t-yielding) PCR反应证实 所述微生物属于洋葱伯克霍尔德氏菌复合群。第二引物组的产物收获PCR反应证实所述微 生物确实为多噬伯克霍尔德氏菌。
[0259] 对于任何引物对没有获得PCR产物。PCR反应和引物的性能利用多噬伯克霍尔德 氏菌ATCC 17616(阳性对照）和焚光假单胞菌（Pseudomonas fluorescens)(阴性对照） 来测试。利用两个引物组，对多噬伯克霍尔德氏菌均观察到强条带。对于荧光假单胞菌则 未观察到条带。结果表明，A396为伯克霍尔德氏菌，但是不是洋葱伯克霍尔德氏菌复合群的 成员，并且也不是多噬伯克霍尔德氏菌。这还在比较培养实验中得到证实，其中使A396和 多噬伯克霍尔德氏菌的典型培养物在振荡培养中并排生长，并且每天利用600nm的光密度 测量来监测生长。在设定的条件下，新的物种A396比多噬伯克霍尔德氏菌典型菌株生长快 得多（图1)。
[0260] L 3. 2 DNA-DNA 杂交
[0261] 为了证实分离物A396是伯克霍尔德氏菌的新物种，用多噬伯克霍尔德氏菌（最接 近的16S rRNA序列匹配）进行DNA-DNA杂交实验。在ISP2培养液中，在Fernbach烧瓶 于200rpm/25°C下生长48小时产生A396和多噬伯克霍尔德氏菌的生物量。通过离心无菌 地收集生物量。将培养液倒出，并将细胞沉淀重悬浮于水：异丙醇的1:1溶液中。DNA-DNA 杂交实验由DSMZ(位于德国的德国微生物和细胞培养物保藏中心（German Collection of Microorganisms and Cell Cultures))进行。如 Cashion et al·，1977 所述，利用弗氏压 碎器（French pressure cell) (Thermo Spectronic)分离DNA，并通过羟基磷灰石上的色谱 进行纯化。如De Ley et al·，1970所述进行DNA-DNA杂交，考虑Huss et al·，1983所述 的修改，利用模型Cary 100 Bio UV/VIS分光光度计，其配备有Peltier恒温6x6自动多槽 架（multicell changer)和具有原位温度探头的的温度控制器（Varian)。DSMZ报道A396 与多噬伯克霍尔德氏菌之间的％ DNA-DNA相似性为37. 4%。当考虑特别委员会（ad hoc committee)对细菌物种定义的70% DNA-DNA相似性的阈值推荐（Wayne et al.，1987)时， 结果表明伯克霍尔德氏菌菌株A396不属于物种多噬伯克霍尔德氏菌。
[0262] 1. 4使用Biolog GN2平板确定生化特性（profile)
[0263] 对于碳源利用特性，使A396在马铃薯葡萄糖琼脂（PDA)中过夜生长。如制造商的 推荐（Biolog, Hayward, CA)，将培养物转移至BUG琼脂以产生足够的用于Biolog的培养物。
[0264] 微生物的生化特性通过接种于Biolog GN2,并且在24小时培养后利用MicroLog 4-自动microstation系统读取平板来确定。未知细菌的鉴定通过将其碳利用模式与 Microlog 4革兰氏阴性数据库比较来进行。
[0265] Biolog特性未发现明显确定的匹配。最接近的匹配均具有与A396小于35%的相 似性：多刺假单胞菌（Pseudomonas spinosa)(伯克霍尔德氏菌）、洋葱伯克霍尔德氏菌和 类鼻疽伯克霍尔德氏菌（Burkholderia pseudomalleii) D结果示于表1〇
[0266] 表1 :A396的生化特性
[0269] I. 5脂肪酸组成
