专利名称：抗高血压药物疗效检测的制作方法
技术领域：
本发明涉及分子生物学和医学领域，更具体的，本发明涉及一种检测个体抗高血 压药物疗效的试剂盒，通过检测降压药物用药靶向位点CYP3A4基因、CYP2D6基因、CYP2C9 基因和CYP2C19基因多态性位点来评估个体抗高血压药物疗效。
背景技术：
高血压可分为原发性及继发性两大类。在绝大多数患者中，高血压的病因不明，称 之为原发性高血压，占总高血压着的95%以上；在不足5%患者中，血压升高是某些疾病的 一种临床表现，本身有明确而独立的病因，称为继发性高血压。原发性高血压(primary hypertension)是以血压升高为主要临床表现的综合征， 简称为高血压。高血压是多种心、脑血管疾病的重要病因和危险因素，影响重要脏器例如 心、脑、肾的结构与功能，最终导致这些器官的功能衰竭，迄今仍是心血管疾病死亡的主要 原因之一。治疗高血压的主要目标是最大限度地降低新血管病死亡和病残的总危险。治疗原 则包括先基础治疗，后药物治疗；基础治疗包括改善生活方式，消除不利于心理和身体健 康的行为和习惯，减少高血压以及其他心血管病的发病危险。当前用于降压的药物主要为 以下6类，即利尿药、β受体阻滞剂、血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、血管紧张素II体拮 抗剂、钙拮抗剂和α阻滞剂。CYP3A4，5是重要的I相代谢酶，主要通过C-或N-脱烃、C-羟化等反应来代谢药 物。参与约50%的药物代谢。高血压治疗常用药物钙通道阻滞剂(氨氯地平、地尔硫卓、 非洛地平、乐卡地平、硝苯地平、尼卡地平、尼索地平、尼群地平、维拉帕米)，β受体阻滞剂 (卡维地洛)，肾素-血管紧张素系统抑制药(氯沙坦、厄贝沙坦、依普利酮)CYP3A4，5都参 与了代谢过程，并且有的处于主要代谢途径，此时酶活性的高低对药物药效及安全性的影 响极大。因此，CYP3A4，5基因多态性导致的酶活性改变将在很大程度上反映抗高血压药物 的用药效果，CYP3A4，5基因的分型检测对于临床抗高血压药物的用药指导具有的重要现实
眉、οCYP2D6是重要的I相代谢酶，参与约25%临床常用药物的代谢，包括β受体阻滞 剂、抗抑郁药物、抗精神病药物及化疗药物等。由于CYP2D6基因存在遗传多态性导致个体 之间CYP2D6酶活性有差异，出现药物代谢能力的多态性，导致病人用药时很难获得最佳血 药浓度，如血药浓度过低无法有效发挥药物疗效或浓度过高出现毒副作用。高血压治疗常 用药物钙通道阻滞剂(维拉帕米)，β受体阻滞剂(烯丙洛尔、普萘洛尔、卡维地洛美托洛 尔、丁呋洛尔、奈比洛尔)，CYP2D6都参与了代谢过程，并且对于某些药物2D6是主要代谢 酶，此时酶活性的高低对药物药效及安全性的影响极大。因此，CYP2D6基因多态性导致的 酶活性改变将在很大程度上反映抗高血压药物的用药效果，CYP2D6基因的分型检测对于临 床抗高血压药物的用药指导也具有的重要现实意义。CYP2C9是重要的I相代谢酶，高血压治疗常用药物钙通道阻滞剂(地尔硫卓)，β受体阻滞剂(卡维地洛)，以及肾素_血管紧张素系统抑制药(氯沙坦、厄贝沙坦)CYP2C9 都参与了代谢过程，并且对于某些药物2C9是主要代谢酶，此时酶活性的高低对药物药效 及安全性的影响极大。因此，CYP2C9基因多态性导致的酶活性改变将在很大程度上反映抗 高血压药物的用药效果，CYP2C9基因的分型检测对于临床抗高血压药物的用药指导也具有 的重要现实意义。CYP2C19是重要的I相代谢酶，高血压治疗常用药物β受体阻滞剂(普萘洛尔)， CYP2C19参与代谢过程，该酶活性的高低对普萘洛尔的药效及安全性的影响极大。因此， CYP2C19基因多态性导致的酶活性改变将在很大程度上反应该药物的用药效果，CYP2C19 基因的分型检测对于临床抗高血压药物的用药指导也具有的重要现实意义。
发明内容
