专利名称：低温木霉田间扩繁剂的制作方法
技术领域：
本发明属于微生物应用领域，尤其涉及一种利用低温木霉真菌为拮抗菌，制成植 物病害真菌生物防治产品。
背景技术：
当今，植物真菌病害已制约作物的高产、稳产和优质。随着人们对无污染、无公害 绿色有机食品要求的日益提高，专家、学者致力于无化学农药残留的生物防治研究，筛选出 一些具有拮抗植物病原真菌功能的、可用于植物真菌病害生物防治的木霉真菌。研究证实，木霉真菌能有效拮抗镰刀菌、白绢病菌、丝核菌、疫霉菌、立枯丝核菌、 灰霉菌、灰葡萄孢菌和小麦颖枯病菌等多种植物病原真菌，以此达到预防植物真菌病害之 目的。田间施用木霉真菌生物防治制剂，无化学农药残留之虞，特别适用于无公害和有机农 业领域。利用木霉真菌制成的用于防治植物真菌病害的产品称真菌生物防治剂。为使真菌生物防治产品能实际应用于防治植物真菌病害，发明人已公开一种 名为木霉田间扩繁剂的真菌生物防治剂和专利使用方法《木霉田间扩繁剂》(申请号 200910095876. 8)和《木霉生物防治剂的施用方法》(申请号200910101176. 5)。经发明人后续研究，为提高防病效果，发明人提出低温木霉田间扩繁剂。
发明内容
本发明要解决的技术问题和提出的技术任务是克服现有技术存在的在较低温度 环境使用木霉田间扩繁剂防病效果较差的缺点，提供一种低温木霉田间扩繁剂。为此，本发 明采用以下技术方案低温木霉田间扩繁剂所使用的生物防治真菌是孢子萌发、菌丝生长、产孢所需最 低温度和最适温度均低于普通木霉摄氏三度以下，且对病原真菌有较强拮抗作用的木霉属 真菌。目前业界将木霉真菌作为一种生防真菌研究和施用时，在预防还是治疗的概念上 不明确。其实，施用木霉真菌只能是预防植物病害，施用真菌木霉很难治愈已发病的植物。施用木霉真菌防治植物真菌病害不同于化学药物，化学药物施于土壤或植物体 后，立即影响病原真菌的萌发、生长与繁殖，能很快抑制、杀死和铲除病原真菌。木霉真菌施于土壤或植物体后，其自身有一个萌发、生长和增殖的过程。只有当木 霉真菌达到一定数量时，才能对病原真菌发挥拮抗作用。病原真菌在侵入植物前自身也有一个萌发、生长和增殖过程，只有达到一定的数 量，病原真菌才具有侵染的能力。病原真菌侵入植物后还有一个潜育期，最后才是显症期也 就是发病期。所以，当我们发现田间有发病的植株时，病原真菌在田间的数量已很大，这时 施用木霉很难从数量上压倒病原真菌。鉴于上述木霉真菌和病原真菌的生长规律及拮抗关系，所以用木霉真菌作为生物防治剂，只有使木霉真菌在病原真菌尚未大量繁殖前就控制病原真菌的萌发、生长与增殖， 才能达到预防植物病害的目的，这就是预防和治疗的区别。故木霉真菌作为生物防治真菌 的应用，只能是预防植物病害的发生，而不是治疗已发病的植物。鉴于上述理论和实践，发明人提出低温木霉应用到生物防治剂作为生物防治真菌
具有重大意义。真菌孢子萌发和菌丝生长、产孢都需要一定的温度。普通木霉孢子萌发的最低温 度要求是摄氏15度左右，最适温度是摄氏20到28度。菌丝可以生长的温度虽低于孢子萌 发的温度，但菌丝生长的最适温度与孢子萌发的最适温度接近，还是摄氏20到28度。多数主要病害真菌的孢子萌发和菌丝生长、产孢所需温度与普通木霉相近，如镰 刀菌、白绢病菌、疫霉菌、立枯丝核菌、灰霉菌等。也就是说，早春向田间施放木霉，如果气温 达不到木霉真菌生长的适宜温度，木霉真菌的孢子不能萌发，菌丝不能生长。当气温升高达 到木霉真菌生长的适宜温度时，在土壤和植株中越冬的病原真菌也会与木霉真菌相同的速 度生长和增殖，这种状态下，只能向田间施放大量的木霉真菌才能有效遏制病原真菌。向田 间施放大量木霉真菌的成本会很高，不易被使用者接受。