[0270] 如（Vandamme et al.，1992)所述，在28 °C下培养24小时后，收获一菌环 (loopful)良好生长的细胞，并利用Sherlock微生物鉴定系统（MIDI)制备、分离和鉴 定脂肪酸甲酯。伯克霍尔德氏菌A396中存在的主要脂肪酸如下：16:0(24. 4% )，cyclo 17:0(7. 1% )，16:03-0Η(4· 4% )，14:0(3. 6% )，19:0c〇8c(2. 6% )cyclo, 18:0(1. 0% )。总 结特征（Summed feature) 8 (包含 18:1 ω 7c)和总结特征 3 (包含 16:1 ω 7c 和 16:1 ω 6c) 分别对应于总峰面积的26. 2 %和20. 2%。总结特征2包含12:0ALDE, 16: Iiso I，和 14:03-OH)，对应于总峰面积的5. 8% ;而总结特征5包含18:0ANTE和18:2c〇6,9c，对应于 0. 4%。A396中检测到的少量其他脂肪酸包括：13:1在12-13 (0. 2% )，14:1 ω 5c (0. 2% )，1 5:03-OH(0. 13%), 17:l〇7c(0. 14%), 17:0(0. 15%), 16:0iso 3-〇Η(0. 2%), 16:02-0Η(0. 8 % )，18:lc〇7c 11-甲基（0· 15% )和 18:12-0Η(0· 4% )。
[0271] Α396与MIDI数据库中已知的微生物菌株脂肪酸组成的比较表明，新菌株Α396中 的脂肪酸与新洋葱伯克霍尔德氏菌（Burkholderia cenocepacia)最相似。
[0272] L 6对抗生素的抗性
[0273] 如PML微生物技术数据表#535所述，利用Muller-Hinton培养基上的抗生素盘测 试伯克霍尔德氏菌A396的抗生素易感性。25°C下72小时培养后获得的结果如下表2所示。
[0274] 表2 :MBI-206对各种抗生素的易感性。
[0275] +++非常易感，++易感，-抗性
[0277] 结果表明伯克霍尔德氏菌A396的抗生素易感性谱与致病性洋葱伯克霍尔德氏 菌复合群菌株明显不同。伯克霍尔德氏菌A396对卡那霉素、氯霉素、环丙沙星、哌拉西 林、伊米配能以及磺胺甲基异噁唑与甲氧苄氨嘧啶的组合是易感的。作为比较，Zhou et al.，2007测试了分离自囊性纤维化患者的洋葱伯克霍尔德氏菌复合群中2, 621种不同菌 株的易感性，并发现所有的菌株中仅7%和5%分别对伊米配能或环丙沙星是易感的。他们 还发现所有的菌株中85%对氯霉素是抗性的（15%易感），并且95%对磺胺甲基异噁唑与 甲氧苄氨嘧啶的组合是抗性的（5%易感）C 3Zhou et al·，2007的结果与Pitt et al·，1996 类似，其在366种洋葱伯克霍尔德氏菌分离物中确定抗生素抗性，并且报导它们大部分对 环丙沙星、头孢呋辛、伊米配能、氯霉素、四环素和磺胺甲基异噁唑（sulphametoxacole)是 抗性的。
[0278] 2.实施例2作为除草剂的伯克霍尔德氏菌
[0279] 2. 1 研究 #1
[0280] 为了证实在初始除草剂筛选中发现的活性，利用源自新的伯克霍尔德氏菌物种的 5天的全细胞培养液的Amberlite 7 XAD树脂提取物进行体内研究。将干燥的粗提取物以 10mg/mL的浓度重悬浮于4%乙醇和0. 2%非离子型表面活性剂（glycosperse)，并且进一 步稀释至5. Omg/mL的浓度。将两个样品喷洒于4周龄的旋花（田旋花）植物上，并将该植 物于25°C下保持在生长光照下2周，在该点时进行植物毒性评价。在相同的天，将2周龄的 红根藜草植物喷洒渐增浓度的源自细菌培养物的粗提取物。测试浓度为I. 25、2. 5、5. 0和 10.0 mg/mL，并且将植物在植物毒性评价之前如上文所述进行培养。
