专利名称：杉木优良无性系的组织培养增殖方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域，具体是指杉木优良无性系的组织培养增殖方法。
背景技术：
杉木(Cunninghamia lanceolata(lamb.)Hook)为杉科植物，是一种适应性广、材质优良的经济林树种。但由于杉木是异花授粉树种，用种子繁殖，个体分化大，难以保持杉木母体的性状；而采用常规的扦插、压条或嫁接等无性繁殖方法，繁育速度慢，难以满足日益增长的市场需求。组织培养方法是一种快速无性繁殖技术，选择杉木优良无性系材料，采用组织培养方法，既可以保持母体的优良性状，又可以有效节约生产成本。国内外对杉木树种的组织培养研究虽然一直在进行，但由于组织培养中增殖技术问题没有突破，现有的杉木组织培养方法中增殖周期长、增殖倍率低，因此未能实现产业化育苗生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种杉木优良无性系的组织培养增殖方法，改进现有的增殖技术，缩短增殖周期，提高增殖倍率及成活率，并与其它相关技术结合，从而实现杉木产业化生产。
为了实现上述目的，本发明的解决方案是杉木优良无性系的组织培养增殖方法，将诱导培养出的杉木嫩芽接入增殖培养基上，增殖培养基为含有MS(Marashige&Sroog)常规基本培养基1～1/2、6-BA(6-卞基嘌呤)0.5～1.0mg/L、NAA(萘乙酸)0.2mg/L，培养条件为温度23±2℃、光照强度控制在1600～2200Lx。
上述增殖培养基为MS 7/10、6-BA 0.5～0.8mg/L、NAA0.2mg/L。
上述增殖培养采用自然光照培养。
上述增殖培养环境湿度为35～45％。
上述增殖培养环境湿度为40％。
上述增殖培养的增殖周期为35～45天。
上述所有使用药品试剂均为分析纯。
采用上述方法后，杉木优良无性系的组织培养具体方法是从经过鉴定的具有优良性状的杉木母体上剪取腋芽作为外植体，先用洗衣粉浸泡5～10分钟，置于清水下冲洗30分钟；用酒精浸泡，再用0.1％HgCl2进行消毒3分钟后，置于无菌条件下进行清洗，然后接入诱导培养基上，在温度23±2℃暗培养一周后，置于光照培养，待诱导出嫩芽后，再运用本发明的增殖方法，接入增殖培养基上，在温度23±2℃、光照强度1600～2200Lx的增殖培养条件下，进行增殖培养，增殖周期为35～45天时，增殖倍率为2.4～2.8倍，增殖速度快、成活率高，使得杉木的育苗成本降低、生产效率提高，可以获得最大的经济效益，因此，本发明的增殖培养技术与其它相关技术结合，完全可以满足杉木产业化生产的要求，即可实现杉木产业化生产。
具体实施例方式
本发明选取的材料是杉木优良无性系，红心材比率高，而且速生性能好。以这种母体的腋芽作为外植体，外植体消毒时，先用洗衣粉浸泡7分钟，置于清水下冲洗30分钟；用酒精浸泡数秒后，再用0.1％HgCl2消毒3分钟，用无菌水冲洗6次，经过消毒的外植体，在无菌条件下，接入诱导培养基上。在温度23±2℃暗培养一周后，置于光照培养，待诱导出嫩芽后，接入增殖培养基上，作为实验材料。
下面将通过一些具体的实验情况来说明本发明所述杉木优良无性系组织培养增殖最佳的培养基配比及有效的增殖方法。
各组实验的培养条件为温度23±2℃、光照强度控制在1600～2200Lx，自然光照培养，环境湿度40％，所有使用药品试剂均为分析纯。
第一，是大量元素对增殖苗的影响，通过改变培养基中大量元素的含量，取MS、7/10MS(取MS大量元素的7/10，下同)、1/2MS三组培养基进行实验，确定大量元素对增殖苗的影响。
表1 大量元素对杉木增殖苗的影响
上表表明7/10MS对杉木组培增殖苗的生长促进作用明显。
第二，是激素对杉木增殖苗的影响，以改良的MS(MS7/10)为基本培养基，添加6-BA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.2mg/L、KT 0.5～1.0mg/L+NAA 0.2mg/L进行实验，确定杉木增殖苗的最佳激素配比及使用浓度，每组实验至少600个样本，三次重复。
表2 激素对杉木增殖苗的影响
*KT为糠氨基嘌呤上表显示，使用KT，有利于母苗的营养生长，茎叶的生长充分，但侧芽生长较差，54个母苗，接76个茎段，增殖倍率达到1.4倍。而使用6-BA增殖苗生长好，特别是6-BA 0.8mg/L+NAA0.2mg/L对促进增殖苗生长效果明显，苗生长健壮，54个母苗，接126个茎段，增殖倍率达到2.3倍。