基于降压药物用药靶向位点CYP3A4基因、CYP2D6基因、CYP2C9基因和CYP2C19基 因多态性可用来评估个体抗高血压药物疗效的基础上，本发明提供一种检测个体抗高血压 药物疗效的试剂盒。该试剂盒包括检测降压药物用药靶向位点CYP3A4基因、CYP2D6基因、CYP2C9基因和CYP2C19基 因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对；荧光定量PCR反应组件(包括Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、反应缓冲液、去离 子水等)。本试剂盒中所述的特异性荧光探针对是能够轻易完成设计的，特异性荧光探针对 可用常规的探针合成技术进行合成。本发明试剂盒的组分和含量包括IOX荧光定量PCR反应缓冲液4 μ 1，25mM dNTP 混合液 0. 4 μ 1，25mM MgC12 溶液 2· 4μ 1，5units/ μ 1 Taq DNA 聚合酶 0. 1 μ 1，20 μ M特异性引物对每条引物各0. 225 μ 1，10 μ M特异性荧光探针对每条探针各0. 25 μ 1，去离子水 21.2 μ 1。本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20°C。
具体实施例方式下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。下列实施例中未注明具体条件的实验 方法，通常按照常规条件，或按照厂商所建议的条件。实施例检测试剂盒的使用步骤1:DNA模板的抽取用硅胶吸附法抽提口腔上皮细胞的基因组DNA。步骤2 荧光定量PCR反应使用检测试剂盒中的荧光定量PCR套装，进行4次独立的荧光定量PCR反应，每次
4反应的体系为总体积10 μ 1，包含浓度为20ng/μ 1的DNA模板2 μ 1、1 μ 1 IOX荧光定量PCR 反应缓冲液、0. 1 μ 1 25mM dNTP 混合液、0. 6 μ 1 25mM MgCl2 溶液、0. 025 μ 1 (5units/ μ 1) Taq DNA聚合酶、20 μ M的有义引物和反义引物各0. 225 μ 1、10 μ M的带VIC荧光探针和带 FAM荧光探针各0. 25 μ 1，去离子水5. 325 μ 1。在PCR扩增仪上进行反应，反应条件为50°C、2分钟，95°C、10分钟，进行60个循环 的95°C、30秒，60°C、1分钟。反应结束后在荧光定量PCR仪上读取样品荧光量。步骤4 基因型分析根据试剂盒使用说明书标示的基因分型图示对SNP位点进行基因型分析。熟悉荧光定量PCR技术的本领域技术人员能够通过辨识荧光定量PCR仪上显示 的最终样品荧光量，根据不同序列探针荧光信号的强弱即可确定所检测的SNP位点的基因 型。
权利要求
一种检测个体抗高血压药物疗效的试剂盒，其特征在于包括检测降压药物用药靶向位点CYP3A4基因、CYP2D6基因、CYP2C9基因和CYP2C19基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、Taq酶、dNTP混合液、MgCl2溶液、荧光定量PCR反应缓冲液、去离子水。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于试剂盒的组分和含量包括 IOX荧光定量PCR反应缓冲液4 μ 1，`25mM dNTP 混合液 0. 4 μ 1，`25mM MgCl2 溶液 2. 4 μ 1，`5units/y 1 Taq DNA 聚合酶 0.1 μ 1，`20 μ M特异性引物对每条引物各0. 225 μ 1，`10 μ M特异性荧光探针对每条探针各0. 25 μ 1，去离子水21. 2 μ 1。本试剂盒供一人份检测应用，试剂盒的保存温度为-20°C。
全文摘要
本发明公开了一种检测个体抗高血压药物疗效的试剂盒。该试剂盒包括检测降压药物用药靶向位点CYP3A4基因、CYP2D6基因、CYP2C9基因和CYP2C19基因多态性位点的特异性引物对及特异性荧光探针对、荧光定量PCR常规组件等。本发明的试剂盒通过检测降压药物用药靶向位点CYP3A4基因、CYP2D6基因、CYP2C9基因和CYP2C19基因多态性位点来评估个体抗高血压药物疗效。
文档编号C12Q1/68GK101928757SQ20091005395
公开日2010年12月29日 申请日期2009年6月26日 优先权日2009年6月26日
发明者冯哲民, 邹祖烨 申请人:上海主健生物工程有限公司