专利名称：防治多种真菌病害的细菌菌株nj118的制作方法
技术领域：
本发明涉及防治多种真菌病害的单一细菌菌株njll8，属于农作物防病治病技术 领域，专用于灰霉病、炭疽病、蔓枯病、菌核病的无公害防治，是一种很好的化学农药替代
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背景技术：
由植物病原真菌引起的病害，约占植物病害的70 80%。一种作物上可发现几种 甚至几十种真菌病害。目前，真菌病害的防治主要依赖化学农药。化学农药的大量使用在 保证作物高产、稳产，控制病害流行方面发挥着重要作用，但是由于化学农药本身的缺点及 长期不合理的使用，逐渐暴露出一些严重的问题，如3R问题(抗药性Resistance、农药残留 Residue、病虫害再猖獗Resurgence)等。此外，随着经济的发展、人们生活水平的提高，人 们越来越重视食品安全问题。生物农药因其安全性而得到世界各国的重视。目前国际上已 经有焚光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescense)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、 方文身寸土壤杆菌(Agrobacterium radiobacter)、绿粘帚霉(Glioladium virens)、黄丝曲霉 (Talaromyces favus)及多种木霉(Trichodex)等菌株开发为杀菌剂。技术问题本发明的目的是针对农业生产中的实际问题和需求，筛选出一株抗菌谱广、活性 高、对环境安全的新型生防细菌菌株，更好地防治植物真菌病害，减少化学农药的使用。技术方案本发明是从森林土壤中分离筛选到1株具有较强拮抗活性的细菌，经微生物学鉴 定为吡咯菌素伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)，菌株代号为njll8。吡咯菌素 伯克霍尔德氏菌作为一种生防细菌，在国内属首次报道，是一种新型的生防细菌。该菌株已 保藏于布达佩斯条约微生物国际保藏单位中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中 心(CGMCC)。地址北京市朝阳区大屯路，中国科学院微生物研究所，邮编100101。保藏日 期是2009年3月10日，保藏号是CGMCC No. 2930。生防菌株njllS用于制备生防菌剂的方法为将上述防治多种真菌病害的细菌菌株njllS接种到LB液体培养基中，25-30°C、 150-250rpm振荡培养3_5天，使菌体数量达到101(lCFU/mL以上就得到其悬浮剂成品。有益效果使用该发明生产的生防菌剂具有生产成本低、使用方便、防治效果好等优点，适用 于灰霉病、炭疽病、蔓枯病、菌核病等病害的生物防治。本发明对于保护生态环境，提高农产 品的质量具有重要意义。实验证明，菌株njllS对香蕉灰霉病、黄瓜炭疽病、西瓜蔓枯病、油菜菌核病抑菌 圈直径都大于40mm。在温室盆栽试验中，njllS对黄瓜炭疽病和油菜菌核病的防治效果分 别达到了 85. 和86.6%。三具体实施例方式本发明是从森林土壤中分离筛选到1株具有较强拮抗活性的细菌，经微生物学 鉴定为吡咯菌素伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)，菌株代号为njll8。吡咯 菌素伯克霍尔德氏菌作为一种生防细菌，在国内属首次报道，是一种新型的生防细菌。该 菌株现保存于中国微生物菌种保存管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏号是CGMCC No.2930。1生防细菌的分离取南京市中山陵内树木根表5mm 土层土样共30份。将采集的土样5g加入装有 50mL无菌水的三角瓶中，150rpm振荡1小时，然后进行4_5次10倍系列稀释。吸取稀释 10000和100000的稀释液200 μ L于LB平板上均勻涂布，每个稀释度中设3次重复于28 °C 下培养2天。挑取不同类型的菌落于LB平板上纯化3次，随后划线于LB斜面，于4°C保存 备用。将筛选获得的细菌在LB平板上活化后分别移入到50mL的LB液体培养基中，ISOrpm, 28°C振荡培养48小时得到细菌菌液。在PDA和LB等比例混合的平板中央放置病原真菌菌 丝块(直径5mm)，四周呈对角线放置4个直径为5mm的滤纸片，3个接种待测细菌菌液5 μ L， 1个设无菌水处理为对照，每个处理重复3次，28°C培养，待对照处理真菌生长至平板边缘 时测定抑菌圈。通过此方法，我们分离获得509株细菌，筛选获得8个具有较强拮抗活性的 菌株。2菌株的鉴定根据16S rDNA序列测定数据，以及细胞形态和生理生化实验数据(表1)分析， njll8被鉴定为吡咯菌素伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)。发明人对njll8 的平板拮抗活性进行测定，发现njll8对香蕉灰霉病、黄瓜炭疽病、西瓜蔓枯病、油菜菌核 病具有较强的平板拮抗活性。温室防效测定发现njll8对黄瓜炭疽病和油菜菌核病的防治 效果分别达到了 85. 和86. 6%，有较大的潜力开发成商业化的活菌生防制剂。表1生防菌株njll8的理化试验表(BI0L0G GN2)
权利要求
防治多种真菌病害的菌株nj118，其特征在于，该菌株为吡咯菌素伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)，于2009年3月10日保藏于中国微生物菌种管理委员会普通微生物中心，菌种保藏号为CGMCC NO.2930。
2.权利要求1所述防治多种真菌病害的菌株njll8在防治灰霉病、炭疽病、蔓枯病、菌 核病方面的应用。
3.用权利要求1所述防治多种真菌病害的菌株njll8制备的生防菌剂。
4.权利要求3所述防治多种真菌病害的菌株njllS的制备方法，其特征在于将权利要求1所述防治多种真菌病害的菌株njllS在LB等细菌培养液25-30°C、 150-250rpm振荡培养3_5天后得到的发酵液即可作为生防菌剂。
5.权利要求3或4所述njllS生防菌剂在防治灰霉病、炭疽病、蔓枯病、菌核病方面的 应用。
全文摘要
本发明涉及防治多种真菌病害的细菌菌株nj118，属于农作物防病治病技术领域。经鉴定为吡咯菌素伯克霍尔德氏菌(Burkholderia pyrrocinia)。菌种为中国普通微生物菌种保藏管理中心保藏，保藏号为CGMCC No.2930。菌种在LB等细菌培养液25-30℃、150-250rpm振荡培养3-5天后得到的发酵液即可作为生防菌剂。Nj118菌株对灰霉病、炭疽病、蔓枯病、菌核病表现出较好的平板拮抗效果，有较大的潜力开发成商业化的活菌生防制剂。
文档编号C12N1/20GK101942402SQ201010173758
公开日2011年1月12日 申请日期2010年5月17日 优先权日2010年5月17日
发明者刘宝生, 方继朝, 王利华, 谢霖, 郭慧芳, 钟万芳 申请人:江苏省农业科学院