[0281] 图2(旋花）和3(藜草）所示的结果证实不同浓度的伯克霍尔德氏菌粗提取物的 植物毒性效果，并且它们甚至在低处理浓度下也对藜草表现出良好的除草效果。两种提取 物处理（5和10mg/mL)导致旋花的矮化。
[0282] 2. 2 研究 #2
[0283] 使伯克霍尔德氏菌A396的新菌株在不确定的矿质培养基中生长5天 (25°C，200rpm)。将全细胞培养液利用XAD7树脂提取。将干燥的粗提取物以10mg/mL的浓 度重悬浮于4%乙醇和0. 2%非离子型表面活性剂，并且进一步稀释至5. 0、2. 5和I. 25mg/ mL的浓度。然后在以下表3所列的阔叶和草本（grass)杂草物种上进行测试。
[0284] 表3测试的阔叶和草本杂草物种
[0285]
[0286] 6fl oz/加仑比率的0· 2%的glycosperse和草甘膦（Roundup)溶液分别用作阴 性和阳性对照。
[0287] 将所有植物物种在4" x4"塑料盆中测试，重复3次。将未处理的对照植物用载体 溶液（4%乙醇、0. 2%的glycosperse)喷洒，并且将阳性植物用对应于6fl. oz/英亩比率的 草甘膦喷洒。将处理的植物保持在12h光照/12h黑暗条件下的温室中。物种#1-8的处理 后22天采集的植物毒性数据以及物种#9-12的处理后12天采集的植物毒性数据分别如表 5和6所示。这两个表的评定量表如表4所示：
[0288] 表4.评定量表
[0290] 表5.物种#1-8的植物毒性数据
[0292] *植物中导致的矮化约为未处理的植物大小的一半
[0293] 表6.物种#9-12的植物毒性数据
[0295] 基于这些研究中获得的结果，测试提取自分离的伯克霍尔德氏菌物种的发酵培养 液的、具有针对几种杂草物种的除草活性的化合物。在测试的12个物种中，藜和芥菜最敏 感，然后是锦葵和小蓬草。低达I. 25mg/mL的提取物浓度能够提供藜和芥菜的几乎完全的 控制，而锦葵和小蓬草则需要更高的浓度。
[0296] 在另一实验中，利用如上文所述相同的设计测试全身活性。将10mg/ml的伯克霍 尔德氏菌A396的粗提取物上清涂在豚草、芥菜、龙葵、马唐、小麦和稗草的第一片真叶上。 处理后7天评价幼苗。观察的症状包括：枯萎、翘曲、变白。在豚草、芥菜和龙葵的处理的叶 上的后一片叶中观察到除草活性。在测试的草中未观察到全身活性。在第二实验中，利用 如上文所述相同的实验设计评价相同粗提取物的5个部分（10mg/ml)。处理芥菜、小麦和马 唐的幼苗。处理后7天和20天，从利用C-18柱（Phenomenex Sepra C18-E, 50 μ m, _65A_) 的 5 个部分中的 4 个（091113B4F6、091113B4F7、091113B4F8 和 091113B4F9)在芥菜中观察 到除草活性的症状。在处理的叶上的后一片叶中观察到症状。在测试的草中未观察到全身 活性。
[0297] 3.实施例3.作为杀虫剂的伯克霍尔德氏菌
[0298] 3· L接触活性研究
[0299] 以下测定用于初步筛选阶段以确定源自新的伯克霍尔德氏菌物种的培养物的化 合物是否具有针对鳞翅目有害生物（幼虫）的接触活性。其进一步用作活性追踪分离 (bioassay-guided fractionation)的工具以确定源自全细胞培养液提取物的活性部分和 峰。该测试在单独的1.25oz塑料杯中利用粉纹夜蛾（Tricoplusia ni)晚期第三龄幼虫或 甜菜夜蛾（Spodoptera exigua)早期第三龄幼虫进行。将Icm X Icm片的固体甜菜夜蛾饲 料与一只幼虫一起放置在每个杯的中间。利用Hamilton精密注射器将1 μ 1等份的每种处 理（来自5日龄伯克霍尔德氏菌Α396培养物的全细胞培养液或提取物）注射在每只幼虫 的胸部（背侧）上。每种处理重复10次。水用作阴性对照处理，并且马拉硫磷用作阳性对 照处理。注射之后，将每个杯用具有气孔的石蜡膜（parafilm)覆盖，并且将杯在26°C下温 育3天。处理后24小时开始，每天进行死亡率评价。
