专利名称：抗生mi198物质、其制备以及线形动物和节肢动物的杀灭剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及被简称为MI198物质的一类新型抗生化合物，该化合物具有包括杀线虫活性、杀螨活性和杀昆虫活性的各种杀虫活性。本发明还涉及MI198物质的制备方法。本发明还涉及杀灭或控制线形动物门害虫(例如线虫)的药剂，和杀灭或控制节肢动物门害虫(如昆虫，蜱螨和螨新型)的药剂。这些药剂都含有作为有效成分的新型抗生MI198物质，它们可用作杀线虫剂、杀蠕虫剂、杀螨剂和/或杀虫剂。本发明还涉及用于生产新型MI198物质的新微生物。
众所周知各种大环内酯抗生素都具有抗菌活性。同时我们也知道属于大环内酯抗生的B-41物质具有杀虫和杀螨活性(特开昭48-60127，BP-B90336和USP-3984564)。据报道抗生物质B-41物质是很多不同的组分的复合物，这些组分通常认为是milbemycin类(USP4，155，352)。另外，在USP4093629和4134973中公开了各种milbemycin衍生物。进一步还知道，属于milbemycin类的B-41-D抗生生物具有杀螨抗蠕虫活性(USP4346171)。这些milbemycin是大环内酯抗生素的一类，其中某些milbemyicn是已知的杀灭寄生在动物，植物和人身上的线形动物门害虫(如线虫)的驱虫剂(见“JournolofAntibiotics”Vol.33，pp.1120～1127;Vol.36，pp.502～508及Vol.36，pp.509～515，以及BP-2056986)。这些milbenycin具有类似于本发明的新型抗生MI198物质的大环内酯结构。
人们总是希望发现或制造比已知杀虫剂包括抗细菌剂和抗真菌剂的性能更优越的新化合物，并为此目的进行着广泛研究。
本发明人为了找到新的适用的抗生素进行了深入的研究。结果我们成功地从在日本东京大田区收集的土壤样中分离出了属于吸水链霉菌种的菌株。然后本发明人发现该菌株可产物一种新型大环内酯类抗生素并将其命名为“MI198物质”。我们发现MI198物质有杀线虫、杀螨及杀虫活性。进一步研究的结果，我们发现MI198物质是一种混合物或复合物，它包括MI198-Z1，MI198-Z2，MI198-Z3，MI198-Z4，MI198-Z5，MI198-Z6，MI198-Z7，MI198-Z8，MI198-Z9，MI198-Z10，MI198-Z11，MI198-Z12，MI198-Z13。我们又成功地从MI198物质的复合物中分别分离出了Z1～Z13十三种组成物质。我们还发现这十三种物质Z1～Z13都具有杀线虫、杀螨和杀虫活性。然后，我们测定这13种组分物质的化学结构从而认定它们是新的化合物。我们也发现它们可用下述的通式(Ⅰ)来表示。
在本说明书中，当化合物被简称为MI198物质时，除非另有说明，一般是指从MI198-Z1物质到MI198-Z13物质的全体或其中一个，它们中两个或多个的混合物或它们的一个分离物质。
本发明的第一个方面是提供了抗生MI198物质，它是由下列通式表示的化合物
其中，R1为具有下列通式的酰基
其中R3，R4，R5和R6各自代表氢原子，甲基或乙基;R2为甲基，乙基或异丙基。
本发明的MI198物质具有类似于milbemycin的结构，但它却具有比包括milbemycin在内的具有抗寄生虫活性的所有商品抗生素都高得多的杀自由生活线虫(aenorhabditiselegans)的活性。此外，MI198物质还具有杀灭诸如棉叶螨的成虫和卵的强杀螨活性以及杀灭诸如尖音库蚊淡色亚种的昆虫的成虫，幼虫和卵的强杀虫活性。
MI198物质毒性极低，作为其主要成分的MI198-Z1和MI198-Z3物质在对小鼠(ICR，雌性)口服给药时的LD50值为2000mg/kg以上。
MI198物质是稳定的中性物质，它的0.1%的煤油或丙酮溶液在室温下保存2个月后，其杀线虫活性也不变低。MI198物质的1mcg/ml的水溶液在4℃下保存一个月后，其杀线虫活性也不变低。
因此，MI198物质和其他已知的杀线虫大环内酯抗生素一样，可用于消灭，驱除寄生在人和包括家畜、家禽和庞物(如猪、绵羊、山羊、牛、马、狗、猫和鸡)的内部或外部的线形动物，例如一般称为蠕虫的后生动物(metazoan)(和狗和鸡身上的蛔虫);MI198还可以用于消灭和驱除寄生在植物上的线形动物或节肢动物，以及消灭和驱除损害食物或纺织物的节肢动物。
本发明的包括在MI198物质中的从MI198-Z1到MI198-Z13的化学结构表示在下表Ⅰ中。
通过NMR分析已证实MI198-Z2，MI198-Z7和MI198-Z8物质各自包括这样的异构体，即R1表示的酰基为顺式和反式的异构体。因而，得到的MI198-Z2，MI198-Z7和MI198-Z8物质各自为酰基R1为顺式的化合物和酰基R1为反式的化合物的混合物。现在我们还不能把这些异构体分离开来。
本发明的MI198-Z1物质，MI198-Z2物质直至MI198-Z13物质的理化性质描述如下(a)MI198-Z1物质(1)外观白色无定形固体(2)质谱FDMSm/e627(M+1)EIMSm/e526，508，181，153(3)分子量626(4)UV吸收光谱表示于附
图1，λEtOHmax(ε)235nm(27，500)，243nm(27，700)，252nm(sh)(5)红外吸收光谱(KBr)表示于附图2(6)核磁共振谱400MHz在室温下在氘氯仿中测定的NMR谱表示于图3中。
(7)溶解性易溶于乙酸乙酯、丙酮、乙醇、甲醇、氯仿和苯中，难溶于水(8)薄层色谱Rf值0.24悬浮剂硅胶薄层板(20×20cm)“kiesel gel 60F254”(西德Merch公司产品)展开溶剂己烷/乙酸乙酯(3∶1)
(9)高效液相色谱保留时间9.12分柱子SenshuKagaku公司(日本)制SSC-ODS-161溶剂75%乙腈水溶液流速1.5ml/分钟检测UV240nmb)从MI198-Z2物质到MI198-Z13物质(1)MI198-Z2、MI198-Z3、MI198-Z4、MI198-Z5、MI198-Z6、MI198-Z7、MI198-Z8、MI198-Z9、MI198-Z10、MI198-Z11、MI198-Z12、和MI198-Z13物质各自为无定形白色固体，该固体易溶于乙酸乙酯、丙酮、甲醇、乙醇、氯仿和苯中，但难溶于水。
