伯克霍尔德氏菌属的分离细菌菌株及其农药代谢物的制作方法_2

文档序号:9569147阅读:来源:国知局
明,否则本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的技 术人员通常理解的相同含义。虽然在实施或测试本发明中还可以使用与本文所述的方法和 材料类似或等同的方法和材料,但是现在描述优选的方法和材料。
[0101] 应当注意到,除非上下文明确指出,如本文和所附的权利要求所用的,单数形式 "一个(a) "、"一个(an)"和"这个(the)"包括复数含义。
[0102] 如本文所定义,"源自"表示直接分离或获得自特定来源,或者具有与分离或获得 自特定来源的物质或生物体相同的特征。
[0103] 如本文所定义,"分离的化合物"基本上不含其他化合物或物质,如通过包括色谱 法、电泳法在内的分析方法所测定的,例如,至少约20%纯、优选至少约40%纯、更优选约 60%纯、甚至更优选约80%纯、最优选约90%纯、并且甚至最优选约95%纯。
[0104] 本文所用的术语"烷基"是指单价直链或支链的烃基团,其具有1-约12个碳原子, 包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、正己基等。
[0105] 本文所用的"取代的烷基"是指烷基,其还带有一个或多个取代基,所述取代基选 自羟基、烷氧基、疏基、环烷基、取代的环烷基、杂环基、取代的杂环基、芳基、取代的芳基、杂 芳基、取代的杂芳基、芳氧基、取代的芳氧基、卤素、氰基、硝基、氨基、酰氨基、一C(0)H、酰 基、氧酰基、羧基、磺酰基、磺酰胺、砜基等。
[0106] 本文所用的"烯基"是指直链或支链的烃基团,其具有一个或多个碳-碳双键,并 具有约2-12个碳原子,并且"取代的烯基"是指烯基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0107] 本文所用的"炔基"是指直链或支链的烃基团,其具有至少一个碳-碳三键,并具 有约2-12个碳原子,并且"取代的炔基"是指炔基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0108] 本文所用的"芳基"是指芳香基团,其具有6-14个碳原子,并且"取代的芳基"是 指芳基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0109] 本文所用的"杂芳基"是指芳香环,其包含一个或多个杂原子(如N、0、S等)作为 环结构的一部分,并具有3-14个碳原子,并且"取代的杂芳基"是指杂芳基,其还带有一个 或多个上述的取代基。
[0110] 本文所用的"烷氧基"是指部分一O-烷基_,其中烷基如上文定义,并且"取代的 烷氧基"是指烷氧基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0111] 本文所用的"硫代烷基"是指部分一S-烷基-,其中烷基如上文定义,并且"取代 的硫代烷基"是指硫代烷基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0112] 本文所用的"环烷基"是指包含环的烷基,其包含约3-8个碳原子,并且"取代的环 烷基"指环烷基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0113] 本文所用的"杂环基"是指环状(即包含环)的基团,其包含一个或多个杂原子 (如N、0、S等)作为环结构的一部分,并具有3-14个碳原子,并且"取代的杂环基"是指杂 环基,其还带有一个或多个上述的取代基。
[0114] 伯克霍尔德氏菌菌株
[0115] 本文的伯克霍尔德氏菌菌株是一种非洋葱伯克霍尔德氏菌复合群(complex)、非 植物伯克霍尔德氏菌、非唐菖蒲伯克霍尔德氏菌、伯克霍尔德氏菌,并且对脊椎动物如鸟 类、哺乳动物和鱼类是非致病性的。这种菌株可以利用本领域已知并由Lorch et al.,1995 描述的方法分离自土壤样品。伯克霍尔德氏菌菌株可以分离自许多不同类型的土壤或生长 培养基。然后将样品接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)。所述细菌是革兰氏阴性的,并且其形 成圆形、不透明的乳白色菌落,其随时间变为粉红色和粉红褐色以及粘液或糊状。