[0300] 图4和5示出接触活性测试的结果。根据该结果，来自伯克霍尔德氏菌培养物的 过滤灭菌培养液在3天内杀死所有测试昆虫的约40%。稀释的培养液（50%)具有较低活 性，在测试的两种昆虫中导致约10 %的控制。
[0301] 3. 2.通过喂养的针对幼虫的活性
[0302] 测试通过喂养的直接毒性，利用饲料覆盖测试，按照使用微量滴定板的96-孔板 测定形式，每孔中有200 μ 1固体的人工甜菜夜蛾饲料。将一百（100)微升的各测试样品滴 在饲料的顶部（每孔中一种样品），并且使样品在流动空气下干燥直至表面干燥。将每种样 品（通过0. 2微米滤器过滤灭菌）重复6次测试，并且将水和商业Bt (苏云金芽孢杆菌）产 品分别用作阴性和阳性对照。每个孔中放置一只测试昆虫（粉纹夜蛾-Trichoplusia ni ; 甜菜夜蛾-Spodoptera exiqua;小菜蛾-Plutella xylostella)的第三龄幼虫，并且将板 用具有气孔的塑料盖覆盖。将具有昆虫的平板在26°C下温育6天，每天评价死亡率。
[0303] 图5示出来自饲料覆盖研究的数据，其中在四个不同培养液浓度：lx(100% )、 l/4x (25% )、l/8x (12. 5% )、l/16x (6. 125% )下测试甜菜夜蛾（Spodoptera exigua)早期 第三龄幼虫。数据显示未稀释的过滤灭菌的培养液能够在7天温育期结束时产生100%控 制。培养液的4倍稀释获得相似的控制，并且在研究结束时，未稀释和4倍稀释的培养液均 与用作阳性对照的Bt相当。然而，Bt的效果显著快于伯克霍尔德氏菌培养液的效果。针对 夜蛾幼虫的效力依赖于培养液浓度，并且两个最低的培养液浓度（12. 5%和6. 125% )提供 比两个最高的培养液浓度少的控制。然而，12. 5%稀释液的性能并不比25%稀释液低很多。 培养液的16倍稀释显然不够有效，并且在这个7天研究中仅提供夜蛾幼虫的部分（33% ) 控制。用于粉纹夜蛾和小菜蛾幼虫的相同培养液稀释液的相应死亡率略高，6. 125%培养液 分别杀死80 %和50 %的幼虫。
[0304] 3. 3.针对吸吮性昆虫的体外活性
[0305] 将5只椿象（Euschistus sp.)成虫放置在用一片纸巾内衬的各16oz塑料容器中。 将包含2mL的各测试样品（过滤灭菌的全培养液）的离心管用棉球塞住，并且放倒（laid down)在塑料容器的底部上。将一颗葵花籽放置在管旁作为诱饵。水以及推荐比例的除虫 菊酯与PBO的混合物的商业产品分别用作阴性和阳性对照。将每个容器用盖子盖上，并且 将它们在25°C下温育7天，每天检测死亡率。
[0306] 结果在下文表7中示出，并且它们显示在这个体外系统中用50%稀释的培养液， 到第7天时对吸吮性昆虫（椿象）约80 %的控制。在这个研究中，伯克霍尔德氏菌A396稀 释的发酵培养液在控制椿象中比用作阳性对照的商业产品更有效。有趣的是，未稀释的培 养液导致较低的昆虫控制，这可能是这种伯克霍尔德氏菌的新物种产生的活性次生代谢物 的拒食（摄食抑制）特性的指征。
[0307] 表7. A396对椿象的效果
[0309] 4.实施例4.体内的吸吮性昆虫测试
