鲜重均高于其他培养条件(表6 )。
[0021] 通过结球条件的优化建立了高效的分蘖洋葱脱毒苗试管鳞茎诱导体系，为分蘖洋 葱脱毒种苗的快速繁育提供了有利保障。
注：MS为基础培养基。
[0024]
注：MS为基础培养基。
[0025] 实施例4利用试管微鳞茎盘增殖技术建立分蘖洋葱脱毒种苗快繁体系 (1)试管微鳞茎盘的获得 分蘖洋葱试管苗经过结球培养6周后或分蘖洋葱试管球直径达到8_以上时，可切取 试管微鳞茎盘。以主生长点鳞茎盘两条垂直的切线为切口，进行纵向切割，切成4份，其中 只有一个1/4份切块带有主生长点鳞茎盘，剥掉主生长点及主生长点所在的鳞茎盘。再将 1/4份鳞茎盘上部的鳞片基部再进行切割，至远主生长点端高，近主生长点端低的斜面(如 图3、图4)。
[0026] 试管微鳞茎盘在添加6-BAO. 6mg/L、NAAO. lmg/L的培养基中经过2周的培养，可 在显微镜下观察到丛生芽的分化，3周后，丛生芽株高最大可达lcm，4周后丛生芽株高可达 3cm (如图5)，且分化数达到最大值，每个鳞茎盘的最大增殖系数(增殖系数=分化芽总数/ 接种数)可达34。随着诱导时间的增加，鳞茎盘分化数增加，但在诱导第4周后鳞茎盘分化 数不再增加，鳞茎盘的分化率达最大值。
[0027] (2)田间开放的鳞茎盘与试管微鳞茎盘对分蘖洋葱试管苗增殖的影响 分别以田间开放的鳞茎盘和试管微鳞茎作为外植体进行分蘖洋葱快速繁育，实验结果 表明，试管微鳞茎的增殖效率是田间开放的鳞茎盘增值效率的1. 66倍(见表7)。说明试管 微鳞茎盘具有更高的分化能力，适合作为分蘖洋葱快速繁育的最佳外植体。
注：MS为基础培养基。
[0029] (3)试管球发育程度对试管苗增殖的影响 以分蘖洋葱脱毒试管苗提供的脱毒种球鳞茎盘作为外植体，以不同生长期的分蘖洋葱 试管球鳞茎盘为外植体进行试管苗增殖培养，结果表明，随着结球培养时间的增加，试管球 鳞茎盘的分化能力逐渐增强，结球培养进行到第4周，鳞茎平均直径达到3. 56mm时，具有分 化能力，但平均分蘖数不高；培养到第6周后的试管球，分化能力大幅提高，平均分蘖数达 到27. 63,在培养第10周时平均分蘖数达到最大32. 19,之后分化能力下降。由此，我们确 定结球培养时间最短，分化能力较高的时间点-结球培养第6周作为分蘖洋葱试管鳞茎盘 的最佳提供期(见表8)。
注：MS为基础培养基。
[0031] 在此基础上，以1/2MS为基础培养基，通过调节培养基中的糖浓度、NAA浓度，调节丛生 苗生长、生根速度。结果表明，在糖浓度为45mg/L、NAA0. lmg/L的培养基（PH=5. 8)中，试管 苗生根最快、长势最佳(见表9)。1周后，生根率达100%，试管苗颜色浓绿、粗壮，一周后获得 分蘖洋葱种苗(见图6)。
注：MS为基础培养基。
[0033] 实施例5利用茗葱鳞茎盘增殖技术建立茗葱种苗快繁体系 (1) 茗葱鳞茎盘的获得 1) 取茗葱鳞茎，去除茗葱须根，剥除外层鳞片，保留以中心生长点为中心，直径为 0. 4-lcm的鳞茎盘及其上部包裹的鳞片，获得茗葱的中心部位（图7); 2) 将茗葱中心部位流水冲洗半小时，用75%酒精浸泡消毒Imin后，随后用1% NaClO 溶液浸泡消毒15- 20min，无菌水冲洗3- 5次以清除残余的NaCIO,用滤纸吸干水分备用； 3) 经过外植体灭菌后，在中心部位距底端3 - 5mm处横切并去除上部鳞片，沿主生长点 垂直切线方向，纵向分割成4份，去除主生长点及主生长点所在的鳞茎盘备用（图8); (2) 茗葱鳞茎盘增殖 1)以 MS 为基础培养基，添加 6-BA (0· 5-2. 0 mg/L)、NAA (0· 1-1. 0 mg/L)，PH 调节至 5. 8,配制增殖培养基备用； 2)将鳞茎盘平均切割成4份，接种于增殖培养基中（图9)，经过8周的诱导后，丛生苗 最大增殖系数可达20 (见表10)。
注：MS为基础培养基。
[0035] (3)茗葱种苗获得 1) 以MS为基础培养基，添加 NAA (0. 1-1.0 mg/L)，PH调节至5. 8,配制生根培养基备 用； 2) 将丛生苗接种于生根培养基中，3周后丛生苗生根(表11)。
[0036] 3)将生根后的丛生苗分割成单株，接种于壮苗培养基中，4个月后可获得茗葱种苗 (如图10)。种苗经驯化后可定植于田间用于生产。
注：MS为基础培养基。