[0116] 从马铃薯葡萄糖琼脂平板分离菌落,并筛选具有本发明下文的实施例所示的生物 学、遗传学、生化和/或酶特征的伯克霍尔德氏菌菌株。特别地,如通过clustal分析所确 定的,所述伯克霍尔德氏菌菌株具有16S rRNA基因,所述基因包含正向序列,其与SEQ ID NO:8、11和12所示的序列至少约99. 0%、优选约99. 5%、更优选约99. 9%、并且最优选 100%相同;以及正向序列,其与SEQ ID勵:9、10、13、14和15所示的序列至少约99.0%、 优选约99. 5 %、更优选约99. 9 %、并且最优选100 %相同。此外,如下文所述,这种伯克霍尔 德氏菌菌株可以具有农药活性,尤其是杀病毒、除草、杀菌(germicidal)、杀真菌、杀线虫、 杀细菌(bactericidal)和杀虫活性,更特别的是除草、杀虫、杀真菌和杀线虫活性。其对脊 椎动物如哺乳动物、鸟类和鱼类是非致病性的。
[0117] 此外,所述伯克霍尔德氏菌菌株产生至少本公开所述的农药化合物。
[0118] 所述伯克霍尔德氏菌菌株对卡那霉素、氯霉素、环丙沙星、呱拉西林、伊米配 能以及磺胺甲基异噁唑与甲氧苄氨嘧啶的组合是易感的,并且包含脂肪酸16:0, cyclo 17:0, 16:03-0? 14:0, cyclo 19:0, 18:0〇
[0119] 这种伯克霍尔德氏菌菌株可以通过在马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)上或者在包含确 定的碳源(如葡萄糖、麦芽糖、果糖、半乳糖)以及未确定的氮源(如蛋白胨、胰蛋白胨、大 豆胨和NZ胺)的发酵培养基中,培养具有与伯克霍尔德氏菌A396 (NRRL登录号B-50319) 相同特征的微生物而获得。
[0120] 农药化合物
[0121] 本文所公开的农药化合物可以具有以下性质:(a)可获得自新的伯克霍尔德氏菌 物种,如A396 ;(b)特别地,对最常见的农业昆虫有害生物具有毒性;(c)通过液相色谱/质 谱(LC/MS)测定的分子量为约525-555,并且更特别地为540 ; (d) 1H NMR值为6. 22, 5. 81,5 .69, 5. 66, 5. 65, 4. 64, 4. 31,3. 93, 3. 22, 3. 21,3. 15, 3. 10, 2. 69, 2. 62, 2. 26, 2. 23. 1. 74, I. 1 5, 1. 12, 1. 05, 1. 02 ; (d) 13C NMR值为 172. 99, 172. 93, 169. 57, 169. 23, 167. 59, 130. 74, 130. 1 2, 129. 93, 128. 32, 73. 49, 62. 95, 59. 42, 57. 73, 38. 39, 38. 00, 35. 49, 30. 90, 30. 36, 29. 26, 1 8. 59, 18. 38, 18. 09, 17. 93, 12. 51 ; (e)利用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0-20min90-0% CH3CN 水溶液,20-24min 100% CH3CN, 24-27min, 0-90% CH3CN 水溶液,27-30min 90% CH3CN 水溶液)以 〇· 5mT,/miη 的流速和 210nm 的 UV 检测,在反相 C_18HPLC(Phenomenex,Luna 5 μ C18 (2) 100A,IOOx 4. 60mm)柱上进行的高压液相色谱(HPLC)的保留时间为约10-15分 钟,更具体约12分钟,并且甚至更具体为约12. 14min ; (f)通过1H、13C NMR和LC/MS数据的 解读确定的分子式为C24H36N4O 6S2; (g) 13C NMR谱具有所有24个碳的信号,包括5个甲基、4个 亚甲基、9个次甲基和6个季碳;以及(g)1!! NMR谱表现出典型的缩酸酸肽(depsipeptide) 的特征,表明3个氨基质子[4. 63, 4. 31,3. 93]和1个酯甲醇质子[5. 69]。在一具体实施方 案中,所述化合物的具有结构##STR001##,或其农药可接受的盐或立体异构体:
[0123] 其中M为1、2、3或4 ;n为0、1、2或3 ;p和q独立地为1或2 ;X为0、ΝΗ或NR ;R1、 R2和R3相同或不同,并且独立地为氨基酸侧链部分或氨基酸侧链衍生物,并且R为低级链 烷基、芳基或芳基烷基部分。
[0124] 在一更具体的实施方案中,所述化合物具有FR90128的结构:
[0126] 本文提供##STR002##所示的化合物:
[0127]