[0310] 在植物测定中测试过滤的全细胞培养液的体内效力，使用芥菜植物，并且将桃蚜 (Myzus persicae)用作测试昆虫。利用Paasche喷枪，用两种不同浓度（Ix和0. 5x)的过 滤灭菌的伯克霍尔德氏菌的全细胞培养液喷洒约1月龄的佛罗里达阔叶芥菜（Brassica sp.)植物。水和阿维菌素（Avid)的商业产品分别用作阴性和阳性对照。使植物在台面上 干燥，然后将它们放置在有盖（具有气孔）的6-杯塑料容器中。将10只不同发育阶段的 蚜虫放置在每株测试植物上，并且将植物在生长灯和25°C下温育7天。每天进行每株植物 上的蚜虫数量的评价（总结于下文表8中）并在笔记本中记录。
[0311] 表8· A396对桃蚜的体内效力
[0313] 根据结果，源自伯克霍尔德氏菌的新物种的培养物的过滤灭菌的培养液的两种浓 度均能够控制吸晚性昆虫桃姐（M. persicae)的群体生长。
[0314] 5.实施例5杀线虫活性
[0315] 5.1研究#1
[0316] 为了评价过滤灭菌的伯克霍尔德氏菌A396培养液对幼年（J2)根结线虫 (Meloidogyne incognita VW6)的活动力（以及随后的恢复）的影响，在24-孔塑料细胞培 养板上进行以下测试：
[0317] 将300-ul等份的每种测试溶液（Ix或0. 5x过滤灭菌的培养液）加入适当的孔， 然后将分配于10 μ 1的DI水中的15只线虫加入每个孔，将板用盖子盖上，并且在25°C下温 育24小时。水和20, OOOx稀释的Avid分别用作阴性和阳性对照。24小时后通过用针探 测每只线虫来检查每种化合物对线虫活动力的影响，并且将每个处理中不动的线虫的比例 以％标度记录在笔记本中。为了评价每种处理中活动力的恢复，从每个孔移除200 μ 1的体 积，并且通过加入2mL的DI水来稀释每个孔中的剩余溶液。将平板如上文所述再温育24 小时，然后进行第二次活动力评价。
[0318] 图6所示的结果显示两种测试浓度的过滤灭菌的培养液均可以固定自由生活的 幼年根结线虫。这种效果持续至少24小时，这表明伯克霍尔德氏菌A396培养液可以用来 防止植物的线虫感染。
[0319] 5. 2 研究 #2
[0320] 材料和方法
[0321] 小型雨淋（Drench)测试：在45ml盆中进行的温室测定中测试伯克霍尔德氏菌 A396全细胞培养液。将黄瓜种子cv. Toshka直接播种在装有砂壤土的盆中。10天后，将盆 各自用5ml悬浮液处理。使用的具体量如表9所不：
[0322] 表 9
[0324] 如表9所示，将盆用根结线虫（M. incognita)的3000个卵接种。每种处理和比例 准备4个重复。试验施用和接种后14天收获试验。根据Zeck虫癭指数（Zeck, 1971)评价 根癭（root galling)。植物毒性测量为与对照相比的根癭减少。结果如图9和10所示。
[0325] 在1号小型雨淋测试中（参见图9)，处理的活性非常高，并且当以lOOml/L伯克 霍尔德氏菌A396的浓度施用时观察到几乎100%的减少。噻唑磷表现照常（在20ppm下 100 %控制）。
[0326] 在2号小型雨淋测试中（参见图10)，在100ml/L的最高浓度下实现根癭的100% 减少，在1.51111凡下降至约50%。噻唑磷表现照常（在20卩卩1]1下100%控制）。
[0327] 5. 3 研究 #3
