0150] -种抑制凝血酶活性的药物组合物，由丹参酮类化合物中的一种、两种、或多种组 成;丹参酮类化合物为：15，16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA;高效液相检测 到峰面积:各丹参酮类化合物面积分别为721-783。
[0151] 实施例4
[0152] -种抑制凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物；由丹参酮类化合 物中的一种、两种、或多种组成；15,16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA;浓度范 围表示91.61-99.49μΜ。
[0153] 实施例5
[0154] -种促进凝血酶活性的药物组合物，由人参皂苷类化合物中的一种、两种、或多种 组成；人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb;高效液相检测到峰面积:各皂 苷类化合物面积分别为218-284。
[0155] 实施例6
[0156] -种促进凝血酶活性的药物组合物，由人参皂苷类化合物中的一种、两种、或多种 组成;人参皂苷Rgl、人参皂苷Rhl、人参皂苷Rd、人参皂苷Rb;以浓度范围表示81.04-105.58 μΜ〇
[0157] 实施例7
[0158] -种调控凝血酶活性的药物组合物，其中包含:丹参酮类化合物、人参皂苷类化合 物；
[0159] 由丹参酮类化合物中的一种、两种、或多种组成；15，16-二氢丹参酮、隐丹参酮、丹 参酮I、丹参酮ΙΙΑ;高效液相检测到峰面积:各丹参酮类化合物面积分别为721-783;
[0160]由人参皂苷类化合物中的一种、两种、