专利名称：酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种利用碱性蛋白酶Mcalase酶解制备癞葡萄降糖活性肽的方法。技术背景癞葡萄属葫芦科，是一种蔓性植物，医学上称山苦瓜，但与食用苦瓜 不同。癞葡萄的果实富含皂甙、多糖和多肽蛋白等生物活性物质，具有降 血脂、降血糖等保健功能。目前从苦瓜中提取的两种活性肽多肽-P和MC6 都是从原料中直接提取，但天然存在的活性肽含量低。因癞葡萄中的蛋白 含量丰富，利用这部分蛋白来酶解制备癞葡萄降糖活性肽将利于癞葡萄的 综合利用，而通过酶解方法制备降血糖活性肽至今尚未见有报道。发明内容本发明提供了一种通过酶水解癞葡萄蛋白制备降糖活性肽工艺，获得 的肽含量高，降血糖功效明显，促进了癞葡萄的综合利用。具体是这样来实施的酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，其特征在于将癞葡萄蛋白千粉加水溶解成质量浓度为4-8%的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加 酶量为癞葡萄蛋白干粉重量的1-2%;酶解pH值为8.5-9.5，酶解温度为 55-62。C,水解度(DH)达到8-12%时终止反应。以工艺将癞葡萄蛋白酶解 后，通过四氧嘧啶型糖尿病小鼠验证其降糖活性，结果表明，癞葡萄蛋白 不具有降糖活性，其酶解物具有显著的降糖活性。本工艺采用的癞葡萄蛋白干粉由癞葡萄果实提取干燥而得，酶解时， 为使酶解效率高，最佳的参考指标为底物浓度5-6% (质量浓度)，碱性 蛋白酶Alcalase加酶量为癞葡萄蛋白干粉重量的1. 4-1. 6%;酶解pH值为 9-9. 5，酶解温度为58-60。C，水解度(DH)达到11%时终止反应。经Alcalase 酶水解后，酶解产物具有显著的降血糖作用，其中DH为11时的酶解产物 降血糖作用最强。本工艺扩大了癞葡萄的应用范围，通过Alcalase酶解制备癞葡萄降糖 活性肽，得到癞葡萄蛋白酶解物后，通过四氧嘧啶型糖尿病小鼠验证其降 糖活性，癞葡萄蛋白不具有降糖活性，其酶解物具有显著的降糖活性。
具体实施方式
实施例1,酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，将癞葡萄蛋白千粉加水溶解成质量浓度为4%的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癞 葡萄蛋白干粉重量的2%，酶解pH值为8.5，酶解温度为62t:，水解度(DH) 达到8%时终止反应。实施例2.酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，将癞葡萄蛋白干粉 加水溶解成质量浓度为5%的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癞 葡萄蛋白干粉重量的1.6%，酶解pH值为9. 5，酶解温度为6(TC,水解度(DH) 达到10%时终止反应。实施例3.酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，将癞葡萄蛋白干粉 加水溶解成质量浓度为6%的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癩 葡萄蛋白干粉重量的1%，酶解pH值为9，酶解温度为58。C，水解度(DH) 达到12%时终止反应。实施例4.酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，将癞葡萄蛋白干粉 加水溶解成质量浓度为8%的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癞 葡萄蛋白干粉重量的1. 4%，酶解pH值为9. 5，酶解温度为55。C，水解度(DH) 达到11%时终止反应。实施例5.酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，将癞葡萄蛋白干粉 加水溶解成质量浓度为5%的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癞 葡萄蛋白干粉重量的1. 5%，酶解pH值为9，酶解温度为60°C，水解度(DH) 达到11%时终止反应。上述实施例中，酶解均能获得降糖效果较好的酶解产物，尤以实施例5 的酶解产物降血糖作用最强。
权利要求
1. 酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，其特征在于将癞葡萄蛋白干粉加水溶解成质量浓度为4-8％的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癞葡萄蛋白干粉重量的1-2％；酶解pH值为8.5-9.5，酶解温度为55-62℃，水解度达到8-12％时终止反应。
2. 根据权利要求1所述的工艺，其特征在于癞葡萄蛋白干粉由癩葡萄果 实提取干燥而得。
3. 根据权利要求1所述的工艺，其特征在于底物浓度5-6%。
4. 根据权利要求1所述的工艺，其特征在于碱性蛋白酶Alcalase加酶 量为癞葡萄蛋白干粉重量的1. 4-1. 6%。
5. 根据权利要求l所述的工艺，其特征在于酶解pH值为9-9.5。
6. 根据权利要求1所述的工艺，其特征在于酶解温度为58-6(TC。
7. 根据权利要求1所述的工艺，其特征在于水解度达到ll簡寸终止反应。
8. 根据权利要求l、 2、 3、 4、 5、 6、 7之一所述的工艺，其特征在于将 癞葡萄蛋白干粉加水溶解成质量浓度为5%的底物，添加碱性蛋白酶 Alcalase，加酶量为癞葡萄蛋白干粉重量的1. 5%，酶解pH值为9，酶解温度 为60°C，水解度达到11%时终止反应。
全文摘要
酶解癞葡萄蛋白制备降血糖活性肽工艺，将癞葡萄蛋白干粉加水溶解成质量浓度为4-8％的底物，添加碱性蛋白酶Alcalase，加酶量为癞葡萄蛋白干粉重量的1-2％；酶解pH值为8.5-9.5，酶解温度为55-62℃，水解度(DH)达到8-12％时终止反应，本工艺扩大了癞葡萄的应用范围，通过Alcalase酶解制备癞葡萄降糖活性肽，得到癞葡萄蛋白酶解物后，通过四氧嘧啶型糖尿病小鼠验证其降糖活性，癞葡萄蛋白不具有降糖活性，其酶解物具有显著的降糖活性。
文档编号C12P21/02GK101225425SQ20071001936
公开日2008年7月23日 申请日期2007年1月18日 优先权日2007年1月18日
发明者坚 汤, 蒋再良, 袁晓晴, 顾小红 申请人:江南大学;无锡市富仁生物科技有限公司