(2)从MI198-Z2物质到MI198-Z13物质的EI质谱的数据列于表2中，其中有各自的分子式以及MI198-Z1物质的数据。
(3)从MI198-Z2物质到MI198-Z13物质各自在乙醇溶液中得到的UV吸收光谱的数据和它们各自在氯仿溶液中得到的红外光谱数据列于表3，同时还列有MI198-Z1物质的数据。
(4)从MI198-Z2物质到MI198-Z13物质的薄层色谱的Rf值(20×20cm的硅胶薄层板“kiesel gel 60 F254”，用不同的展开剂体系展开)列于表4，同时还列有MI198-Z1物质的值。
表4
展开剂Ⅰ四氯化碳/二氧六环(85∶15)展开剂Ⅱ苯/乙酸乙酯(80∶20)展开剂Ⅲ己烷/乙酸乙酯(75∶25)展开剂Ⅳ己烷/丙酮(70∶30)展开剂Ⅴ氯仿/乙酸乙酯(75∶25)
下面描述本发明MI198物质的制备将属于吸水链霉菌种的本发明人从土壤样中分离出来的新菌柱MI198-fF29进行培养，从其培养物，特别是培养菌体中可得到MI198物质。当首先用合适的有机溶剂对培养物，特别是培养菌体进行提取时，可以得到由MI198-Z1(主要成分)和MI198＝Z2及MI198-Z13(次要或辅助组分)组成的MI198-Z物质复合物。当将MI198物质复合物，即混合的MI198-Z物质送往硅胶薄层色谱和/或高效液相色谱时，MI198物质的复合物被分成单个的组分物质，即MI198-Z1、MI198-Z2、MI198-Z3、MI198-Z4、MI198-Z5、MI198-Z6、MI198-Z7、MI198-Z8、MI198-Z9、MI198-Z10、MI198-Z11、MI198-Z12和MI198-Z13。
本发明的第二个方面提供了一种制备具有上述通式(Ⅰ)的抗生MI198物质的方法，该方法包括在有氧条件下，在含有可同化的碳源和可同化的氮源的培养基中培养属于链霉菌属的可产生MI198物质的菌株，直至在培养物中产生并聚集相当量的MI198物质，然后，再从得到的培养物中回收具有通式(Ⅰ)的抗生MI198物质。
用于本发明第二方面所述方法的产生MI198物质的合适菌株的一个例子是上述的MI198-fF29。该新菌株是1983年8月从在东京大田区萩中公园收集的土壤样品中分离出来的放线菌，菌株编号为MI198-fF29。MI198-fF29的微生物学性质如下。
1，形态学在显微镜下，可以得到MI198-fF29菌株在其分枝的基层菌丝上伸出气生菌丝。气菌丝形成螺旋线，看不到轮生枝和孢子囊。由于用常规电子显微镜来观察该菌株，难以辨别每个孢子，因此采用了冷冻系统。这样发现在气生菌丝的顶部形成具有10个以上孢子的链，孢子的大小约为0.7～0.8×0.9～1.0μm，其表面呈突起状。
2，在各种培养基中的生长特征在括号中记载的颜色的标准为美国Container公司的“Colorharmorymanual”。
(1)蔗糖硝酸盐琼脂培养基(27℃培养)在无色～浅黄色(2gc，Bamboo)生长物上稀疏地形成白色气生菌丝。未发现可溶性色素。
(2)葡糖天冬酰胺琼脂培养基(27℃培养)在浅黄(29c亮到中等黄褐色～11/2gc，灰黄色)～棕黄色的生长物上，形成淡黄灰(11/2ca，奶油色)～明灰褐色(2ge，林荫色～2ig，棕褐暗蓝灰色)的气生菌丝。可溶性色素为淡黄色。培养2周后，发现气生菌丝发生吸湿。生长物和可溶性色素不显示由HCl或NaOH造成的色泽变化。
(3)甘油-天冬酰胺培养基(ISP-培养基5，在27℃下培养)在浅黄～棕黄色生长物上，形成淡黄灰～亮棕灰的气生菌丝。可溶性色素为淡黄色。培养约2周后，发现气菌丝发生吸湿。
(4)淀粉无机盐琼脂培养基(ISP-培养基4，27℃培养)在浅黄(11/2gc，灰黄色)～暗黄色(11/2ne，古金色)生长物上，形成淡黄灰(1ea，鲜黄色)～亮棕灰色(2ge，林荫色～2gi，棕褐暗蓝灰色)气生菌丝。在培养的后期气生菌丝发生吸湿。可溶性色素呈淡黄色。
生长物和可溶性色素不显示任何由HCl或NaOH造成的颜色变化。
(5)酪氨酸-琼脂培养基(ISP-琼脂培养基7，27℃培养)在浅黄(2gc，亮到中等黄褐色～11/2ic，浅古金色)～暗黄色的生长物上，形成淡黄灰(1ea，鲜黄色)～亮棕灰色(2ge，林荫色)～亮灰(2fe，林荫灰色)的气生菌丝。可溶性色素在培养初期呈浅粉色，在培养的后期变为独特的强暗黄色。生长物和可溶性色素不显示任何由HCl或NaOH造成的颜色变化。
(6)营养琼脂培养基(27℃培养)在浅黄(2gc，亮到中等黄褐色)生长物上，形成白色气菌丝。无可溶性色素。
(7)酵母-麦芽琼脂培养基(ISP-培养基2，27℃培养)在浅黄(11/2ic，Lt.，古金色)～黄棕色的生长物上，形成淡黄灰(11/2ca，奶油色)～亮灰(2fe，林荫灰色)～亮棕灰色(2ig，棕褐暗蓝灰色)的气生菌丝。可溶性色素为黄色(11/2ga，黄油色)。在培养的后期，气生菌丝发生吸湿。生长物和可溶性色素不显示任何由HCl或NaOH造成的颜色变化。
(8)燕麦粉琼脂培养基(ISP-培养基3，27℃培养)在无色～浅黄色的生长物上，形成浅黄灰～亮灰(3fe，银灰色)～亮棕灰色(3ig，米褐色)的气生菌丝。有时该气生菌丝会发生吸湿。可溶性色素呈轻微的淡黄色。
(9)甘油-硝酸盐琼脂培养基(在27℃下培养)在无色～浅黄色的生长物上，形成白色气生菌丝。没有可溶性色素。
(10)淀粉琼脂培养基(在27℃下培养)在无色～浅黄色的生长物上，形成白色气生菌丝。没有发现可溶性色素。
(11)苹果酸钙-琼脂培养基(27℃下培养)在无色～浅黄色的生长物上，形成极薄的白色气生菌丝。没有发现可溶性色素。
(12)葡糖(含有滤纸碎片的合成液，27℃培养)
生长物无色，气生菌丝灰白～亮棕灰色。没有可溶性色素。
(13)明胶穿刺培养在15%单纯的明胶培养基中(20℃和24℃下培养)，在无色～浅黄生长物上，形成薄的白色气生菌丝。在萄糖-胨-明胶培养基中(27℃下培养)，在浅黄色的生长物上，没有气生菌丝形成。在两种培养基中都未发现可溶性色素。
(14)脱脂乳(37℃下培养)生长物为浅黄色(2gc，亮到中等黄褐色)。即没有形成气生菌丝又没有发现可溶性色素。
