一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用
【专利摘要】本发明涉及一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，属于新型生物传感检测技术领域。石墨炔的sp杂化结构，使其具有无顺反异构体和高共轭等优点。同时利用甲苯胺蓝与石墨炔良好的π?π共轭作用，实现了信号分子的牢固固定，减少了因结合不稳定造成的信号误差。因此，基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的电化学免疫传感器实现了对真菌毒素的灵敏检测。
【专利说明】
一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用
技术领域
[0001]本发明涉及一种基于石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，采用石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB复合材料作为检测基底材料，增强导电性的同时，又使得信号分子甲苯胺蓝成功固定在传感表面上。羟丙基壳聚糖的使用，既稳固了基底材料，又使得抗体分子通过戊二醛成功交联在传感表面上，实现了真菌毒素免疫传感器的构建，属于新型功能材料与生物传感检测技术领域。
【背景技术】
[0002]真菌毒素是真菌在食品或饲料里生长所产生的代谢产物，对人类和动物都有害。食用真菌毒素污染的食品，会导致白细胞缺乏病，严重者会导致癌变。所以，对于食品中真菌毒素的检测，刻不容缓。
[0003]目前已有的真菌毒素的检测方法很多，但是大多都是需要大型设备和专业的操作人员。电化学免疫传感器，因其操作方便，简单易行，可以实施在线检测等特点，能够适用于食品药品中真菌毒素的测试。
[0004]本发明采用石墨炔与甲苯胺蓝良好的31-31共轭作用形成的复合材料为基底材料，实现了信号分子的高通量负载，通过羟丙基壳聚糖的修饰，减少了因结合不稳定造成的信号误差。实现了对真菌毒素的灵敏检测。该方法具有成本低、特异性好、操作方便、检测快速等优点，而且制备过程较为简单，有效克服了目前真菌毒素检测方法的不足。
【发明内容】
[0005]本发明的目的之一是基于石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料为基底材料，构建了一种无酶无标记，超灵敏的电化学免疫传感器。
[0006]本发明的目的之二是将所构建的传感器用于真菌毒素的检测，实现了对多种真菌毒素的超灵敏检测。
[0007]本发明的目的之三是将所构建的传感器用于食品药品等实际样品中真菌毒素的检测，实现了灵敏检测。
[0008]本发明的技术方案如下:
1.一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用(I)用Al2O3抛光粉将直径4 mm的玻碳电极打磨平滑，超纯水清洗干净；将5?8 yU0.4?4mg/mL石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加3?8uL，质量分数为0.1%?5%的羟丙基壳聚糖在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加I?5uL，质量分数为0.1%?1%的戊二醛水溶液在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(4)依次滴加5?8UL真菌毒素抗体，5?8 UL、质量分数为0.5%?3%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干；
(5)滴加5?8 yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同浓度的真菌毒素抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。
[0009]2.石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB复合材料的制备
将I?10 mg的石墨炔Gy和0.5 ~ 5 mg的甲苯胺蓝TB加入0.5 ~ 5 mL的超纯水中，室温振荡24 h，得到复合材料石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB。
[0010]3.一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，所述的真菌毒素，选自下列之一:呕吐霉素，玉米赤霉稀酮，伏马毒素，黄曲霉毒素BI，赭曲霉毒素。
[0011]本发明的有益成果
(I)石墨炔的使用，实现了对传感器底层比表面积成功放大，同时能够很好的促进电极表面的电子传递。
[0012](2)石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料的使用，使得信号分子得以增加，扩展了传感器的线性范围，降低了检出限。
[0013](3)羟丙基壳聚糖的使用，增强了传感器表面GyOTB复合材料的牢固固载，同时实现了对抗体的化学键连接，实现了超灵敏稳定检测。
【具体实施方式】
[0014]实施例1
一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用
(1)用Al2O3抛光粉将直径4mm的玻碳电极打磨平滑，超纯水清洗干净；将5 yU0.4mg/mL石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加3nL，质量分数为0.1%的羟丙基壳聚糖在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加IuL，质量分数为0.1%的戊二醛水溶液在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(4)依次滴加5UL真菌毒素抗体，5 uL、质量分数为0.5%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加5yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同浓度的真菌毒素抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干。