[0128] 其中X、Y和Z各自独立地为一0、一叫或一S,其中R # -Η或C。烷基;R p 私和m各自独立地为一H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取 代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、 取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氨基、酰氨基、羧基、一C (0) H、酰基、 氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基。
[0129] 在另一更具体的实施方案中,家族##STR002##化合物可以为(Vi)-(Xix)所示的 化合物。



[0134] 这些化合物来自天然物质,或者为获得自商业来源或通过化学合成获得的化 合物。家族##STR002##化合物的天然来源包括但不限于微生物、藻类及海绵。在更具 体的实施方案中,包含家族##STR002##化合物的微生物包括但不限于以下物种,或者 家族##STR002##化合物可以源自以下物种:如瓦氏链轮丝菌(Streptoverticillium waksmanii)(化合物 vi) (Umehara,et al.,1984)、平普里链霉菌(Streptomyces pimprina)(化合物 vii) (Naiket al.,2001)、撤榄网状链轮丝菌(Streptoverticillium olivoreticuli)(化合物 viii、ix、X) (Koyama Y.,et al.,1981)、链霉菌(Streptomyces sp)(化合物xi、xii) (Watabe et al·,1988)、丁香假单胞菌(Pseudomonas syringae)(化合 物xiii、xiv)(Pettit et al.,2002)。家族##STR002##化合物还可以源自藻类,包括但不 限于红藻(化合物 XV) (N'Diaye,et al.,1996)、红藻脆红网藻(Martensia fragilis)(化 合物 xvi) (Takahashi S. et al.,1998)、海鞘(Diazona chinensis)(化合物 xvii&xviii) (Lindquist N. et al.,1991)、Rhodophycota haraldiophyllum sp (化合物 xix) (Guella et al.,1994) D
[0135] 本文还提供 ##STR003## :
[0137] 其中X和Y各自独立地为一0H、一叫或一S,其中R % -H或C ^C1。烷基;R η R2 和m为噁唑环上的取代基,各自独立地为一H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、 取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取 代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氣基、醜氣基、 羧基、--C (O) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基。
[0138]本文还提供 ##STR005## :
[0140] 其中X和Y各自独立地为一0H、一NR1S--S,其中R2各自独立地为一H、烷 基(如C1-C1。烷基)、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、 杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧 基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氨基、酰氨基、羧基、一C (0) H、酰基、氧酰基、氨 基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基。
[0141] 在一具体实施方案中,家族##STR005##化合物如以下xx-xxiii所示的化合物可 以源自天然或商业来源或者通过化学合成获得:

[0144] 家族##STR005##化合物的天然来源包括但不限于植物、珊瑚、微生物及海 绵。微生物包括但不限于灰色链霉菌(Streptomyces griseus)(化合物XX) (Hirota et al.,1978)、白色链霉菌(Streptomyces albus)(化合物 xxi) (Werner et al.,1980)。家族 STR004化合物也可以源自藻类,包括但不限于Haraldiophyllum sp (化合物xxii) (Guella et al.,2006)及红藻(化合物 xxiii) (Ν' Diaye et al.,1994)。