3，生理学性质(1)生长温度范围在使用淀粉-无机盐琼脂培养基(ISP-培养基4)及在20℃，24℃，27℃，30℃，37℃和50℃下培养菌株的试验中，除37℃和50℃外，在其他温度下都能生长。但生长的最佳温度范围约为27℃～30℃。另外，在脱脂乳中，在37℃下可生长。
(2)明胶液化(在15%的单纯明胶培养基中，在20℃及24℃下培养;在萄糖-胨-明胶培养基中，在27℃下培养)在24℃下在15%单纯明胶培养基中的大约在培养的第10天，开始液化，在萄糖-胨-明胶培养基中约在培养的第7天开始液化。程度中等。另外，在20℃培养的15%的单纯明胶培养基的情况下，约在培养的第18天，出现相当弱的液化。
(3)淀粉的水解(淀粉-无机盐琼脂培养基及淀粉琼脂培养基都在27℃下培养)在淀粉-无机盐琼脂培养基中，培养后约第5天，在淀粉-琼脂培养基中，培养后约第7天，开始水解，水解程度中等。
(4)脱脂乳的凝固和胨化(脱脂乳，在37℃下培养)培养后约第7天呈现凝固状，2～3天后完成凝固，然后开始胨化。胨化程度中等。
(5)类黑素色素的形成(胰胨-酵母肉汤，ISP培养基1;胨-酵母-铁琼脂培养基，ISP培养基6;酪氨酸-琼脂培养基，ISP培养基7;分别在27℃下培养)在各培养基中类黑素的形成都呈阴性。
(6)各种碳源的利用(Pridham-Gottlieb琼脂培养基，ISP培养基9;在27℃下培养)D-葡萄糖，L-阿拉伯糖，D-木糖，D-果糖，蔗糖，肌醇，鼠李糖，棉子糖和D-甘露醇可用于生长。
(7)苹果酸钙的液化(苹果酸钙琼脂培养基，在27℃下培养)苹果酸钙的液化大约发生在培养的第15天，液化的程度从中等强烈。
(8)硝酸盐的还原(含0.1%硝酸钾的胨水溶液，ISP培养基8，在27℃下培养)还原反应呈阳性。
(9)纤维素的分解(含有滤纸碎片的合成试验溶液，在27℃下培养)纤维素的分解呈阴性。
综上所述的微生物学特性，MI198-fF29菌株的形态学特征在于气生菌丝形成螺旋形，但是轮生式和孢子囊均未观察到。此外，成熟孢子链具有10个或更多的孢子，并且孢子表面有庞状物。在各种培养基中的浅黄色到棕黄色或暗棕色的生长物上茂盛地形成淡灰黄色到亮灰色到亮灰褐色的气生菌丝。可溶性色素的颜色为强烈的暗黄色或轻微的淡黄色，或有时根本不产生颜色。类黑色素的形成呈阴性。淀粉水解活性和蛋白质分解活性的程度是适中的。
存在于细胞壁中的2，6-二氨基庚二酸为LL-型。
鉴于上述微生物学特性，我们断定MI198-fF29菌株属于链霉菌属。当根据MI198-fF29菌株的特性来寻找类似的已知品种时，吸水链霉菌(Streptomyceshygnroscopicus)[文献1，“国际系统细菌学杂志”，第22卷，307页(1972);文献2，“放线菌”，S.A.Waksman著，第2卷，230页(1961)]看来与MI198-fF29菌株相似，同样，吸水链霉菌aureolacrimosus亚种(Strepromyceshygroscopicussubsp.aureolacrimosus)[文献3，“Milbemycins，一类新的大环内酯抗生素生产生物体及其突变体”;“抗生素杂志”，第36卷，438页(1983)]所产生的抗生素“Milbemycins”与本发明的MI198-fF29菌株所产生的MI198物质相似，可认为该菌株是另一个类似的品种。然后，我们对MI198-fF29菌株的特性与在如上文献中所述的吸水链霉菌和吸水链霉菌aureolacrimosus亚种的特性作了对比研究。这些比较的结果总结于下面的表5中。
表5MI198-fF29吸水链霉菌气生菌丝的性质形成螺旋形形成螺旋形形成螺旋形孢子表面有庞状物有庞状物有庞状物(光滑＊)气生菌丝的颜色淡灰黄色～灰棕色～灰棕色～亮灰色～带有淡棕红(黄色斑点)亮灰棕色色的明灰色气生菌丝的吸湿性+++生长物的颜色淡黄色～(生长物反淡黄色～棕黄色，面的颜色)深黄棕色暗黄色无色～淡黄色，淡橄榄棕色可溶性色素无～淡黄色无或微黄色黄色～～暗黄色亮橄榄灰色类黑素的形成在ISP培养基1中---在ISP培养基6中---在ISP培养基7中---淀粉水解++＊+脱脂乳的凝固+-＊+(弱)脱脂乳的胨化++＊+(弱)
明胶液化在15%单纯明胶培养基中 + +＊+在葡萄糖-胨-明胶培养基中+硝酸盐的还原 + -＊+碳源利用＊＊D-葡萄糖++++L-阿拉伯糖+±+D-木糖+±+D-果糖++++蔗糖+-++肌醇+±+鼠李糖++++棉子糖+-+甘露醇++++＊;吸水链霉菌按照文献2＊＊;+，++可利用的，±不肯定，-不可利用的从上面的表5可以看出，MI198-fF29菌株与吸水链霉菌和吸水链霉菌aureolacrimosus亚种极为相似。但从生长物和可溶性色素独特的，强烈的黄色，脱脂乳的凝固，硝酸盐的还原，蔗糖和棉子糖的利用等方面，可断定MI198-fF29菌株与吸水链霉菌aureolacrimosus亚种更为类似。另一方面，根据以下特性可区别吸水链霉菌aureolacrimosus亚种与吸水链霉菌(1)在气生菌丝上沉积着金黄色的小水滴，(2)生长物颜色为棕黄色，(3)可用蔗糖和鼠李糖作为碳源，(4)吸水链霉菌aureolacrimosus亚种可产生“Milbemycins”，参照上述文献可找出这些不同点。据观察MI198-fF29菌株具有全部上述四个特征，因此认定该菌株为吸水链霉菌aureolacrimosus亚种，也就是MI198-fF29。
MI198-fF29菌株已于1987年9月5日贮存在日本工业科技厅“发酵研究所”，贮存号为“FERMP-9566”，现按布达佩斯条约进行了贮存，贮存号为“FERMBP-2059”。
在实施本发明的第二方面MI198物质的生产方法时，可用已知的培养放线菌属微生物的普通方法培养产生MI198物质的菌株。MI198物质主要在所培养的细胞中产生和积累。在此过程中，最好在适宜的条件下通过培养MI198-fF29菌株来生产MI198物质。用于培养的培养基可含有碳源，氮源和无机盐等，这些成份通常用于放线菌属微生物的培养。适用的碳源包括那些已知的材料，诸如甘露糖，葡萄糖，麦芽糖，糊精，淀粉，小米，糖浆和豆油。适用的氮源包括那些已知的材料，诸如大豆粉，肉膏，胨，酵母膏，干酵母，NZ-胺，硝酸盐，铵盐等。可用于MI198物质的工业化生产的生产性培养基可含有适宜和谷物(如大米，小麦和大麦)，可以是谷粒，也可以是谷粉，以及适宜的氮源，也可适当地加入无机盐。
