专利名称：：一种具有祛斑、抗辐射功能的保健食品及其制备方法一种具有祛斑、抗辐射功能的保健食品及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种具有祛斑、抗辐射功能的保健食品，尤其是该保健食品适合制成软胶囊。属保健食品领域。随着人民生活的提高，美容越来越受到大家的重视，祛除黄褐斑、抗辐射的相关产品，也逐渐成为美容市场的主流。但大多以单组分的形式起作用，协调作用差，功效不明显，且重金属含量髙，易引起皮肤过敏，仍不能满足市场的需求。市场证明，人们对安全高效、功能全面的祛斑、抗辐射保健食品需求很大。至今为止，还没有发现任何有关本发明保健食品的报道。本发明人经过反复研究，并通过动物和临床试验的反复验证，终于找到了祛斑、抗辐射效果更好的组合物，从而完成了本发明保健食品。本发明的目的就是提供一种更为安全有效的祛斑、抗辐射的保健食品。本发明的另外一个目的是提供了该保健食品的制备方法，尤其是其软胶囊的制备方法。本发明保健食品选择蜂胶、葡萄籽提取物、当归提取物、橄榄油进行组合，将这些组合物组合使得其各自功效产生协同作用，从而能够起到祛斑、抗辐射的效果。其中选用蜂胶是因其能增强和促进肠蠕动，中和或分解宿便中的毒素，调整机体代谢过程，并可净化血液，促进皮下组织血液循环，营养肌肤，分解色斑，消除炎症，使肌肤重现生机，红润光洁，富有弹性。选用葡萄籽提取物是因其所含原花青素具有抗辐射、抗氧化、保护心血管、抗肿瘤、抗突变、美容护肤等作用。机体受辐射后可产生内源性自由基，引发脂质过氧化等损伤，造成细胞损害。而葡萄籽提取物原花青素具有清除自由基，抑制氧化损伤的功效，能起到对抗辐射的良好作用。葡萄籽提取物可促使胶原蛋白的适度交联，有效清除自由基，从而保持皮肤柔顺、光滑。葡萄籽提取物具有清除自由基，阻断弹性蛋白酶的产生并抑制其活性，从而改善皮肤健康状况。选用当归提取物是丙其主要化学成分为蒿本内酯，其具有补血活血，调经止痛，润肠通便的功能。当归提取物有极强的抑制酪氨酸酶活性作用，抑制黑色素的形成，对治疗黄褐斑、雀斑等色素性皮肤病收效良好。选用橄榄油既可作为以上组合物的基质，又有辅助美容保健的功效，且含有丰富的脂溢性维生素A、D、E、K，不饱和脂肪酸含量高达80%以上，能滋润干燥的皮肤，促进人体代谢，保护及强化皮肤弹性，抑制皮肤老化及弹性下降、吸收皮下多余脂肪。本组合以蜂胶祛黄褐斑作用、葡萄籽提取物抗辐射作用为基础，辅以当归的补血祛斑作用、蜂胶的抗辐射作用、葡萄籽提取物的美容作用，四种精选物质协同作用，起到祛黄褐斑、抗辐射的良好保健效果。本发明保健食品的用量也是经发明人进行大量实践、摸索总结得出的，各组分用量在下述重量份范围都具有较好效果蜂胶750-1100份、葡萄籽提取物400-490份、当归提取物100-160份、橄榄油3100-3800份。优选为蜂胶1000份、葡萄籽提取物450份、当归提取物150份、橄榄油3400份。本发明中所述的蜂胶是蜜蜂从植物的树芽、树皮等部位采集的树脂，再混以蜜蜂的舌腺、蜡腺等腺体的分泌物，经蜜蜂加工转化而成的一种胶状物质。本发明中所述的葡萄籽提取物原花青素是广泛存在于植物界的属于双黄酮衍生物的天然多酚化合物，葡萄籽提取物中原花青素含量可高达95%。本发明中所述的当归提取物为伞形科植物当归的干燥根，经现代工艺提取精制而成。本发明中所述的橄榄油是油橄榄油果直接冷压后，油水自然分离的果油，没有经过任何化学处理。3优选的本发明保健食品的制备方法如下a)称取各原料蜂胶1000份、葡萄籽提取物450份、当归提取物150份、橄榄油3400份，备用b)将所述重量配比的蜂胶、葡萄籽提取物、当归提取物粉碎过120目筛混合均勾，制得混合物；c)将所述重量配比的橄榄油置不锈钢配料锅内加热至50'C-70C加入b)所得混合物，经胶体磨2-3遍，抽掉气泡，冷却后就制备成了本发明保健食品。本发明保健食品可以加入因制备不同服用方式所需的常规辅料，制备成任何一种方便服用的形式，片剂、口服液、硬胶囊，尤其是适合制成软胶囊。本发明保健食品能分解体内的毒素，调整机体代谢，净化血液，促进血液循环，营养肌肤，消除炎症，祛斑、抗辐射，使肌肤重现生机，红润光洁，富有弹性。附图为本发明保健食品软胶囊制备工艺的简图。