[0038] 实施例6利用大蒜微鳞茎盘增殖技术建立大蒜种苗快繁体系 (1)以大蒜茎尖为外植体获得大蒜增殖苗 将大蒜茎尖分别接种于不同浓度的6-BA、NAA组合，6-BA、IAA组合培养基中，两种激素 组合均能够获得大蒜增殖苗，但相同浓度的IAA和NAA在进行增殖诱导时，差异很大。其中 在6-BA、NAA激素组合中诱导的增殖苗长势较好，且分化系数较高，在培养4周时，平均增殖 系数可达7. 75 ;6-BA、IAA激素组合虽然也能够实现茎尖增殖，但所获得的增殖苗细、弱，分 化系数低。可见，IAA的作用效果不如NAA。因此确定MS+6-BA2. Omg/L+NAA 0. 5mg/L培养 基为茎尖增殖最佳培养基(见表12)。
注：MS为基础培养基。
[0040] (2)以大蒜鳞茎盘为外植体获得再生苗 取独立蒜瓣，剥去外皮及须根，用流水冲洗0.5 h，用75%酒精浸泡消毒I min后，随后 用1 % NaClO溶液浸泡消毒15-20 min，无菌水冲洗3-5次以清除残余的NaCIO,用滤纸吸干 水分备用（见图11)。2) 去除外部包裹的白色部分，在距底端3 - 5mm处横切并去除上部鳞片，沿主生长点垂直 切线方向，纵向分割成4份，去除主生长点及主生长点所在的鳞茎盘，保留2-3mm2的鳞茎盘 (见图12)，分别接种于以MS为基础培养基，添加6-BA (1. 0-3. Omg/L)、NAA (0· 5-3. 0 mg/ L)，PH调节至5. 8的增殖培养基中培养，诱导丛生芽。在25°C、光照时间为16h、光照强度 为25001UX条件下，进行培养。
[0041] 经过4周的诱导，以6-BA、NAA组合诱导效果最好；6-BA、IAA组合也能诱导出丛生 芽，但增殖系数低，再生苗存在畸形苗。其中鳞茎盘在添加6-BA2. Omg/L、NAAO. 5mg/L的培 养基中，4周后每个鳞茎盘最大增殖系数(增殖系数=分化芽总数/接种数）可达40 (见表 13)。随着诱导时间的增加，鳞茎盘分化数增加，但在诱导第4周后鳞茎盘分化数不再增加， 鳞茎盘的分化率达最大值(见图13)。
注：MS为基础培养基。
【主权项】
1. 一种茗葱快速繁殖方法，它包括： 1)茗葱鳞茎盘的获得 取茗葱鳞茎，去除茗葱须根，剥除外层鳞片，保留以中心生长点为中心，直径为0. 4-lcm的鳞茎盘及其上部包裹的鳞片，获得茗葱的中心部位； 将茗葱中心部位冲洗，消毒，用滤纸吸干水分； 经过外植体灭菌后，在中心部位距底端3 - 5mm处横切并去除上部鳞片，沿主生长点垂 直切线方向，纵向分割成4份，去除主生长点及主生长点所在的鳞茎盘，分别培养； 2)茗葱鳞茎盘增殖 以MS为基础培养基，添加 6-BA0. 5-2. 0mg/L、NAA0. 05-0. 5mg/L，PH调节至 5. 8,诱 导丛生芽； 3)继续培养成种植苗。2. 根据权利要求1所述的一种茗葱快速繁殖方法，其特征在于：所述的6-BA和NAA的 添加量分别为1. 〇mg/L和0· 1mg/L。3. 根据权利要求1或2所述的一种茗葱快速繁殖方法，其特征在于：所述的切割成4 份，是以主生长点两条垂直的切线为切口，进行切割，切成4份，其中只有一个1/4份切块带 有主生长点所在的鳞茎盘，剥掉其主生长点和主生长点所在的鳞茎盘。4. 根据权利要求3所述的一种茗葱快速繁殖方法，其特征在于：所述的1/4份鳞茎盘 上部的鳞片基部再进行切割，至远主生长点端高，近主生长点端低的斜面。5. 根据权利要求4所述的一种茗葱快速繁殖方法，其特征在于：步骤3)所述的继续培 养成苗，是以MS为基础培养基，添加NAA0. 1-1mg/L，PH调节至5. 8 ;将丛生苗接种于生 根培养基中，3周后丛生苗生根；将生根后的丛生苗分割成单株，接种于壮苗培养基中，获 得茗葱种苗；种苗经驯化后，种植。6. 根据权利要求1或5所述的一种茗葱快速繁殖方法，其特征在于：所述的茗葱中心 部位消毒，用75%酒精浸泡消毒lmin后，随后用1%NaCIO溶液浸泡消毒15 - 20min。
【专利摘要】本发明公开了一种茖葱快速繁殖方法，将茖葱中心部位清洗、消毒。经过外植体灭菌后，在中心部位距底端3—5mm处横切并去除上部鳞片，沿主生长点垂直切线方向，纵向分割成4份，去除主生长点及主生长点所在的鳞茎盘，诱导丛生芽，并培养成苗，通过上述培养过程的优化建立了茖葱鳞茎盘快速繁殖体系，获得了大量的茖葱试管苗，该体系增殖时间短，增殖系数大，遗传稳定性高，通过该体系能够实现茖葱的快速繁育，实现茖葱产业的种植。
【IPC分类】A01H4/00
【公开号】CN105265317
【申请号】CN201510730285
【发明人】张悦, 程英魁, 王健鹂, 王秀峰, 马艺荞, 刘井莉, 娄琦, 冯博
【申请人】吉林省蔬菜花卉科学研究院
【公开日】2016年1月27日
【申请日】2015年11月2日