培养可在有氧条件下进行，培养温度可以在25-30℃范围内，最好是27℃～30℃，培养时间可为5-14天。
总之，可利用MI198物质是稳定的中性物且难溶于水而从产生MI198物质的微生物培养物中回收MI198物质。
从产生MI198物质的微生物培养物中回收MI198物质最好采用下列方法。将得到的培养物或液体培养基过滤或离心以收集培养的细胞，用可与水混溶的有机溶剂(如低级醇类或丙酮)萃取所收集的细胞，然后蒸馏萃取液以除去有机溶剂，所得浓缩液与不能与水混溶的有机溶剂(如乙酸乙酯)，以及水搅拌混合，所得液体混合物分成水相和含MI198物质的有机相，接着浓缩有机相至干，得到的残余物为MI198物质的粗产物。在该方法中，得到的干燥残余物一般含有大约10%的MI198物质(为复合物)，只要产生MI198的微生物已适当地进行了培养。实际上为了某些目的可直接应用这种干燥残余物作为粗的MI198物质(复合物)。
为了提高所得粗MI198物质(复合物)的纯度，可用非极性烃类(如煤油)进一步萃取，和/或通过硅胶柱层析法提纯含有粗MI198物质的上述残余物。必要的话，可使这种部分纯化的MI198物质在低级烷醇(如甲醇和乙醇)中通过装有分子筛剂(如“葡聚糖凝胶LH20”的柱来进一步提纯所制得的MI198物质的部分纯化产物，这样MI198物质纯化产物的纯度可达95%或更高(仍以含MI198-Z1物质-MI198-Z13物质复合物形式存在)。
为了从MI198物质的复合物或混合物中分离出单独存在的各成分物，即MI198-Z1物质-MI198-Z13物质，可采用高效液相色谱法(例如，在硅烷化硅胶反向柱上用乙腈和水的混合溶剂展开)，该法也可与硅胶薄层层析法结合使用。
按照本发明第二方面所述方法的特定实施方案，可用下述方法获得含有MI198-Z1物质，MI198-Z2物质，MI198-Z3物质，MI198-Z4物质，MI198-Z5物质，MI198-Z6物质，MI198-Z7物质，MI198-Z8物质，MI198-Z9物质，MI198-Z10物质，MI198-Z11物质，MI198-Z12物质，和MI198-Z13物质的复合物或混合物在含有可同化碳源和可同化氮源的培养基中，在有氧条件下，于25～35℃培养吸水链霉菌aureolacrimosus亚种(FERM BP-2059)直到在培养物中产生和积累这些抗生素的复合物或混合物，然后从培养物中回收这些抗生素的复合物或混合物，并根据需要通过一种或多种色谱法将这些抗生素的复合物或混合物分离成单独存在的组成物Z1～Z13。
MI198物质可适当地采用下列方法(1)或(2)来测定。
(1)生物测定法将200-300条L阶段的线虫(Caenorhabditis elegans N2(IBR)品系)的幼虫和成虫，悬浮于1ml含有0.3%NaCl和0.25%Bacto-胨(Difico公司产品)的水溶液(调PH至7.0)中并使之于25-27℃自由移动。向该水溶液中，加入适量的含待测MI198物质的试验溶液，放置40分钟后，在立体显微镜下计数溶液中可自由移动的线虫数目。
(2)HPLC测定法对含有待测MI198物质的溶液进行高效液相色谱(HPLC)分析，色谱柱为日本SenshuKagaku公司生产的SSC-ODS-161反相柱(直径为56mm，高度为10cm，3μ)，展开剂为75%乙腈-水混合溶剂，流速为1.5ml/分钟。
用紫外线吸收检测仪测定含MI198物质的洗脱液在240nm波长处的吸收百分率，从而可测得MI198-Z物质在溶液中的浓度。在上述高效液相色谱条件下，MI198物质各组分Z1-Z13的保留时间(Rt)见下面的表6。
表6MI198-Z物质保留时间的组成成分(分钟)Z19.12Z211.22Z311.97Z412.56Z511.99Z616.61Z714.10Z820.90Z916.47Z1016.47
Z1117.19Z1217.19Z1319.85色谱柱SSC-ODS-161(装有硅烷化硅胶的反相色谱柱，为日本SenshuKagaku公司的产品)溶剂75%乙腈-水流速1.5m/分钟检测在240nm处用UV检测如前所述，本发明的MI198物质显示出抵抗并杀伤寄生于动物，植物或人体内的线虫，尤其是线形动物门的成虫和幼虫的高活性，也显示出抵抗并杀伤害虫和螨，特别是节肢动物的成虫，幼虫和卵的高活性，但它对哺乳动物的急性毒性较弱。因此，本发明的MI198物质适于用作杀昆虫剂，抗线形动物门和节肢动物门害虫的杀寄生虫剂和/或驱虫剂。
因此，在本发明的第三方面，提供一种抵抗能够寄生于人，动物或植物体内的节肢动物门害虫的成虫和幼虫的药剂，其有效成分为抗生素MI198物质，该物质以下列通式表示
其中R1为酰基，结构式如下
R3，R4，R5和R6各自代表氢原子，甲基或乙基;R2代表甲基，乙基或异丙基。
本发明第三方面所述的药剂或杀虫剂可以组合物的形式存在，有效成分为MI198物质，即通式(Ⅰ)化合物，与适用的液体或固体载体组合在一起。
本发明的第四个方面是提供一种消灭节肢动物害虫的成虫、幼虫或卵的药剂，该药剂包括由如下通式所表示的作为活性组分的MI198物质
其中，R1为具有下式的酰基
(其中，R3、R4、R5和R6各自代表氢原子、甲基或乙基)，R2代表甲基、乙基或异丙基。
本发明第四方面的药剂，包括杀螨剂或杀昆虫剂，可以组合物的形式存在，该组合物中含有作为活性组分的MI198物质(即通式(Ⅰ)化合物)，以及适用于该活性组分化合物的固体或液体载体。
本发明第三和第四方面所提供的药剂可以含有MI198物质的粗产品或纯化产品作为活性组分，具体地讲，本发明的药剂可含有至少一种MI198-Z1物质，以及MI198-Z2至MI198-Z13物质作为活性组分。这些物质可以是粗产品或纯化产品。可以根据常规的配制方法，即根据其用途将MI198物质，即MI198-Z1至MI198-Z13物质(既可单独使用，也可以其混和物形式使用)与适宜的固体或液体载体混合，制备各种制剂。此外，如果需要，可以通过加入其它辅剂将MI198物质配制成片剂、粉剂、粗粉剂、颗粒剂、细颗粒剂、可湿性粉剂、乳油、悬浮液和胶囊剂等。还可以任何纯度将MI198物质部分提纯并以得到的部分纯化的MI198物质作为活性成分。如果以制得的粗的或部分纯化的产品作为活性成分，所要进行的提纯处理的程度只要能使其以适当的活性化合物浓度达到显著的杀虫活性或效力即可。本身为培养基的制剂或是经简单加热灭菌或干燥的培养基制剂也可经口服给药对家畜或家禽进行治疗。
