一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法与流程

文档序号:12657752阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法,其特征在于,体细胞胚诱导方法包括:以闽楠未成熟种子为材料,剥取未成熟种子幼胚为外植体,进行体细胞胚的诱导、体细胞胚增殖培养产生次生胚、体细胞胚萌发生根步骤;

不定芽诱导方法包括:以闽楠未成熟种子为材料,剥取未成熟种子幼胚为外植体,进行胚性愈伤组织的诱导、胚性愈伤组织分化诱导不定芽、不定芽生根步骤,其中,

1)体细胞胚诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基:谷氨酰胺500mg/L、水解酪蛋白500mg/L、2,4-D 1.0-2.0mg/L、6-BA0.1-1.0mg/L,暗培养;

2)胚性愈伤组织诱导培养基为含有下述成分的MS固体培养基:谷氨酰胺500mg/L、水解酪蛋白500mg/L、6-BA0.1-1.0mg/L,IBA1.5mg/L,暗培养;

2)体细胞胚增殖培养基为含有下述成分的MS固体培养基:6-BA0.5-1.0mg/L、NAA0.1-1.0mg/L,暗培养;

3)胚性愈伤组织分化培养基为含有下述成分的WPM固体培养基:TDZ0.5-1.5mg/L、IBA 0.1-0.5mg/L,光培养。

4)体细胞胚萌发生根培养基为含有下述成分的MS固体培养基:6-BA 1.0mg/L、IBA 0.1-0.5mg/L,光培养。

5)不定芽生根培养基为含有下述成分的WPM固体培养基:6-BA 1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L,光培养。

2.根据权利要求1所述的闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法,其特征在于,将萌发生根的体细胞胚小苗及时转接到不含激素的MS培养基中进行壮苗培养,2-3个月后移栽。

3.根据权利要求1所述的闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法,其特征在于,所述幼胚处于球形胚阶段。

4.根据权利要求1-3任一项所述的闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法,其特征在于,幼胚接种前,将幼胚置于0.4M蔗糖溶液中,4℃预处理48h。

5.根据权利要求1-4任一项所述的闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法,其特征在于,所述体细胞胚诱导培养基为MS+水解酪蛋白500mg/L+L-谷氨酰胺500mg/L+2,4-D 1.5mg/L+6-BA 1.0mg/L;体细胞胚增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA 0.5mg/L;体细胞胚萌发生根培养基为MS+6-BA1.0mg/L+IBA 0.1mg/L。

6.根据权利要求1-5任一项所述的闽楠体细胞胚及不定芽诱导方法,其特征在于,所述胚性愈伤组织诱导培养基为MS+水解酪蛋白500mg/L+L-谷氨酰胺500mg/L+IBA 1.5mg/L+6-BA 1.0mg/L;胚性愈伤组织分化培养基为WPM+TDZ 1.5mg/L+IBA 0.5mg/L。

7.根据权利要求1-6任一项所述的闽楠体细胞胚发生方法,其特征在于,体细胞胚萌发生根阶段、胚性愈伤组织分化阶段以及不定芽生根阶段为光培养,光量为105μmol·m-2·s-1,光周期为8h·d-1

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