低温木霉真菌的性状是，孢子萌发、菌丝生长、产孢所需最低温度和最适温度均低 于普通木霉真菌所需最低温度和最适温度摄氏三度以下，且对病原真菌有较强拮抗作用的 木霉属真菌。这摄氏三度的差距在日平均气温上可提前十天左右时间，也就是说，低温木霉 真菌在早春时节施用，能比病原真菌提前十天左右时间就萌发、生长和增殖。当气温达到病 原真菌生长的适宜温度时，大量的木霉真菌已控制田间、植株和病原真菌的生长环境，使病 原真菌的萌发、生长和增殖得到有效的遏制，从而达到预防植物真菌病害之目的。本发明专利要解决的技术问题发明产品低温木霉田间扩繁剂能解决在较低的气温和土壤温度下取得较好的预 防植物真菌病害的效果。
具体实施例方式发明人已公开的木霉田间扩繁剂(申请号200910095876. 8)，是由木霉真菌孢子 剂和营养基均勻混合组成。低温木霉田间扩繁剂所用之木霉真菌孢子剂为对低温木霉真菌 培养所得的含有大量低温木霉真菌孢子和少量活菌丝体的固体或液体或者固体与液体的 混合物。营养基为能为低温木霉真菌孢子萌发、生长、产孢提供碳、氮及矿物质和微量元素 的营养物质。营养基与低温木霉真菌孢子剂混合前在120士5°C条件下灭菌30士5分钟。低温木霉田间扩繁剂的优点是自带营养基。自带营养基的作用有二个方面。其 一是，供给低温木霉真菌以丰富的营养使其菌丝快速、大量生长，定殖于土壤中，并产生大 量孢子，使供给田间的孢子量可扩大数十倍到数百倍。其二是，当低温木霉田间扩繁剂在 运输和储存中有部分孢子失活的情况下，只要有少部分孢子萌发就可依靠自带的营养基快 速、大量生长、产孢。当低温木霉田间扩繁剂撒在潮湿的土壤上，低温木霉田间扩繁剂很快 吸潮，在适宜的温度下，6小时孢子萌发、菌丝生长，12小时就可生长成菌落。低温木霉田间 扩繁剂撒施后一周内，每克可产孢子10亿个以上。这些鲜活的孢子随作物间流动的空气， 扩散到土壤的各个角落和作物茎、叶、花、果，在适宜的地方萌发、生长和定殖。上述过程中，菌落下部的低温木霉真菌菌丝因得到营养基的充分营养，会快速向土壤中生长，定殖于土壤。低温木霉田间扩繁剂施放在湿润的土壤表面，能得到充分的氧气，并且不受土壤 中抑菌因子的影响，生长速度比在土壤中快数倍。低温木霉田间扩繁剂施放在田间土壤表面，是一种新的土壤消毒方法，其预防作 物根部、茎基部真菌病害的机制是，低温木霉田间扩繁剂施放在湿润的土壤表面后低温木 霉真菌快速生长、繁殖并定殖于土壤中，抑制土壤中病原真菌孢子的萌发和病原真菌菌丝 的生长，抑制病原真菌对作物的侵染，达到预防作物根部、茎基部真菌病害发生的目的。低温木霉田间扩繁剂预防作物茎、叶、花、果真菌病害的机制是，低温木霉真菌在 湿润的土壤表层生长、繁殖首先抑制土壤表层可能危害作物茎、叶、花、果的病原真菌孢子 的萌发和菌丝的生长，减少病原真菌的侵染力度。低温木霉真菌在湿润的土壤表层生长、繁 殖过程中产生大量孢子并在田间释放、飞散，部分孢子会着落于作物茎作物茎、叶、花、果可 能被病原真菌侵害的部位起到保护作用；低温木霉真菌在繁殖过程中会释放出大量挥发性 抗生素，可抑制土壤表层和作物茎、叶、花、果部位病原真菌孢子的萌发和菌丝的生长，达到 防病的效果。施用低温木霉田间扩繁剂预防作物根、基茎部真菌病害的效果可持续两个月以 上；预防作物茎、叶、花、果部位真菌病害效果可持续25天以上。本发明是对木霉田间扩繁剂所作的改进的新的技术方案，所用低温木霉真菌为木 霉属中其孢子萌发、菌丝生长、产孢所需最低温度和最适温度均低于普通木霉所需最低温 度和最适温度摄氏三度以下，且对病原真菌有较强拮抗作用，可用于生物防治的一种或两 种木霉属真菌的组合或者数种的组合。