适宜的固体载体可以是那些常用的固体载体，例如无机材料如粘土、滑石、硅石、硅藻土、高岭土、膨润土、碳酸钙和合成硅酸钙，天然或合成树脂如curoman树脂、醇酸树脂和聚氯乙烯，蜡类如巴西棕榈蜡、石蜡，以及坚果的外壳、大豆粉等。
适宜的液体载体的实例包括水，醇类如乙醇、异丙醇和1，2-亚乙基二醇，乙二醇醚如乙二醇单苯醚和二甘醇一乙醚，酮类如丙酮、甲基异丁基酮、环己酮和苯乙酮，醚类如四氢呋喃和二恶烷，芳烃如苯、甲苯、二甲苯和甲基萘，氯代烃如三氯乙烷和四氯化碳，石油馏分如煤油和轻质油等。
根据本发明的第三和第四方面，可以将表面活性剂掺入杀虫剂中以改进其性能，如改进其乳化性，分散性，可湿性和伸展性。为此目的，可以使用一种或几种离子型或非离子型表面活性剂。适宜的阴离子表面活性剂的实例包括木素磺酸的钠盐或钙盐、油酸的钠盐或钾盐、十二烷基磺酸钠，十二烷基苯磺酸的钠盐或钙盐等。
适宜的阳离子表面活性剂的实例包括高级脂肪酸胺、高级脂肪酸胺与环氧乙烷的缩合产物等。
适宜的非离子表面活性剂的实例包括脂肪酸的甘油酯、脂肪酸的蔗糖酯、高级脂族醇与环氧乙烷的缩合产物、高级酯肪酸与环氧乙烷的缩合产物、环氧乙烷与1，2-环氧丙烷的共聚物等。
本发明第三方面的杀线性蠕虫的杀虫剂可以经口服作为杀线虫(特别是寄生于人体或动物的蛔虫或蠕虫)的杀寄生虫药或杀蠕虫剂使用。此外，本发明的第三和第四方面的杀虫剂可以任何常规的方式用于农业和园艺。
本发明的MI198物质对下述螨类的成虫和卵(包括蛛螨)具有很高的杀虫活性寄生在果树、蔬菜和花瓣上的叶螨(如双斑蛛螨)，全爪螨(如欧洲红螨)和刺螨(如桔赤螨)，以及寄生在动物如家禽和宠物上的硬蜱科、皮刺螨科和疥螨科螨。此外，MI198物质还对蚜虫、鳞翅目害虫的幼虫、黄麻根瘤线虫和phizoglyphus螨(如球茎根螨)等具有很高的杀虫活性。此外，MI198物质还对寄生在动物和家禽体外的外寄生害虫如羊鼻蝇(Oestrus)、丝光绿蝇(Lucilia)、牛皮蝇(Hypoderma)、虻(Gautrophilus)、蚤和虱具有很高的杀虫活性，对有害环境的居家害虫如蟑螂、德国虫和家蝇也有很高的杀虫活性。
此外，本发明的MI198物质对可侵袭动物、家禽和宠物如猪、绵羊、山羊、牛、马、狗、猫和鸡的寄生害虫具有较高的杀寄生虫活性，这些寄生虫属于下列属血予线虫属;结节线虫属;类圆线虫属(Strongylondes);毛圆线虫属;(Trichostrongylus);夏氏线虫属;异刺线虫属;胃线虫属;鞭便虫属;弓蛔虫属;细颈属;圆线虫属;鸡蛔虫属;库柏丝虫属;Trichonema;尖尾线虫属;蛔虫属;网尾线虫属;钩口线虫属;Bunostomum;毛细线虫属;钩虫属;弓蛔线虫属;和Parascaris。
还有，本发明的MI198物质对各种能感染人类、侵袭人的消化道的各种寄生物具有较高的杀寄生虫活性，这些寄生虫属于下列属钩口线虫属;
板口线虫属;
蛔虫属;
类圆线虫属;
毛线虫属;
毛细线虫属;
鞭虫属;和蛲虫属。
当本发明的MI198物质在农业或园艺上作为杀昆虫剂、杀螨剂或杀线虫剂使用时，可用任何常规的方法将其配制成可湿性粉剂、乳油、颗粒剂、片剂或粉尘剂等。可以用水将可湿性粉剂和乳油稀释，制备含有有效量(如5-100ppm)活性MI198物质的可喷洒溶液，然后将其喷洒在被感染的植物和/或喷洒在植物生长的土壤上。作为杀线虫剂时，可将颗粒剂和片剂直接施用到被感染的植物生长的土壤里。
当将MI198物质作为动物(包括人)和家禽的杀寄生虫药时，最好以含有有效量(如0.01-0.5%(重量)]MI198物质的口服液、片剂、丸剂或胶囊剂的形式口服。MI198的适宜剂量将随需治疗的动物的种类、寄生物感染的类型、感染的程度以及其它各种因素而变化，但口服时，0.01-100毫克/公斤剂量的MI198物质对于服用者来说是可以接受的。局部施用MI198物质也是可行的，例如将含有有效量的MI198物质的乙醇或二甲亚砜溶液直接喷洒在动物的表皮上。
本发明的另一方面是提供一种新的微生物吸水链霉菌aureolocrimosus亚諱I198-fF29(FERMBP-2059)。
本发明的另一方面是提供将MI198物质用于杀寄生虫医药组合物或兽药组合物中的用途。
现通过下述实施例和试验实例说明本发明。
实施例1将铂环量的吸水链霉菌aureolacrimosus亚种MI198-fF29菌株(FERMBP-2059)从其琼脂斜面培养基中接种到容积为1升的盛有200毫升经过灭菌的含1%可溶性淀粉和0.2%酵母膏的培养基(PH值调节至7.0)的Ruex玻瓶中，然后在30℃下静止培养13天。
在25个Ruex瓶中，用上述方法于同样的培养基中培养MI198-fF29菌株。将这样得到的肉汤汇集在一起，过滤收集温育的微生物菌丝。将菌丝与300毫升乙醇混合，即使乙醇的体积为湿细胞体积的2倍，然后将细胞的乙醇悬浮液搅拌30分钟，随后过滤，以滤液的形式得到含MI198物质的乙醇萃取液。
将上述萃取过程重复两次。将乙醇溶液(萃取液)合并，在旋转式蒸发器中浓缩，然后用300毫升水稀释，在用一蒸发器中再进一步浓缩至体积为200毫升，由此得到乙醇残存量小于5%的浓缩液。然后，将该浓缩液与加入的150毫升乙酸乙酯一起摇动，使所有的油性物质溶解并转移到乙酸乙酯层中。分离出乙酸乙酯层。用50毫升乙酸乙酯进一步萃取余下的水层，将得到的乙酸乙酯萃取液与前面分离出来的乙酸乙酯层合并。用无水硫酸钠干燥合并后的乙酸乙酯溶液，然后蒸发干燥，得到450毫克含MI198物质的粗产品。以检定的MI198-Z1物质的检定含量为基准计算，该粗产品含7%MI198物质，MI198-Z1物质为MI198物质(复合物)的主要成分。
当使用47克硅胶的柱子(Kiesel胶60，MerckCo.的产品，用氯仿装填)进行柱色谱分离时，将具有较低杀线虫活性的副馏分洗脱出并弃掉。随后，洗脱出含有需要物质的主馏分，其总体积为35毫升，这一馏分是在445毫升洗脱液收集体积与410毫升洗脱液收集体积之间取得的。当用氯仿-甲醇(10∶1)溶剂体系进一步进行柱分离时，得到的是具有较低杀线虫活性的亲水馏分。
将上述洗脱液中的主馏分浓缩干燥，得到76毫克固体产物。根据检定的MI198-Z1物质的量，计算得到该固体产物含45%MI-198物质。
