为本发明所述检测试纸的结构示意图。
[0048]图中，1-底板2-上样垫3-NC膜
[0049] 4-1^ 5-C 线 6-吸样垫
【具体实施方式】
[0050]下面结合具体实施例对本发明所述技术方案作进一步的说明。
[0051 ] 实施例1 [0052] 1主要材料
[0053] 1.1粒径为4.0nm的CdTe量子点：纳晶科技有限公司产品；促甲状腺激素(TSH)特异 性配对抗体:美国Meridain生命科学公司产品、TSH标准品：中检所产品；鼠抗人IgG抗体：用 小鼠 IgG免疫山羊自制；氯金酸：Sigma公司产品；硝酸纤维素(NC)膜、lOKDa孔径的超滤管： Millipore公司产品；碳二亚胺(EDC)，N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，牛血清白蛋白（BSA)，聚乙 二醇PEG20000，水解酪蛋白：Sigma产品。其它常用试剂均为分析纯试剂。
[0054] 1.2量子点免疫层析结果判读记录仪（NS9001型），免疫层析结果判读记录仪 (NS3001B型）：天津中新科炬生物制药有限公司产品。
[0055] 2 方法
[0056] 2.1 TSH抗体量子点标记吸取lOOnmol的鼠抗人TSH单克隆抗体和200pmol粒径为 4.0nm的CdTe量子点混匀后，加入lOOnmol的EDC和NHS，避光反应60分钟并持续搅拌。将所得 反应混合物转移到lOKDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15分钟，重复5次。收集 超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。在该溶液中加入20mM硼酸盐缓冲液， pH8.0，含2 % BSA、10 %羊血清，2 %蔗糖，0.2 % Tween 20工作液后，存于4°C冰箱中备用。 [0057] 2.2 TSH抗体胶体金标记氯金酸一柠檬酸三钠还原法制备直径为30-40nm的胶体 金溶液，制备完成后取三份胶体金，分别用〇. 2M K2C03将溶液调到pH7.5。然后将溶液置于磁 力搅拌器上缓慢搅拌，按每l〇〇ml溶液加入lmg将标记用Cys C抗体缓慢滴加到胶体金溶液 中，继续搅拌2小时，再加入到终浓度为0.5%的PEG2000和0.5%的BSA进行封闭20min，标记 结束后以12000r/m离心，弃上清，沉淀按75%原体积复溶至不同配比的胶体金工作液中 (20mM硼酸盐缓冲液，pH8 · 0，含2 % BSA、10 %羊血清，2 %蔗糖，0 · 2 % Tween 20)，存于4 °C冰 箱中备用。
[0058] 2.3 NC膜包被用0.01M pH7.2 PBS将包被TSH抗体稀释成1.5mg/ml，鼠抗人IgG分 别稀释成2mg/ml，然后用喷膜仪在NC膜上按1.2ul/cm进行分别划线包被，包被完成后将NC 膜在在温度20-25 °C，相对湿度在< 30 %的干燥间干燥2-5小时。
[0059] 2.4试纸卡组装在干燥室内，温度20-25°C，湿度小于30%，取塑底板1，将已包被 的NC膜(硝酸纤维素膜)3放置在塑料底板的中部粘贴，将上样垫2裁切成合适的宽度，在NC 膜T线4 一侧搭接上样垫，搭胶体金垫的1/5粘贴，；在NC膜C线5-侧搭接吸样垫6，搭吸样垫 的1/10粘贴;最后用裁剪机将贴好塑料板切成3mm宽的试纸条，再装入塑料卡内，形成试纸 卡。
[0060] 2.5将丁5!1标准品配制成0.05、0.25、1.00、5.00、10.00、20.00、50.00、100.0(^11]/ mL浓度。分别用量子点抗体溶液与胶体金抗体溶液在试纸条上进行检测。
[0061] 2.6检测方法1)将检测试剂及样本平衡至室温，取出试纸卡，平放;2)精确吸取10 μL血清、血浆，样本为全血时吸取15ul样本，分别加入含有300μ1量子点抗体溶液与胶体金 抗体溶液的样品管中，充分混匀；3)用移液枪吸取70ul稀释后的样本加入到检测卡的样本 孔中，检测卡即开始反应，计时，5-10分钟内分别用仪器记录胶体金的G0D值、量子点的a.u. 值。
[0062] 3 结果
[0063] 实验结果如下表1显示，量子点抗体溶液与胶体金抗体溶液与相同包被NC膜组成 的检测试剂，在0.05-100yIU/mL浓度范围内检测TSH标准品。胶体金抗体溶液只在1-100μ IU/mL浓度范围内检测出GOD值信号，量子点抗体溶液在0.05-100yIU/mL浓度范围内均检测 出a. u.值信号。与胶体金抗体溶液相比量子点抗体溶液与试剂条组成的试剂检测灵敏度提 高了 20倍。
[0064]表1胶体金G0D值与量子点a. u.值比较
[0067] 实施例2
[0068] -种量子点-抗体溶液，是由下述方法制备得到的，具体步骤为：
[0069] (l)TSH抗体胶体金标记吸取20nmol的鼠抗人TSH单克隆抗体和各lOOpmol粒径为 4. Onm的ZnSe和CdSe量子点混匀后，加入40nmol的EDC和NHS，避光反应180分钟并持续搅拌。 将所得反应混合物转移到lOKDa孔径的超滤管中，在速度10，000 X g下离心15分钟，重复5 次。收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。在该溶液中加入2 % BSA后，存于4 °C冰箱中备用。
[0070] (2)NC膜包被，同实施例1。
[0071] (3)试纸卡组装，同实施例1。
[0072] 实施例3
[0073] (l)TSH抗体胶体金标记吸取200nmol的鼠抗人TSH单克隆抗体和200pmol粒径为 4.0nm的PbSe量子点混匀后，加入200nmol的EDC和NHS，避光反应60分钟并持续搅拌。将所得 反应混合物转移到lOOKDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15分钟，重复5次。收集 超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。在该溶液中加入2%BSA后，存于4°C冰箱中 备用。