所述的低温木霉真菌孢子为木霉真菌孢子种类(分生孢子、厚垣孢子)中的一种 或二种的组合的组合。其是以下述材料作为培养基对低温木霉真菌培养所得A、植物的茎、杆、枝、叶、根、花、果或种子，或者其副产品、混合物、提取物；或者B、动物的皮、毛、骨、肉或内脏，或者其副产品、混合物、提取物；或者C、藻类及其副产品、提取物；或者上述A、B、C三种中的两种的组合或者数种的组合。上述材料作为培养基时可添加矿物质、微量元素。低温木霉真菌的培养、扩繁、加工方法可以是常规的固体培养、液体培养或其他培 养方法，也可以是对前述常规的固体培养、液体培养方法进行改进的培养方法。所述的营养基为A、植物的茎、杆、枝、叶、根、花、果或种子，或者其副产品、混合物、提取物；或者B、动物的皮、毛、骨、肉或内脏，或者其副产品、混合物、提取物；或者C、藻类及其副产品、提取物；或者上述A、B、C三种中的两种的组合或者数种的组合。上述材料作为营养基时可添加矿物质、微量元素。本发明的应用本发明的应用与已公开的木霉田间扩繁剂的应用一样，是将包含低温木霉真菌孢 子剂和营养基的低温木霉田间扩繁剂撒施在湿润的土壤(或为各种材质的植料)表面，使 低温木霉真菌在土壤(或为各种材质的植料)表层快速、大量生长，产孢。
5
具体的包括以下步骤(1)对大田、大棚、温室、盆栽等栽培植物的土壤(或为各种 材质的植料)先行灌水、喷水、洒水或滴灌、渗灌，令土壤(或为各种材质的植料)湿润；如 在雨后土壤(或为各种材质的植料)湿润的情况下，即不必再灌水、喷水、洒水或滴灌、渗灌。(2)把低温木霉田间扩繁剂均勻撒施在湿润的土壤(或为各种材质的植料)表面。针对作物不同的阶段，应当有所区别进行撒施A、种子播种前与播种后以及种苗播种前，把低温木霉田间扩繁剂均勻撒施在土壤 (或为各种材质的植料)表面；B、种苗播种后以及植物生长阶段，把低温木霉田间扩繁剂均勻撒施在植株间土壤 (或为各种材质的植料)表面，避免撒在叶面和直接撒在根基处；C、对盆栽，把低温木霉田间扩繁剂均勻撒施在盆边土壤(或为各种材质的植料) 的表面。低温木霉田间扩繁剂撒在叶面会影响其效果，大量撒在根基处会灼伤作物，因此 要避免这样撒施。撒施低温木霉田间扩繁剂宜在午后至傍晚进行。对种子播种前与播种后以及种苗 播种前、植株较小的田间撒施真菌生物防治剂宜在下午太阳不直射土面后进行。低温木霉田间扩繁剂每公顷用量22. 5千克 150千克。改进的新的技术方案生产的低温木霉田间扩繁剂优点低温木霉真菌在早春时节施用，能比病原真菌提前十天左右时间萌发、生长和增 殖。当气温达到病原真菌生长的适宜温度时，大量的木霉真菌已控制田间、植株和病原真菌 的生长环境，使病原真菌的萌发、生长和增殖得到有效的遏制，从而达到预防植物真菌病害 之目的。施用低温木霉田间扩繁剂还有一个优点是，当平均气温达到摄氏20度到25度时， 由于晚上气温和土壤温度均低于白天，病原真菌在晚上的生长速度会降低或停止，而低温 木霉真菌还能较快地生长。低温木霉田间扩繁剂防病实例实例一、棉花立枯病(又称棉花苗枯病)的预防本实例使用的木霉属真菌哈茨木霉一株菌种(自编号T. D39)。孢子粉培养基的配方麦麸500克、油菜籽饼380克、玉米粉100克、肉骨粉20克、 磷酸二氢钾ι. O克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克。营养基配方麦麸500克、油菜籽饼 380克、大米粉100克、肉骨粉20克、磷酸二氢钾1. 0克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克，营 养基的粒度为2. 