[具体实施方式]实施例1:以下通过实施例来进一步阐述本发明保健食品软胶囊的制备方法-a)称取各原料蜂胶1000份、葡萄籽提取物450份、当归提取物150份、橄榄油3400份，备用；b)将所述重量配比的蜂胶、葡萄籽提取物、当归提取物粉碎过120目筛混合均匀，制得混合物；c)将所述重量配比的橄榄油置不锈钢配料锅内加热至5(TC-加入b)所得混合物，经胶体磨2-3遍，抽掉气泡，冷却后就制备成了本发明保健食品。e)按生产需要的重量配比，称取药用明胶750重量份、药用甘油450重量份、纯净水300重量份，投入化胶罐内，水浴，加热，溶解，搅拌，抽真空后在胶液桶中保温备用；f)在恒温恒湿10万级洁净车间内，将步骤c)所得的保健食品与步骤e)所得的软胶囊壳料投入软胶囊压丸机，压制成本发明保健食品软胶囊；g)将iP骤f)制得的软胶囊定型干燥后用95%符合&8/139412-1994标准的食用乙醇，洗去表面油迹，用75%医用乙醇消毒，鼓风机28度吹风干燥，装瓶即完成本发明保健食品的制备。实施例2:2009年1月至4月，选择22-40岁，长期在通信机房、放射科、计算机前工作的女性90名，随机分为3组，每组30名，分别给予本发明保健食品软胶囊，排毒祛斑胶囊及安慰剂(淀粉胶囊)，每日两次，每次1粒,连服3个月。观察两项指标排毒、祛斑，两项均为客观指标，双盲判定，每项指标分为无变化，有效，显著三个等级，结果如下一、排毒(以大便次数为指标)将便秘者服后改善为1次/日排便者，定为显效，排便1次/日者服后变为2次/日者定为有效，无变化者为无效。结果显示，服本发明显效率为31%，有效率67V无效率2%;与口服排毒祛斑胶囊的显效率42%,有效率55础近。经统计学处理，无显著差异，乂2检验？〉0.04.与口服安慰剂显效率为0,有效率为2%,无效率为989i相比，经统计学处理，有显著差异，Xz检验P〈0.001.二、祛斑(以面部斑点的消失和变化为指标)将面部斑消失定为显效，明显变浅定为有效，无变化定为无效。服本发明保健食品显效率为19%，有效率为61%,无效率为20%。与口服排毒祛斑胶囊显效率12%,有效率为20%，无效率为68%相比，经统计学处理，有显效差异，P检验P〈0.01:与口服安慰剂的显效率O，有效率2%,无效率为98%相比，经统计学处理，有显著差异，X^检验P〈0.001。由此可见，使用本发明保健食品，安全高效，有明显的排毒(抗辐射)、祛斑美容作用，通过与安慰剂的对照，充分说明了本发明保健食品的优良功效。实施例3本发明保健食品软胶囊功效成分、含量及功效成分的检測方法一、功效成分及含量项目指标总黄稱(以戸丁计)(mg/g)5=38.5原花青素(g/100g)》8.1二、功效成分的检测方法(一)、总黄兩的测定1试剂1.1聚酰胺粉1.2芦丁标准溶液称取5.0mg芦丁，加甲醇溶解并定容至lOOmL,即得50ug/ml<■1.3乙醇分析纯1.4甲醉分析纯2分析步骤2.1试样处理称取一定量的试样，加乙酵定容到25raL，摇匀后，超声提取20ndrr，放置，吸取上清液1.0mL,于蒸发皿中，加lg聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄兩，定容至25mL。此液于波长360nm溯定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程，计算试样中总黄酮含量。2.2戶丁标准曲线吸取芦丁标准溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于lOmL比色管中，加甲醇至刻度，摇匀，于波长360nro比色，求回归方程，计算试样中总黄S含量。3计算和结果表示AXV2X100X=-ViXMXIOOO式中X——试样中总黄酮的含量，rag/100g:A——由标准曲线算得被测液中黄兩量，ug:M-试样质量，g;Vl——测定用试样体积，mL;V2——试样定容总体积，fflL。计算结果保留两位有效数字。(二)、原花青素的测定1、试剂及仪器1.1甲醇正丁酵盐酸分析纯1.2硫酸铁铵NH4Fe(SO4)r12H20溶液用浓度为2mol/L盐酸配成2%(w/v)的溶液。1.3原花青素标准品葡萄籽提取物，纯度95%。