实施例2将铂含量的MI198-fF29菌株从其琼脂斜面培养基中接种到100个容积为500毫升、每瓶中盛有50毫升含1%葡萄糖、1%淀粉、0.75%肉汁、0.5%酵母膏和0.3%氯化钠的培养基(PH＝7.0)的振摇玻瓶中，在20℃下振摇培养10天。过滤合并后的培养基肉汤收集微生物菌丝。将菌丝与1升的异丙醇(体积为湿菌丝的3倍)一起搅拌1小时后，将混合物吸滤，保存滤液。将该滤液，即异丙醇萃取液，在旋转式蒸发器中浓缩，然后与一定体积的水混合，再浓缩，得到300毫升混合物，该混合物含有水和焦油状物质。将该混合物与200毫升乙酸丁酯一起振摇进行萃取后，将混和液浓缩。分离于乙酸丁酯中的萃取液，然后用同样的方法用150毫升乙酸丁酯再一次萃取残余的焦油状物质。将两次得到的乙酸丁酯萃取液(萃取层)合并，蒸发干燥。得到860毫克固体粗产物，如以滴定检测的MI198-Z1物质的量计算的话，该粗产物含9%MI198物质。
实施例3将铂含量的MI198-fF29菌株从其琼脂斜面培养基中接种到2个体积为2升、每瓶中盛有400毫升含1%甘露糖、1%糊精、0.2%酵母膏、0.5%奶粉、0.2%氯化钠和0.1%硫酸镁(7H2O)的培养基(PH＝7.0)的振摇玻瓶中，在28℃下振摇培养5天。将得到的种子培养移到盛有20升同样组成的培养基的容积为30升的瓶培养桶中，在通气条件下于28℃进行好气培养7天。
将得到的培养基肉汤过滤，收集微生物菌丝。将菌丝与2.5升异丙醇(其体积为湿细胞的3倍)混和后，搅拌1小时以进行萃取，将该混和物吸滤，得到滤液。将滤液，即异丙醇中的萃取液，在旋转式蒸发器中浓缩，用水稀释，再浓缩，最后得到600毫升浓缩混合物。向浓缩混合物中分批加入500毫升乙酸丁酯进行萃取，随后分离乙酸丁酯相(萃取液)。用无水硫酸钠干燥水相与乙酸丁酯相内表面之间的乳化相层，得到澄清的宜岫□ゲ恪＝幸宜岫□ゲ悖ㄝ腿∫海┖喜ⅲ舴⒏稍铩 由此得到1.95克含有MI198物质的棕色粗产物，如果以滴定检测的MI198-Z1物质计算的话，该产物含有7%MI198物质。向该粗产物中加入200毫升石油醚，搅拌2小时进行萃取。将固体残余物与100毫升石油醚一起再搅拌1小时，将石油醚中的萃取液合并，蒸发干燥。
得到1.05克作为残余物的棕色焦油状物质，如果以滴定检测的MI198的含量计算的话，该焦油状物质含10%MI198。
实施例4
用硅胶柱(23克Kiese胶60F254，用甲苯装填)对实施例1中通过浓缩至干从硅胶柱上洗脱的洗脱液主要馏分而得到的76克固体产物进行柱色谱分离，用甲苯-丙酮(4∶1)混合溶剂作展开剂展开。
按5毫升1份收集硅胶柱的洗脱液。对每份馏分进行硅胶薄层色谱分离。在该薄层色谱硅胶板上，用紫外线照射，以检测出显色明显的物质。检测发现，按照洗脱顺序，每种活性馏分分别含有28-脱氧-25-甲基milbemycinB、28-脱氧-6-羟基-25-甲基milbemycinB、milbemycinα2，MI198-Z物质的复合物(11.8毫克)和milbemycinβ。将含有MI198-Z物质复合物的馏分浓缩，得到含有MI198-Z1至Z13物质复合物的黄色油状产物。
为了从粗MI198物质复合物(即上述黄色油状物)中分离出Z1至Z13成分，用两块硅胶板(Kiesel胶60 F254板，每块板的尺寸为20厘米×20厘米×0.5毫米，西德Merck Co.的产品)进行制备性硅胶薄层色谱分离(用己烷-乙酸乙酯(3∶1)混合溶剂展开3次)，得到6.8毫克MI198-Z1。
在上述制备性硅胶薄层色谱分离中，没有分离出MI198-Z2、MI198-Z4和MI198-Z物质。因此，用反相色谱柱(SSC-ODS-762硅烷化硅胶柱，日本Senshu Kagaku Co.的产品)对含有粗MI198物质复合物的黄色油状产物进行高性能液相色谱分离和提纯(以75%乙腈-水作展开剂展开，用240nm紫外线检测)。将MI198-Z2、MI198-Z3和MI198-Z4物质按上述顺序分别从洗脱液的不同馏分中分离出来。将每一馏分浓缩至干分别得到1.1毫克MI198-Z2、2.3毫克MI198-Z3和0.5毫克MI198-Z4。
实施例5按照上述实施例4的柱色谱分离步骤，在更大的规模上，将实施例1中得到的洗脱液的主馏分在硅胶柱上进行色谱分离，得到835毫克含有MI198-Z物质复合物的粗产物，该粗产物为黄色油状。对该黄色油状产物(含有粗MI198物质复合物)用反相色谱柱(SSC-ODS-762柱，Senshu Kagaku Co.产品)进行高性能液相色谱分离(以75%乙腈-水作展开剂展开，用2nm紫外线检测)，再用硅胶板(Kiesel胶60 F254板，尺寸为20厘米×20厘米×0.5毫米，Merck Co.的产品)进行制备性硅胶薄层色谱分离(以己烷-乙酸乙酯(3∶1)作展开剂展开3次)，以从粗MI198物质复合物中分离出次要成分，即MI198-Z5至MI198-Z13。
结果，得到8.1毫克MI198-Z5、2.8毫克MI198-Z6、3.9毫克MI198-Z7、1.4毫克MI198-Z8、4.3毫克MI198-Z9、4.1毫克MI198-Z10、1.8毫克MI198-Z11、3.3毫克MI198-Z12和5.0毫克MI198-Z13。
实施例6将大约20克脱壳的、已用水通霄浸泡而被水充分浸渍的稻粒或麦粒置于容积为100毫升的锥形瓶中，然后用棉塞密封，于120℃下在釜中消毒3次，每次30分钟。
冷却至室温后，将1毫升MI198-fF29菌株(FERMBP-2059)的孢子悬浮液接种到已消毒的稻粒或麦粒上，该悬浮液是通过在1毫升蒸馏水中悬浮铂环量的MI198-fF29株的斜面培养基而制备的。将稻粒或麦粒与上述悬浮液充分混合，由此均匀地接种MI198-fF29菌株的菌丝体。接种后，在27℃下静止温育12～15天，使菌丝很好地生长以生成芽孢。
得到的培养物，即MI198-fF29菌株已经生长到生成芽孢的阶段的接种过的稻粒或麦粒可作为杀寄生虫药被动物口服。如果需要，们翱 用高频电磁波照射灭菌。此外，可用适宜的有机溶剂如丙酮、甲醇和乙醇萃取该培养物，制备含MI198物质的萃取液，然后浓缩至干燥。这样得到的固体物可作为活性组分配制在农业制剂或兽药制剂中。
用下述试验例说明MI198物质的生物活性。