由上述第一和第二可见，本发明提供的增殖培养基MS 1～1/2+6-BA 0.5～1.0mg/L+NAA 0.2mg/L，在温度23±2℃、光照强度控制在1600～2200Lx的条件下，确实具有高增殖倍率，增殖速度快，成活率高。
第三，是不同增殖时间对增殖倍率的影响。
表3 不同增殖时间对增殖倍率的影响
*增殖培养基为7/10MS+6-BA 0.8mg/L+NAA 0.2mg/L上表显示，延长培养时间可以提高增殖倍率，杉木芽生长更为粗壮，叶色更为浓绿，但持续延长培养时间对增殖倍率的影响不明显，因此，杉木最佳的组培增殖周期为35-45天，增殖倍率为2.4-2.8倍。
第四，不同的接种方式对杉木增殖倍率和生长情况的影响。
表5 不同切割方式对增殖倍率和生长情况的影响
实验显示，采用剥离法，虽然嫩芽的生长情况受到一定影响，但是所有的顶芽和侧芽都被从母体上剥离下来，这样去除了顶端优势，使得基部组织更容易长出新的嫩芽，从而获得更高的增殖倍率。
第五，温度以24±1℃为宜，温度太高或太低都不利于增殖培养；光照强度控制在1600～2200Lx为宜，光照强度太强或太弱都不利于增殖培养；环境湿度以40％左右为宜，环境湿度太大或环境太干燥都不利于增殖培养。
综上所述，增殖倍率是影响杉木产业化育苗的一个决定性因素，提高增殖倍率是本发明重点解决的问题。本发明揭示的增殖方法(培养基配比和培养条件)解决了杉木组织培养增殖周期长，增殖倍率低的技术问题，具有增殖速度快、成本低、生产效率高等特点。增殖周期为35-45天时，增殖倍率为2.4-2.8倍，可以获得最大的经济效益。此技术完全可以满足杉木产业化生产的要求。
权利要求
1.杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于将诱导培养出的杉木嫩芽接入增殖培养基上，增殖培养基配方为MS 1～1/2、6-BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.2mg/L，培养条件为温度23±2℃、光照强度控制在1600～2200Lx。
2.如权利要求1所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于增殖培养基配方为MS 7/10、6-BA 0.5～0.8mg/L、NAA0.2mg/L。
3.如权利要求1所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于增殖培养采用自然光照培养。
4.如权利要求1所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于增殖培养环境湿度为35～45％。
5.如权利要求4所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于增殖培养环境湿度为40％。
6.如权利要求1所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于增殖培养的增殖周期为35～45天。
7.如权利要求1所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于诱导培养出的杉木嫩芽经剥离法剥离后，再接入增殖培养基进行增殖培养。
8.如权利要求1所示杉木优良无性系的组织培养增殖方法，其特征在于上述所有使用药品试剂均为分析纯。
全文摘要
本发明公开一种杉木优良无性系的组织培养增殖方法，将诱导培养出的杉木嫩芽接入增殖培养基上，增殖培养基为MS 1～1/2、6－BA0.5～1.0mg/L、NAA 0.2mg/L，培养条件为温度23±2℃、光照强度控制在1600～2200Lx。本发明改进现有的增殖技术，缩短增殖周期，增殖周期为35～45天，提高增殖倍率为2.4～2.8倍，成活率高，使得杉木的育苗成本降低、生产效率提高，可以获得最大的经济效益，并与其它相关技术结合，完全可以满足杉木产业化生产的要求，即可实现杉木产业化生产。
文档编号C12N5/04GK101027972SQ200610036938
公开日2007年9月5日 申请日期2006年8月1日 优先权日2006年8月1日
发明者赖桂星, 郑仁华, 蔡干强, 苏志强, 朱文辉, 林良科, 陈志华 申请人:厦门涌泉科技有限公司