[0145] 在一实施方案中,所述化合物可以源自或者可以获得自微生物,特别是伯克霍尔 德氏菌物种,并且特征在于具有这样的结构,其包含至少1个酯、至少1个酰胺、至少3个亚 甲基、至少1个四氢吡喃糖部分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25 个碳以及至少8个氧和1个氮。所述化合物还包括以下特征中的至少一种:
[0146] (a)农药性质,尤其是杀线虫、杀真菌、杀虫和除草性质;
[0147] (b)通过液相色谱/质谱(LC/MS)测定的分子量为约530-580,特别是555 ;
[0148] (c) 1H NMR 值为 δ 6. 40, 6. 39, 6. 00, 5. 97, 5. 67, 5. 54, 4. 33, 3. 77, 3. 73, 3. 70, 3. 59 ,3. 47, 3. 41, 2. 44, 2. 35, 2. 26, 1. 97, 1. 81, 1. 76, 1. 42, 1. 37, 1. 16, 1. 12, 1. 04 ;
[0149] (d) 13C NMR 值为5 173.92,166.06,145.06,138.76,135.71,129.99,126.20,123· 35, 99. 75, 82. 20, 78. 22, 76. 69, 71. 23, 70. 79, 70. 48, 69. 84, 60. 98, 48. 84, 36. 89, 33. 09, 30 .63, 28. 55, 25. 88, 20. 37, 18. 11,14. 90, 12. 81,9. 41 ;
[0150] (e)利用水:乙腈(CH3CN)梯度溶剂系统(0-20min ;90-0 % CH3CN水溶 液,20-24min ;100 % CH3CN, 24-27min ;0-90 % CH3CN 水溶液,27-30min ;90 % CH3CN 水 溶液)以 〇· 5mT,/miη 的流速和 210nm 的 UV 检测,在反相 C_18HPLC(Phenomenex, Luna 5 μ C18 (2) 100A, 100x4. 60mm)柱上进行的高压液相色谱(HPLC)的保留时间为约7-12分钟, 更具体约10分钟,并且甚至更具体为约10. 98min ;
[0151] (f)13C NMR谱显示28个离散的碳信号,其可以归因于6个甲基、4个亚甲基碳和13 个次甲基,包括5个Sp2,4个季碳;
[0152] (g)通过ES頂S和NMR数据分析的解读确定的分子式为C28H45NO 10;
[0153] (h)UV吸收带为约210-450nm,并且最特别是约234nm。
[0154] 本文还提供具有##STR004a##结构的化合物:
[0156] 其中父、¥和2各自独立地为-0、-冊或_3,其中1?为!1或(:1-(: 1。烷基;1?1、1?2為、1?4、 R5、R6、R7、Rs、R9、R 1Q、Rn、R12和R 13各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔 基、取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、 取代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氣基、醜氣 基、羧基、-C (0) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基。
[0157] 在一具体实施方案中,所述化合物具有##STR004b##所示的结构:
[0159] 其中 &、R2、R3、R4、R5、R 6、R7、Rs、R9、R1Q、R n、R12和 R 13如上文对邶STR004a## 所定 义。
[0160] 在一更具体的实施方案中,所述化合物为Templamide A,具有以下结构:
[0162] 在另一具体实施方案中,提供具有式##STR004c##的化合物:
[0163]
[0164] 其中 Rn R2、R3、R4、R5、R6、R 7、R#P R η如上文对 ##STR004a## 所定义。
[0165] 在另一实施方案中,提供这样的化合物,其可以源自伯克霍尔德氏菌物种,并且特 征在于具有这样的结构,其包含至少1个酯、至少1个酰胺、环氧亚甲基、至少1个四氢吡喃 糖部分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25个碳以及至少8个氧和 1个氮,并且具有农药活性。所述化合物还包括以下特征中的至少一种:
[0166] (a)农药性质,特别是杀虫、杀真菌、杀线虫和除草性质;
[0167] (b)通过液相色谱/质谱(LC/MS)测定的分子量为约520-560,特别是537 ;
[0168] (c) 1H NMR δ 值为约6.41,6.40,6.01,5.97,5.67,5.55,4.33,3.77,3.75,3.72,3· 64, 3. 59, 3. 54, 3. 52, 2. 44, 2. 34, 2. 25, 1. 96, 1. 81, 1. 76, 1. 42, 1. 38, 1. 17, 1. 12, 1. 04 ;
[0169] (d) 13C NMR 值为5 174.03,166.12,143.63,137.50,134.39,128.70,126.68,124· 41,98. 09, 80. 75, 76. 84, 75. 23, 69. 87, 69. 08, 68. 69, 68. 60, 48. 83, 41. 07, 35. 45, 31. 67, 29 .19, 27. 12, 24. 55, 19. 20, 18. 95, 13. 48, 11. 39, 8. 04 ;
[0170] (e)利用水:乙腈(CH3CN)梯度,在反相C-18HPLC柱上进行的高压液相色谱 (HPLC)的保留时间为约6-15分钟,更具体约8分钟;特别地,利用水:乙腈(CH 3CN)梯度 溶剂系统(0_20min ;90-0% CH3CN 水溶液,20-24min ;100% CH3CN, 24-27min ;0-90% CH3CN 水溶液,27-30min ;90 % CH3CN水溶液)以0. 5mL/min的流速和210nm的UV检测,在反 相 C_18HPLC(Phenomenex,Luna 5 yC18(2) 100A, 100x4. 60mm)柱上进行的高压液相色谱 (HPLC)的保留时间为约8-15分钟,更具体约11分钟,并且甚至更具体为约11. 73min ;
[0171] (f)通过ES頂S和NMR数据分析的解读确定的分子式为C28H43NO 9;
[0172] (g)UV吸收带为约210-450nm,并且最具体为约234nm。
[0173] 在一具体实施方案中,所述化合物具有结构##STR006a## :
[0175] 其中X、Y和Z各自独立地为-0、-NR或-S,其中R为H或C1-Ciq烷基;R 2、R3、 R4、R5、R6、R7、Rs、R n、R12和R 13各自独立地为H、烷基、取代的烷基、烯基、取代的烯基、炔基、 取代的炔基、芳基、取代的芳基、杂芳基、取代的杂芳基、杂环基、取代的杂环基、环烷基、取 代的环烷基、烷氧基、取代的烷氧基、硫代烷基、取代的硫代烷基、羟基、卤素、氣基、醜氣基、 羧基、-C (0) H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、磺酰胺或砜基。
[0176] 在一具体实施方案中,所述化合物具有以下结构:
[0177]
[0178] 在另一具体实施方案中,提供具有式##STR006b##的化合物:
[0180] 其中 &、R2、R3、R4、R5、R 6、R7、R#P R η如上文对 ##STR006a## 所定义。
[0181] 在更具体的实施方案中,所述化合物为Templamide B,具有以下结构:
[0183] 在另一具体实施方案中,所述化合物可以源自伯克霍尔德氏菌物种,并且特征在 于具有这样的结构,其包含至少1个酯、至少1个酰胺、环氧亚甲基、至少1个四氢吡喃糖部 分和至少3个烯烃双键、至少6个甲基、至少3个羟基、至少25个碳以及至少8个氧和至少 1个氮。所述化合物还包含以下特征中的至少一种:
[0184] (a)农药性质,特别是杀虫、杀真菌、杀线虫和除草性质;
[0185] (b)通过液相色谱/质谱(LC/MS)测定的分子量为约510-550,特别是约523 ;
[0186] (c) 1H NMR δ 值为约6.41,6.40,6.01,5.98,5.68,5.56,4.33,3.77,3.75,3.72,3· 65, 3. 59, 3. 55, 3. 50, 2. 44, 2. 26, 2. 04, 1. 96, 1. 81, 1. 75, 1. 37, 1. 17, 1. 04 ;
[0187] (d) 13C NMR δ 值为 172.22,167.55,144.98,138.94,135.84,130.14,125.85,123· 37, 99. 54, 82. 19, 78. 28, 76. 69, 71. 31,70. 13, 69. 68, 48. 83, 42. 52, 36. 89, 33. 11,30. 63, 25 .99, 21. 20, 20. 38, 18. 14, 14. 93, 12. 84 ;