试验例1用水将MI198-Z物质在甲醇中的0.1%溶液稀释100倍，制备含有10mcg/ml的MI198-Z物质的溶液。然后，将适当不同量的MI198-Z物质溶液加到1毫升含活性Caenorhabditiselegans线虫的水悬浮液中，轻微振荡后，于26℃下静置40分钟。在立体显微镜下，计数处理后仍有活动能力的线虫数目和试验的线虫总数。计算了仍有活动能力的线虫数占试验线虫总数的百分比(即活动线虫的游动率(%))。两次重复试验的平均值示于表7。为了对比，以相同的方式试验了milbemycins。
测定了有活动能力的存活线虫数占试验线虫总数的百分比，即活动线虫的死亡率(%)。两个重复试验的平均值示于下面表7。为便于对比，对milbemycins是以相同的方式试验的。
表7
试验例2用水稀释含有0.1%MI198物质样品(含有58%MI198-Z1、10%MI198-Z2、24%MI198-Z3和3%MI198-Z4的复合物)的丙酮溶液，制备如表8所示含有不同预定浓度的MI198-Z1组分的试验溶液。
另外，将其一片菜豆叶切成3cm直径的园片，面朝下放在一个9cm直径的玻璃盘中的琼脂胶层上。将10只雌性成年普通红叶螨(Tetranychusurticae)置于叶片上。然后以2ml/cm的速率喷洒试验溶液。于25℃放置48小时后，测定击倒的螨的百分比，三次重复试验的平均值示于表8。
表8MI198-Z1的浓度 0.005 0.01 0.025 0.05 0.1 0.25(mcg/ml)击倒螨的%31394853100100为了对比，以相同的方式试验了市场可供的杀螨剂“Polynartin”。当以10mcg/ml的浓度施用Polynactin时，击倒的螨的百分比为93%。
试验例3用水稀释与试验例2所用相同的含有0.1%MI198物质的丙酮溶液，制备如表9所示含有不同预定浓度的MI198-Z1组分的试验溶液。另外，将一片菜豆叶切成3cm直径的圆片，面朝下放在一个9cm直径的玻璃盘中的琼脂胶层上。将10只雌性成年普通红叶螨(Tetranychusurticae)置于叶片上并使其产卵。24小时后，将成年螨移开，以2ml/cm2的速率喷洒试验溶液。于25℃保持9天后，计算死卵和死幼虫的数目。然后计算卵的死亡率和幼虫死亡率。试验结果列于表9。
表9MI198-Z1的浓度 0.5 1.0卵死亡率(%)563幼虫死亡率(%)00为了对比，同时以相同的方式试验了“Polynactin”，其浓度为10mcg/ml，测定的卵死亡率和幼虫死亡率分别为100%和0%。
试验例4用含有少量展开剂的水溶液稀释与例2所孟嗤暮 .1%MI198物质的丙酮溶液，制备如表10所示含有不同预定浓度的MI198-Z1组分的试验溶液。同时，将10只成年雌性普通红叶螨(Tetranychus urticae)置于并使其停留在盆栽菜豆植物上。1天以后，以每两盆15ml的量喷洒试验溶液，并将处理过的植物置于玻璃温室中。喷洒处理3天以后，计算成年螨的死亡率。喷洒处理12天后，根据下式计算子代螨的控制率(即处理后成长起来的成年螨的控制率(%))子代螨控制率(%)＝(1- (处理区域成年螨的数量)/(未处理区域成年螨的数量) )×100%表10列出了试验结果。
表10MI198-Z1的浓度 0.01 0.03 0.1 0.3 1.0(mcg/ml)成年螨死亡率4483100100100子代螨控制率39476379100
为了对比，同相同的方法同时试验含有40%活性化合物、呈乳油形式的市场可供杀螨剂“kelthan”。当以活性化合物浓度为10mcg/ml施用时，成年螨的死亡率和子代螨的控制率分别为39%和32%。
试验例5在装有400ml水的玻璃瓶中放入20只红家蚊(Culex pipiens pollens)幼虫，然后加入表11所示给定体积的0.1%MI198-Z物质的丙酮溶液或通过用水稀释该丙酮溶液制成的含不同预定浓度MI198-Z1成分的试验水溶液。使所得混合物于20-25℃静置1天后，计算蚊幼虫的死亡率。试验结果示于表11。
表11
为了对比，以同样的方法试验了市场可供的杀虫剂“Ivomec”，其浓度分别为0.01mcg/ml、0.1mcg/ml和1mcg/ml，蚊幼虫的死亡率分别为50%、90%和100%。
试验例7本例说明MI198物质对狗胃寄生蠕虫(Toxocaracaris)的驱虫活性。
根据其EPG值(即每克排泄物中排出的虫卵数)，将自发感染胃寄生蠕虫的幼狗分为不同的组，每组4只。
采用胃探示器，强制使这些狗口服50%MI198-Z1物质的乙醇溶液，剂量为每公斤体重0.1mg和0.03mg活性物质。自给药1周前至杀死处理过的狗，连续计算排泄物中排出的蠕虫数和排泄物中的虫卵数。给药7天后将狗杀死并进行解剖，计算小肠中残存的活虫数。根据下式计算驱除寄生虫的百分比以评价驱虫活性驱虫百分比＝ (排出的虫的总数)/((排出的虫的总数)+(存留的虫数)) ×100%试验结果示于下面表12。
表12试验物质剂量(mg/kg)排出的虫存留的虫数驱虫百分比的总数MI198-Z10.1 31 0 100MI198-Z10.03 30 2 93.8未处理-2404.8试验例8本例说明MI198物质对鸡胃寄生虫(Ascaridiagalli)的驱虫活性。
将人工感染胃寄生虫的鸡分为不同的组，每组5只。采用胃探示器强制使各组鸡口服含50%MI198-Z1的乙醇溶液，剂量为每公斤体重0.1mg和0.03mg。在给药至杀死经处理过的鸡的这段期间内，计算排泄物中排出的蠕虫数。给药7天后将鸡杀死并解剖。计算其小肠中残存的蠕虫数。用试验例7所给的计算式计算排出的寄生虫的百分比，评价驱虫活性。
表13试验物质剂量(mg/kg)排出的虫存留的虫数驱虫百分比的总数MI198-Z10.1 112 0 100MI198-Z10.03 62 20 75.6未处理-258223，4
图1是在乙醇中测得的MI198物质的UV吸收光谱;图2是在KBr中研片测得的MI198-Z1物质的IR吸收光谱;图3是室温下在氘氯仿中测量的MI198-Z1物质的HNMR谱(400MHz)。
权利要求
1.抗生素MI198，该物质是由下列通式代表的化合物
其中R1是具有下式的酰基
式中R3、R4、R5和R6各自为氢原子、甲基或乙基；R2是甲基、乙基或异丙基。