[0074] (2)NC膜包被，同实施例1。
[0075] (3)试纸卡组装，同实施例1。
[0076] 实施例4
[0077] (l)TSH抗体胶体金标记吸取lOOnmol的鼠抗人TSH单克隆抗体和200pmol粒径为 4·0nm的CaAs量子点混匀后，加入150nmol的EDC和NHS，避光反应120分钟并持续搅拌。将所 得反应混合物转移到60KDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15分钟，重复5次。收 集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。在该溶液中加入2%BSA后，存于4°C冰箱 中备用。
[0078] (2)NC膜包被，同实施例1。
[0079] (3)试纸卡组装，同实施例1。
[0080]上述参照实施例对该一种量子点-抗体溶液及其制备方法与应用进行的详细描 述，是说明性的而不是限定性的，可按照所限定范围列举出若干个实施例，因此在不脱离本 发明总体构思下的变化和修改，应属本发明的保护范围之内。
【主权项】
1. 一种量子点-抗体溶液，其特征在于:是由抗体和量子点组成的量子点-抗体交联物， 所述量子点是由粒径在2-20nm之间的IIB. VIA族元素或IIIA. VA族元素为核、二氧化娃为壳 的核壳型纳米复合粒子。2. 根据权利要求1所述的量子点-抗体溶液，其特征在于:所述抗体是鼠抗人单克隆抗 体。3. 根据权利要求1所述的量子点-抗体溶液，其特征在于:所述量子点是ZnS、CdS、HgS、 ZnSe、CdSe、HgSe、CdTe、ZnTe、ZnO、PbSe、HgTe、CaAs、InP、InAs、InCaAs、CdS/ZnS、CdS/Ag2S、 CdS/PbS、CdS/Cd(OH) 2、CdS/HgS、CdS/HgS/CdS、ZnS/CdS、ZnS/CdS/ZnS、ZnS/HgS/ZnS/CdS、 CdSe/CdS、CdSe/ZnS、CdSe/ZnSe、CdSe/CuSe、CdSe/HgTe、CdSe/HgSe、CdSe/HgSe/CdSe、 CdTe/HgS、CdTe/HgTe、InAs/InP、InAs/CdSe、InAs/ZnSe、MgS、MgSe、MgTe、CaS、CaSe、CaTe、 5『5、5^6、56丁6、8&5、8&56、8&丁6、〇(15:]\111、2115:]\111、〇(15:(：11、2115:(：11、〇(15:113、2115:113中的任意 一种或任意几种纳米粒子的组合，以及由上述任意一种量子点为核、二氧化硅为壳的核壳 型纳米复合粒子。4. 根据权利要求1所述的量子点-抗体溶液，其特征在于:是由下述方法得到的： (1) 每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反 应60-180分钟并持续搅拌； (2) 所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15分 钟，重复5次； (3) 收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。5. 根据权利要求4所述的量子点-抗体溶液，其特征在于:是由下述方法得到的： (1) 每lOOnmol的鼠抗人TSH单克隆抗体和200pmol粒径为4.0nm的CdTe量子点混匀后， 加入lOOnmol的EDC和NHS，避光反应60分钟并持续搅拌； (2) 将所得反应混合物转移到lOKDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15分钟， 重复5次； (3) 收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。6. 权利要求1-3之一所述量子点-抗体溶液的制备方法，其特征在于:具体步骤为： (1) 每20-200nmol抗体和200pmol量子点混匀后，加入40-200nmol的EDC和NHS，避光反 应60-180分钟并持续搅拌； (2) 所得反应混合物转移到10K-100KDa孔径的超滤管中，在速度10,000Xg下离心15分 钟，重复5次； (3) 收集超滤管中的反应产物，即为量子点-抗体交联物。7. 根据权利要求6所述的量子点-抗体溶液的制备方法，其特征在于:所述步骤(3)所得 量子点-抗体交联物中加入2 % BSA后，存于4 °C冰箱中备用。8. 权利要求1-3之一所述量子点-抗体溶液在制备检测试纸和/或试剂盒方面的应用。9. 根据权利要求8所述的量子点-抗体溶液的应用，其特征在于:所述检测试纸的NC膜 包被有配对检测物抗体和抗鼠 IgG，所述量子点-抗体溶液应用于检测试纸的T线与C线上。10. 根据权利要求8所述的量子点-抗体溶液的应用，其特征在于:所述检测试剂盒的装 配如下:卡壳包含上盖和下盖两个部分，内部放置检测试纸，卡壳上盖的下部对应样品垫部 分设置了样品孔，用于加入样本，卡壳上盖的中间部分应对试纸NC膜中部设置了视窗口，用 于观察NC膜上的C、T线，判定结果。
【专利摘要】本发明提供了一种量子点-抗体溶液，是由抗体和量子点组成的量子点-抗体交联物，通过将抗体和量子点混匀后加入EDC和NHS，避光搅拌后超滤离心获得；可用于检测一些微量或痕量物质，该类物质由于浓度或含量过低而无法使用现有免疫层析法进行检测。
【IPC分类】G01N33/577, G01N33/533
【公开号】CN105572374
【申请号】CN201510928955
【发明人】李洲, 周洪锐, 许俊燕, 张道红, 李昀地, 杨延瑞
【申请人】天津中新科炬生物制药有限公司
【公开日】2016年5月11日
【申请日】2015年12月11日
【公告号】CN104459106A