5mm以下。孢子粉与营养基的重量配比为35 65，第一次每公顷施45千克，间隔1个月再施 每公顷30千克，本实例共施二次，防病效果达91%。实例二、茉莉白绢病的预防本实例使用的木霉属真菌哈茨木霉一株菌种(自编号T. D39)。孢子粉培养基的配方麦麸580克、油菜籽饼400克、肉骨粉20克、磷酸二氢钾1. 0 克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克。孢子液培养基的配方马铃薯200克、蔗糖20克、磷酸 二氢钾1. 5克、硫酸镁0. 5克，加水1000毫升。营养基配方麦麸580克、油菜籽饼400克、肉骨粉20克、磷酸二氢钾1. 0克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克，营养基的粒度为2. Omm 以下。孢子粉和孢子液与营养基的重量配比为80 20，每公顷用量45千克，间隔2个月 施一次，本实例共施二次，防病效果达91 %。实例三、蔬菜、草莓灰霉病的预防本实例使用的木霉属真菌哈茨木霉一株菌种(自编号T. D39)、绿色木霉一株菌种 (自编号T.D26)。孢子粉培养基的配方麦麸600克、油菜籽饼380克、肉骨粉20克、磷酸二氢钾1. 0 克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克。营养基配方麦麸600克、油菜籽饼380克、肉骨粉20 克、磷酸二氢钾1. 0克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克，营养基的粒度为5mm以下。孢子粉与营养基的重量配比为85 15，第一次施用量为每公顷105千克，间隔1 个月再施一次施用量为每公顷45千克，本实例共施二次，防病效果达90%。实例四、番茄枯萎病的预防本实例使用的木霉属真菌哈茨木霉一株菌种(自编号T. D39)。孢子液培养基的配方马铃薯200克、玉米浆20克、蔗糖20克、磷酸二氢钾1. 5克、 硫酸镁0. 5克，加水1000毫升。营养基配方麦麸500克、油菜籽饼430克、玉米粉50克、 肉骨粉20克、磷酸二氢钾1. 0克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克，营养基的粒度为3. Omm 以下。孢子液与营养基的重量配比为35 65，每公顷用量60千克，间隔60天施一次，本 实例共施二次，防病效果达93 %。实例五、花生立枯病的预防本实例使用的木霉属真菌绿色木霉一株菌种(自编号T. D26)。孢子液培养基的配方马铃薯200克、酵母粉25克、蔗糖20克、磷酸二氢钾1. 5克、 硫酸镁0. 5克，加水1000毫升。营养基配方麦麸500克、油菜籽饼400克、玉米粉80克、 肉骨粉20克、磷酸二氢钾1. 0克、硝酸钾1. 0克、四硼酸钠1. 0克，营养基的粒度为3. Omm 以下。孢子液与营养基的重量配比为30 70，每公顷用量60千克，间隔60天施一次，本 实例共施二次，防病效果达86 %。
权利要求
低温木霉田间扩繁剂，其特征是以低温木霉真菌孢子剂和营养基组成的预防植物真菌病害的真菌生物防治剂。
2.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂所用的低温木霉真菌是孢子萌发、菌丝 生长、产孢所需最低温度和最适温度均低于普通木霉真菌摄氏三度以下，且对病原真菌有 较强拮抗作用的木霉属真菌。