2.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3和R4同时为甲基、R2是甲基的抗生素MI198-Z1。
3.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3是甲基、R4是氢原子、酰基R1为反式且R2是甲基的抗生素MI198-Z2-反式。
4.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3是原子、R4是甲基、酰基R1为顺式且R2是甲基的抗生素MI198 Z2-顺式。
5.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3和R4同时为甲基、R2是乙基的抗生素MI198-Z3。
6.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3和R4同时为甲基、R2是异丙基的抗生素MI198-Z4。
7.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R5和R6同时为甲基、R2是甲基的抗生素MI198-Z5。
8.权利要求1的化合物龌衔锸峭ㄊ剑á瘢┧镜幕衔镏蠷5和R6同时为甲基、R2是乙基的抗生素MI198-Z6。
9.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3是乙基、R4是甲基、酰基R1为反式且R2是甲基的抗生素MI198-Z7-反式。
10.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3是乙基、R4是甲基、酰基R1为顺式且R2是甲基的抗生素MI198-Z7-顺式。
11.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3是乙基、R4是甲基、酰基R1为反式且R2是乙基的抗生素MI198-Z8-反式。
12.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3是乙基、R4是甲基、酰基R1为顺式且R2是乙基的抗生素MI198-Z8-顺式。
13.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R5是乙基、R6是甲基、R2是甲基的抗生素MI198-Z9。
14.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R5是乙基、R6是甲基、R2是乙基的抗生素MI198-Z10。
15.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3和R4是乙基、R2是甲基的抗生素MI198-Z11。
16.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R3和R4是乙基、R2是乙基的抗生素MI198-Z12。
17.权利要求1的化合物，所述化合物是通式(Ⅰ)所示的化合物中R5和R6是乙基、R6是甲基的抗生素MI198-Z13。
18.权利要求1所述的具有通式(Ⅰ)的抗生素MI198的生产方法，包括在厌氧条件下于含有可同化的碳源和可同化的氮源的培养基中培养可产生MI198物质的链霉菌属菌株，直至培养基中产生并聚集可观量的MI198物质，然后从培养基中收集抗生素MI198，它是一种通式(Ⅰ)所示的化合物(其中R1和R2如权利要求1所定义)
19.权利要求18的方法，其中可产生MI-198物质的菌株是吸水链霉菌aureolacrimosus亚种MI198-fF29菌株(FERM BP-2059，日本保存单位“Fermentation Research Institnte”的保存号)。
20.权利要求18的方法，其中吸水链霉菌aureolacrimosus亚种MI198-fF29菌株(FERM BP-2059)在厌氧条件下于25-35℃培养5-14天。
21.权利要求18的方法，其中通过在厌氧条件下于25-35℃在含有可同化的碳源和可同化的氮源的培养基中培养吸水链霉菌aureolacrimosus亚种(FERM BP-2059)直至在培养基中产生并聚集抗生素混合物，然后从培养基中回收抗生素混合物，得到含有MI198-Z1、MI198-Z2、MI198-Z3、MI198-Z4、MI198-Z5、MI198-Z6、MI198-Z7、MI198-Z8、MI198-Z9、MI198-Z10、MI198-Z11、MI198-Z12和MI198-Z13抗生素物质的混合物，必要时，可以使用一种或多种色谱法将所得抗生素混合物分离成单一的抗生素物质。
22.抵抗可寄生于人体、动物或植物的线形动物门的成虫和幼虫的药剂，含有抗生素MI-198作为活性成分，该物质是由下列通式表示的化合物
其中R1是具有下式的酰基
式中R3、R4、R5和R6各自为氢原子、甲基或乙基;R2是甲基、乙基或异丙基。
23.权利要求22的药剂，该药剂是一种含有作为活性成分的MI198物质(即通式(Ⅰ)的化合物)以及液体或固体载体的药物组合物。
24.抵抗节肢动物的成虫、幼虫或卵的药剂，含有作为活性成分的MI198物质，该物质是由下列通式表示的化合物
其中R1是具有下式的酰基
式中R3、R4、R5和R6各自为氢原子、甲基或乙基;R2是甲基、乙基或异丙基。
25.权利要求24的药剂，该药剂是一种含有作为活性成分的MI198物质(即通式(Ⅰ)的化合物)以及液体或固体载体的药物组合物。
26.一种新的微生物，即吸水链霉菌aureolacrimosus亚种MI198-fF29菌株，该菌株作为培养物保存在“Fermentation Resesrch Institute”(FERM BP2059)，其特征在于该菌株能产生抗生素MI198物质，该物质是权利要求1限定的通式(Ⅰ)所示的化合物。
全文摘要
本发明提供一类抗生物质，分别被命名为MI198—Z
文档编号A01N43/90GK1032815SQ8810916
公开日1989年5月10日 申请日期1988年10月9日 优先权日1987年10月9日
发明者田中亘, 土桥和之, 长绳博, 浜田雅, 竹内富雄, 佐藤圣 申请人:财团法人微生物化学研究会, 北化学工业株式会社