[0188] (e)利用水:乙腈(CH3CN)梯度,在反相C-18HPLC柱上进行的高压液相色谱 (HPLC)的保留时间为约6-15分钟,更具体约8分钟,特别地,利用水:乙腈(CH 3CN)梯度溶 剂系统(0_20min ;90-0 % CH3CN 水溶液,20-24min ;100 % CH3CN, 24-27min ;0-90 % CH3CN 水溶液,27-30min ;90 % CH3CN水溶液)以0. 5mL/min的流速和210nm的UV检测,在反 相 C_18HPLC(Phenomenex,Luna 5 yC18(2) 100A, 100x4. 60mm)柱上进行的高压液相色谱 (HPLC)的保留时间为约8-15分钟,更具体约10分钟,并且甚至更具体为约10. 98min ;
[0189] (f)通过ES頂S和NMR数据分析的解读确定的分子式为C27H41NO 9;
[0190] (g)UV吸收带为约210-450nm,并且最具体为约234nm。
[0191] 在更具体的实施方案中,所述化合物为已知化合物FR901465,其更早地分离自假 单胞菌(Pseudomonas sp.) No. 2663的细菌培养液(Nakajima et al. 1996),并且据报导具 有抗癌活性,其结构如下:
[0193] 在另一具体实施方案中,家族##STR006a##化合物可以为xxiv-xxxix所示的 化合物。这些化合物来自天然物质,或者为获得自商业来源或通过化学合成获得的化合 物。家族邱STR006a##化合物的天然来源包括但不限于微生物、藻类和海绵。在更具体 的实施方案中,包含家族##STR006a##化合物的微生物可以来自这样的物种,如假单胞 菌 No. 2663(化合物 xxiv-xxvi) (Nakajima et al. 1996)。已经合成 FR901464 的合成类 似物(xxvii-xxxix),并且作为抗癌化合物申请专利(参见Koide et al.,US专利申请 No.2008/0096879 Al)〇
[0194]
[0195] 组合物
[0196] 可以将通过本发明的伯克霍尔德氏菌菌株制备的基本上纯的培养物、细胞部分或 上清以及化合物配制成农药组合物。
[0197] 上述物质可以用任何方式配制。非限制性制剂实例包括但不限于可乳化浓缩 物(EC)、可湿性粉末(WP)、可溶性液体(SL)、气溶胶、超低容量浓缩液(ULV)、可溶性粉末 (SP)、微胶囊、水分散颗粒、流动剂(flowable,FL)、微乳液(ME)、纳米乳液(NE)等。特别地, 本文所述的浓缩物、粉末、颗粒和乳液可以是冷冻干燥的。在本文所述的任何制剂中,活性 成分的百分比范围为0.01% -99. 99%。
[0198] 所述组合物可以为液体、凝胶或固体的形式。液体组合物包含源自所述伯克霍尔 德氏菌菌株(如具有与伯克霍尔德氏菌A396(NRRL登录号B-50319)相同特征的菌株)的 农药化合物。
[0199] 固体组合物可以通过将固体载体悬浮于农药化合物的溶液中,并将所述悬浮液在 温和条件(例如在室温下蒸发或者在65°C或更低温度下真空蒸发)下干燥。
[0200] 本发明的组合物可以包含凝胶封装的源自本发明的伯克霍尔德氏菌菌株的化合 物。这样的凝胶封装的材料可以通过将凝胶形成剂(如明胶、纤维素或木质素)与本发明 方法中所用的农药化合物的溶液混合,并诱导所述物质的凝胶形成而制备。
[0201] 所述组合物可以额外地包含表面活性剂以用于乳化、分散、湿润、铺展、整合、崩解 控制、稳定活性成分,并且改善流动性或抑制锈蚀。在一具体实施方案中,表面活性剂为对 植物无毒的无毒表面活性剂,其优选属于EPA List 4B。在另一具体实施方案中,非离子型 表面活性剂为聚氧乙烯(20)单月桂酸酯。表面活性剂的浓度可以为总制剂的0. 1-35%,优 选5-25%。分散剂和乳化剂的选择如非离子型、阴离子、两性和阳离子分散剂和乳化剂以及 用量由组合物和所述物质促进这些组合物分散的能力决定。
[0202] 所述组合物还可以包含其他微生物和/或农药(如杀线虫剂、杀真菌剂、杀虫剂)。 所述微生物可以包括但不限于源自芽孢杆菌(Bacillus sp.)、假单胞菌(Pseudomonas sp·)、短芽孢杆菌(Brevabacillus sp·)、轮枝菌(Lecanicillium sp·)、非白粉寄生菌 (no
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