3.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征是由低温木霉真菌孢子剂和营 养基均勻混合组成。所述的低温木霉真菌孢子剂为对低温木霉真菌培养所得的含有大量低 温木霉真菌孢子和少量活菌丝体的固体或液体或者固体与液体的混合物；所述的营养基为 能为低温木霉真菌孢子萌发、菌丝生长、产孢提供碳、氮及矿物质和微量元素的营养物质。
4.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征所述的低温木霉真菌为真菌界 木霉属中的一种或两种的组合或者数种的组合。
5.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征是所述的低温木霉真菌孢子剂 为低温木霉真菌的分生孢子和厚垣孢子中的一种或二种的组合。
6.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征是所述的低温木霉真菌孢子剂 是以下述材料作为培养基对低温木霉真菌培养所得A、植物的茎、杆、枝、叶、根、花、果或种子，或者其副产品、混合物、提取物；或者B、动物的皮、毛、骨、肉或内脏，或者其副产品、混合物、提取物；或者C、藻类及其副产品、提取物；或者上述A、B、C三种中的两种的组合或者数种的组合。上述材料作为培养基时可添加矿物质、微量元素。
7.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征所述的营养基为A、植物的茎、杆、枝、叶、根、花、果或种子，或者其副产品、混合物、提取物；或者B、动物的皮、毛、骨、肉或内脏，或者其副产品、混合物、提取物；或者C、藻类及其副产品、提取物；或者上述A、B、C三种中的两种的组合或者数种的组合。上述材料作为营养基时可添加矿物质、微量元素。营养基与低温木霉真菌孢子剂、孢子液混合前在120士5°C条件下灭菌30士5分钟。
8.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征是所述的低温木霉真菌孢子剂 和营养基的配比为A、当经培养所得的固体低温木霉真菌孢子剂经干燥粉碎成为孢子粉时，孢子粉的重量 百分比为25% 75%，其余为经干燥粉碎的营养基；B、当经培养所得的液体低温木霉真菌孢子剂为孢子液时，孢子液的重量百分比为 30% 95%，其余为经干燥粉碎的营养基，孢子液与营养基混合后经40°C干燥；C、当低温木霉真菌孢子粉与低温木霉真菌孢子液混合成低温木霉真菌孢子剂时，孢子 粉与孢子液的重量百分比为30% 95%，其余为经干燥粉碎的营养基，孢子粉、孢子液与 营养基混合后经40°C干燥。
9.根据权利要求1所述的低温木霉田间扩繁剂，其特征是所述的孢子液与孢子粉、营 养基混合前滤去部分水分。
全文摘要
本发明公开了一种低温木霉田间扩繁剂，是本人已公开的发明专利木霉田间扩繁剂新的技术方案，属于微生物的应用。低温木霉田间扩繁剂所使用的低温木霉真菌的性状是，孢子萌发、菌丝生长、产孢所需最低温度和最适温度均低于普通木霉真菌所需最低温度和最适温度摄氏三度以下，且对病原真菌有较强拮抗作用的木霉真菌。在早春时节施用，低温木霉真菌能比病原真菌提前十天左右时间萌发、生长和增殖。当气温达到病原真菌生长的适宜温度时，大量的木霉真菌已控制田间、植株和病原真菌的生长环境，使病原真菌的萌发、生长和增殖得到有效的遏制，从而达到预防植物真菌病害之目的。
文档编号A01P3/00GK101946804SQ20101028725
公开日2011年1月19日 申请日期2010年9月20日 优先权日2010年9月20日
发明者何松庆 申请人:何松庆