[0328] 为了证实伯克霍尔德氏菌A396的杀线虫活性，进行对黄瓜（Cucumis sativus) 的温室研究，利用伯克霍尔德氏菌A396的全细胞培养液作为测试产物以控制根结线虫 (Meloidogyne incognita)。将一株黄瓜植物/盆种植在土壤中，并且使其在人工光照和 28°C下于温室中生长。将具有一株植物的各盆用等份（约80mL)的未稀释的测试产物或用 水稀释至5%的测试产物处理。每个伯克霍尔德氏菌A396处理以及Temik(以标记比率） 的阳性对照处理和无添加的阴性对照由5个重复组成。使植物在温室中生长60天，然后将 每株植物收获并评价新鲜枝重和根重。记录每个盆中线虫卵的数量，并且计算表明每克根 质量的卵数量的参数。进行统计学分析（ANOVA)，计算p〈0. 1的处理平均值之间的统计学差 异。下文表10所示的数据显示，虽然与未处理的对照没有统计学差异，但是用A396全细胞 培养液处理的盆包含比未处理的对照盆更少的线虫卵。当未稀释的培养液用作处理时，计 算为每个根质量的卵数量的效果更明显。
[0329] 表10. A396全细胞培养液对黄瓜枝重和根重、每盆的根结线虫（M. incognita)卵 总数量以及每克根质量的卵数量的影响。
[0331] 6.实施例 6Templazole A 和 Templazole B 的分离
[0332] 材料和方法
[0333] 以下方法用于纯化从伯克霍尔德氏菌的细胞培养物提取的Templazole A和 TemplazoleB(见图 7):
[0334] 通过在室温下将细胞悬浮液与树脂以225rpm振荡2小时来用Amberlite XAD-7树 脂（Asolkar et al·，2006)提取源自IO-L伯克霍尔德氏菌（A396)在Hy大豆（soy)生长 培养基中发酵的培养液。通过粗棉布（cheesecloth)过滤来收集树脂与细胞物质，并用DI 水洗涤以除去盐。然后将树脂、细胞物质和粗棉布在丙酮中浸泡2h，然后将丙酮过滤并利用 旋转蒸发仪真空干燥以获得粗提取物。然后将粗提取物利用反相C18真空液相色谱（H 2O/ CH3OH ;梯度90:20-0:100% )分级分离以获得10个部分。然后将这些部分利用旋转蒸发仪 浓缩至干燥，并将所得的干燥残留物利用96孔板萬苣接种（lettuce seeding)测定来筛选 生物学活性。然后将活性部分进行反相HPLC (Spectra System P4000 (Thermo Scientific) 以获得纯化合物，然后将其在上述生物测定中筛选以定位/鉴定活性化合物。为了证实化 合物的性质，记录额外的光谱数据，如LC/MS和NMR。
[0335] 利用 HPLC C-18 柱（Phenomenex, Luna IOu C18(2) 100A, 250x 30)，水：乙腈梯 度溶剂系统（O-IOmin ;80 % CH3CN 水溶液，10-25min ;80-65 % CH3CN 水溶液，25-50min ; 65-50 % CH3CN 水溶液，50-60min;50-70 % CH3CN，60-80min;70-0 % CH3CN 水溶 液，80-85min ;0 - 20 % CH3CN水溶液），以8mL/min的流速和210nm的UV检测，进一 步纯化活性部分4以获得templazole B，保留时间为46. 65min。还利用HPLC C-18 柱（Phenomenex, Luna IOu C18 (2) 100A, 250x 30)，水：乙臆梯度溶剂系统（O-IOmin ; 80 % CH3CN 水溶液，10-25min ;80-60 % CH3CN 水溶液，25-50min ;60-40 % CH3CN 水溶 液，50-60min ;40% CH3CN, 60-80min ;40 - 0% CH3CN 水溶液，80-85min ;0-20% CH3CN 水溶 液），以8mL/min的流速和210nm的UV检测，纯化其他活性部分6以获得templazole A，保 留时间为70. 82min。
