专利名称：：用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种植物用生物农药，特别是涉及一种用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药。技术背景据统计我国水稻种植面积2882万公顷(2001)，小麦种植面积2199万公顷(2003)，苹果面积230万公顷，蔬菜面积逐年增加。苹果腐烂、苹果轮纹、水稻稻瘟、水稻纹枯、黄瓜枯萎、小麦赤霉、黄瓜炭疽、辣椒疫霉是上述作物、果蔬生产中常见的植物病害，对于上述病害的防治主要采用化学农药，比如50%多菌灵、70%甲基托布津、银泰等。但因一些常规品种的长期使用使病原菌产生抗药性，致使田间用药量逐年加大，给人类的生存环境及健康带来了不可逆转的负面影响。因此，高效、低毒、低残留、与环境友善同时具有自主知识产权新农药品种的创制迫在眉睫。从豆科植物补骨脂中提取的天然有效成分补骨脂定(Psomlidin)对作物、果蔬生产中常见的植物病害，具有优异的防治效果，因此，补骨脂定(Psomlidin)可以开发为具有广阔前景的植物源生物农药，同时，可以作为先导化合物创制新药。
发明内容本发明的目的在于提供一种用补骨脂定(Psomlidin)抑制常见植物病原菌，如苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等。本发明的目的是通过以下技术方案实现的用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药，其化合物是干燥补骨脂种子5Kg，用70%工业乙醇冷浸提取四次，浸出液减压浓縮得乙醇提取物，加水混溶，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部位浸膏100g，经反复硅胶柱层析，用石油醚一乙酸乙酯梯度洗脱，分离得到补骨脂定(50mg)(石油醚乙酸乙酯=4:1部分)。所述的用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药，所述的补骨脂定，无色针晶，mp290292°C;TLC检查在紫外下为蓝荧光斑点；ESIMS:m/z337.4，[M+H]+，335.3[M-H];H画R(COCD3+CDC13):1.83(3H，s，CH3)，1.82(3H，s，CH3)，3.42(2H,d，J=7.2Hz，H-l')，5.41(1H，m，H-2')，6.92(1H，s，H-4)，6.96(1H，dd，J=1.9，8.4Hz，H-8)，7.13(1H，d，J=1.8Hz，H-IO)，7.68(1H，s，H-l)，7.82(1H，d，J=8.4Hz，H-7);补骨脂定结构式本发明的优点与效果是补骨脂定(Psomlidin)作为农用杀菌剂具有以下优势:1.补骨脂定(Psomlidin)是天然有效成分，本身作为农用杀菌剂具有高效、低毒、低残留、不易产生抗药性等特点。2.药效高。补骨脂定、福美胂、银泰、甲基托布津、多菌灵5种原药对苹果腐烂病菌菌丝生长的抑制作用EC50分别为1.35、8.93、26.18、9.16、1.47mg/L，EC90分别为15.33、128.98、93.37、147.85、26.86mg/L。可见，补骨脂定的抑菌活性高于防治苹果腐烂病菌的其它药剂。3.杀菌谱广。补骨脂定对苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等多种常见植物病害均具有很好的抑制活性。具体实施方式补骨脂定(Psoralidin)可以作为农用杀菌剂用于防治苹果腐烂病菌(Valsamali)，苹果轮纹病菌(Physalosporapiricola)，水稻稻瘟病菌(Pyriculariaoryzae)，水稻纹枯病菌(RhizoctoniasolaniKuhn)，黄瓜枯萎病菌(Fusariumoxysporum),小麦赤霉病菌(Gibberellazeae)，黄瓜炭疽病菌(Colletotrichumorbiculare)辣椒疫霉病菌(Phytophthoracapsici)等引起的多种植物病害。实例l:用丙酮或二甲基亚砜将补骨脂定(Psomlidin)溶解配成10g/L的粗提物母液。加入适量粗提物母液于5(TC的PDA培养基中，充分混匀，配成粗提物终浓度分别为0.12mg/L、0.6mg/L、3mg/L、15mg/L、75mg/L的含药培养基，以等体积的丙酮或二甲基亚砜加入到PDA培养基中作对照，然后倒入直径90mm培养皿内制成平板，备用。用直径6mm的打孔器从事先在PDA平板上28'C下培养712d的各供试病菌菌落边缘处切取菌饼，并移植于上述含不同浓度的粗提物平板和对照平板中央，每次处理重复3次，置28"C下培养712d，测量菌落直径。每菌落取相交垂直线方向测其直径，以其均值减去菌饼直径即得菌落净生长直径(CK)，相对抑制率(％)=(对照净生长量一处理净生长量)/对照净生长量xlOO。根据病菌抑制率等有关指标，采用相应的数据分析软件，计算出EC5。值及EQ。值限。补骨脂定对几种常见植物病原菌菌丝生长的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实例2:试验方法同实例l，补骨脂定、福美胂、银泰、甲基托布津、多菌灵6种原药对苹果腐烂病菌菌丝生长的抑制作用如下5种药剂对苹果腐烂病菌菌丝生长的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>权利要求1.用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药，其特征在于化合物是干燥补骨脂种子5Kg，用70％工业乙醇冷浸提取四次，浸出液减压浓缩得乙醇提取物，加水混溶，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部位浸膏100g，经反复硅胶柱层析，用石油醚一乙酸乙酯梯度洗脱，分离得到补骨脂定(50mg)(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1部分)。2.根据权利要求l所述的用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药，其特征在于所述的补骨脂定，无色针晶，mp290292。C;TLC检査在紫外下为蓝荧光斑点；ESIMS:m/z337.4，[M+H]+，335.3[M-H];HNMR(COCD3+CDC13):1.83(3H，s，CH3)，1.82(3H，s，CH3)，3.42(2H，d，J:7.2Hz，H-l')，5.41(1H，m，H-2')，6.92(1H，s，H-4)，6.96(1H，dd，J=1.9，8.4Hz，H-8)，7.13(1H，d，J=1.8Hz，H-IO)，7.68(1H，s，H-l)，7.82(1H，d，J:8.4Hz，H-7);补骨脂定结构式全文摘要用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药，本发明涉及一种植物用生物农药，特别是涉及一种用补骨脂定防治植物真菌病害的生物农药。化合物是干燥补骨脂种子5Kg，用70％工业乙醇冷浸提取四次，浸出液减压浓缩得乙醇提取物，加水混溶，依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取部位浸膏100g，经反复硅胶柱层析，用石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，分离得到补骨脂定(50mg)(石油醚∶乙酸乙酯＝4∶1部分)。抑制常见植物病原菌，如苹果腐烂病菌、苹果轮纹病菌、水稻稻瘟病菌、水稻纹枯病菌、黄瓜枯萎病菌、小麦赤霉病菌、黄瓜炭疽病菌、辣椒疫霉病菌等。文档编号A01N65/00GK101213980SQ20081001001公开日2008年7月9日申请日期2008年1月2日优先权日2008年1月2日发明者关丽杰,李海燕,蔡丽丽,双邵,红邵申请人:沈阳化工学院