[0015]实施例2
一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用
(1)用Al2O3抛光粉将直径4mm的玻碳电极打磨平滑，超纯水清洗干净;将7 pL,3 mg/mL石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加6nL，质量分数为2.5%的羟丙基壳聚糖在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加4uL，质量分数为0.7%的戊二醛水溶液在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(4)依次滴加7yL真菌毒素抗体，7 yL、质量分数为2%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加7yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同浓度的真菌毒素抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干。
[0016]实施例3 一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用
(1)用Al2O3抛光粉将直径4mm的玻碳电极打磨平滑，超纯水清洗干净;将8 pL,4 mg/mL石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜；
(2)滴加8nL，质量分数为5%的羟丙基壳聚糖在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(3)滴加5uL，质量分数为1%的戊二醛水溶液在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干；
(4)依次滴加8yL真菌毒素抗体，8 yL、质量分数为3%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干；
(5)滴加8yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同浓度的真菌毒素抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干。
[0017]实施例4
石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB复合材料的制备
将I mg的石墨炔Gy和0.5 mg的甲苯胺蓝TB加入0.5 mL的超纯水中，室温振荡24 h，得到复合材料石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB。
[0018]实施例5
石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB复合材料的制备
将5 mg的石墨炔Gy和2 mg的甲苯胺蓝TB加入3 mL的超纯水中，室温振荡24 h，得到复合材料石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB。
[0019]实施例6
石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB复合材料的制备
将10 mg的石墨炔Gy和5 mg的甲苯胺蓝TB加入5 mL的超纯水中，室温振荡24 h，得到复合材料石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB。
[0020]实施例7
一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，所述的真菌毒素为呕吐霉素。
[0021 ] 实施例8
一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，所述的真菌毒素为伏马毒素。
[0022]实施例9
一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，所述的真菌毒素为赭曲霉毒素。
【主权项】
1.一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，其特征在于，包括以下步骤: (1)用Al2O3抛光粉将直径4mm的玻碳电极打磨平滑，超纯水清洗干净;将5?8汕、0.4?4 mg/mL石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB复合材料滴加到电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干成膜； (2)滴加3?8uL，质量分数为0.1%?5%的羟丙基壳聚糖在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干； (3)滴加I?5uL，质量分数为0.1%?1%的戊二醛水溶液在电极表面，超纯水冲洗，室温下晾干； (4)依次滴加5?8UL真菌毒素抗体，5?8 uL、质量分数为0.5%?3%的牛血清白蛋白BSA溶液于电极表面，超纯水冲洗，4 0C冰箱中晾干； (5)滴加5?8yL、0.06?40 ng/mL的一系列不同浓度的真菌毒素抗原标准溶液至电极表面，超纯水冲洗，4 V冰箱中晾干。2.如权利要求1所述的一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，所述的石墨炔@甲苯胺蓝GyOTB复合材料，其特征在于，包括以下步骤: 将I?10 mg的石墨炔Gy和0.5 ~ 5 mg的甲苯胺蓝TB加入0.5 ~ 5 mL的超纯水中，室温振荡24 h，得到复合材料石墨炔O甲苯胺蓝GyOTB。3.如权利要求1所述的一种基于石墨炔甲苯胺蓝复合材料的真菌毒素免疫传感器的制备方法及应用，所述的真菌毒素，选自下列之一:呕吐霉素，玉米赤霉烯酮，伏马毒素，黄曲霉毒素BI，赭曲霉毒素。
【文档编号】G01N33/543GK106053789SQ201610342904
【公开日】2016年10月26日
【申请日】2016年5月23日
【发明人】任祥, 魏琴, 杜斌, 王耀光, 张勇, 孙旭, 范大伟
【申请人】济南大学