[0336] 在 LCQ DECA XPplus质谱仪（Thermo Electron Corp.，San Jose, CA)上，利用全扫 描模式的正和负电离模式（m/z 100_1500Da)，在 Thermo Finnigan LCQ Deca XP Plus 电 喷射（ESI)装置上，进行纯化合物的质谱分析。热高效液相色谱（HPLC)装置配有Finnigan Surveyor PDA plus 检测器、自动进样器 plus、MS 栗和 4. 6mm X 100mm Luna C185ym 柱 (Phenomenex)。溶剂系统由水（溶剂A)和乙腈（溶剂B)组成。流动相以10%溶剂B开始， 在20min内线性增加至100%溶剂B，并保持4min，最后在3min内返回10%溶剂B，并保持 3min。流速为0. 5mL/min。进样体积为10yL，并且在室温下将样品保持在自动进样器中。 利用LC和反相色谱，通过LC-MS来分析化合物。本发明的化合物的质谱分析在如下条件下 进行：对于夹套气（sheath)和辅助/吹扫气（aux/sweep)流速，氮气的流速分别固定为30 和15arb。电喷射电离用设定为5000V的喷射电压和35. OV的毛细管电压进行。毛细管温 度设定为400°C。数据用Xcalibur软件分析。活性化合物templazole A的分子量为298， 并且在负电离模式中表现出297. 34的m/z离子。templazole B的LC-MS色谱表明258的 分子量，并且在负电尚模式中表现出257. 74的m/z尚子。
[0337] 1Hj3C和2D NMR谱在Bruker 500MHz&600MHz梯度场分光计中测量。在内标四甲 基硅烷上设定参照（TMS，0· OOppm)。
[0338] 对于templazole A的结构鉴定，将分子量为298的纯化合物利用500MHz NMR装 置进一步分析，其1H NMR δ 值为 8. 44, 8. 74, 8. 19, 7. 47, 7. 31，3. 98, 2. 82, 2. 33, L 08,并且 13C NMR δ 值为163.7，161.2，154.8，136.1，129.4，125.4，123.5，123.3，121.8，121.5，111· 8, 104·7,52·2,37·3,28· 1，22.7,22.7。Templazole A 的 UV 吸收带为 226、275、327腹，这表 明存在吲哚和噁唑环。通过1H^3C NMR和HRESI MS数据m/z 299. 1396 (M+H)+的解读确定 的分子式为C17H18N2O 3 (计算值C17H19N2O3, 299. 1397)，这产生10个双键等同物所显示的高度 不饱和。13C NMR谱揭示所有17个碳的信号，包括2个甲基、甲氧基、亚甲基碳、脂肪族次甲 基、酯羰基以及11个芳香族碳。由1H- 1H COSY和HMBC谱数据揭示存在3'-未取代的吲哚。 1H-1H COSY和HMBC还表明存在羧酸甲酯基团和-CH2-CH-(CH3)2侧链。从 1H-1H C0SY、13C和 HMBC数据的详细分析可知，该化合物包含噁唑核心。从2D分析发现，异丁基侧链连接在C-2 位置，羧酸甲酯连接在C-4位置，并且Π 引噪单元连接在C-5位置以给出templazole A。
[0339] 第二种除草活性化合物templazole B的分子量为258,其利用500MHz NMR装置 进一步分析，其1H NMR δ 值为 L 08, 7. 06, 6. 75, 3. 75, 2. 56, 2. 15, (λ 93, (λ 93,并且 13C NMR 值为 δ 158. 2, 156. 3, 155. 5, 132. 6, 129. 5, 129. 5, 127. 3, 121. 8, 115. 2, 115. 2, 41. 2, 35. 3 ，26