1.4分光光度计1.5回流装置2、分析步骤2.1挤出20粒胶囊内容物，搅拌均匀。2.2称取50mg试样置于小烧杯中，用20ml甲醇分数次搅拌，将原花青素洗入50ml容量瓶中，直至甲醇提取液无色，加甲醇至刻度，摇匀。3、测定3.1标准曲线称取原花青素标准品10.0mg溶于10ml甲醇中，吸取该溶液0、0.1、0.25、0.5、1.0、1.5ml置于10ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。各取1ml测定。3.2试样测定将正丁醇与盐酸按95:5的体积比混合后，取出6ml置于具塞锥瓶中，再加入0.2ml硫酸铁铵溶液和1ml试样溶液，混匀，置沸水浴回流.精确加热40min后，立即置冰水中冷却，在加热完毕15min后，于546ran波长处测吸光度，由标准曲线计算试样中原花青素的含量。显色在1小时内稳定。4、计算MlXVX1000X(%)=-X100MX1000X1000式中X:为样品中原花青素的百分含量，g/100gMh反应混合物中原花青素的量，ugV:待测样液的总体积，mlM:试样的质量，mg计算结果保留三位有效数字。检測方法的依据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)6实施例4毒理学安全性评价试验报告(按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)要求)1、材料和方法1,1样品由北京一品堂医药科技有限公司提供本发明保健食品软胶囊样品，外观棕褐色胶囊，试验时将胶囊油状内容物用玉米油配制成所需浓度的混悬液，推荐量为2.Og/人/天。1.2实验动物选用河北医科大学实验动物学部提供的清洁级昆明种小鼠及SD大鼠(实验动物许可证号SCXK(冀)2003-卜003)。1.3小鼠急性毒性试验选用清洁级昆明种小鼠20只，体重18-22克，雌雄各半，按MTD法进行试验。剂量为20000mg/kg.bw,采用等体积灌胃法(0.2ml/10g.bw)24小时内一次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。1.4大鼠急性毒性试验选用清洁级SD大鼠20只，体重180-220克，雌雄各半，按MTD法进行试验。最高剂量为20000mg/kg.bw,采用等体积灌胃法(2ml/100g.bw)24小时内一次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。1.5遗传毒性试验1.5.1Ames试验:本试验采用平板掺入法，分加与不加S9混合液两种。剂量分别为0.005、0.025、0.250、1.000、5.OOOmg/皿，另设空白对照、溶剂对照(DMSO)和阳性对照组。阳性对照组使用2-AF20ug/皿、2,4,7-TNFonelug/皿、NaN么5ug/皿、丝裂霉素C4.0ug/皿、1,8二羟基蒽醌50ug/皿，每个剂量组做三个平孤，重复做两次。菌种为TA97(a)、TA98、TA100和TA102四株菌，由天津市卫生防病中心提供，S9购自中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，试剂从北京化学试剂公司购进。1.5.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核(MNPCE)试验选用清洁级昆明种小鼠50只，体重25-30克，随机分为五组，每组10只，雌雄各半；设三个剂量组2500、5000、10000mg/kg体重，同时设阴性对照组(玉米油)和阳性对照组(CP40mg/kg),各组均间隔24小时两次给样，第二次给样后6小时取胸骨骨髓制片，每只动物计数1000个嗜多染红细胞,计算其微核发生率。1.5.3小鼠精子畸形试验选用清洁级昆明种雄性小鼠25只，体重30-35克，随机分为五组，每组五只；设三个剂量组2500、5000、10000i呢/kg体重，同时设阴性对照组(玉米油)和阳性对照组(CP40mg/kg)。连续经口给样5天，从首次给样计第35天处死动物，取双侧附睾制片，每只动物计数1000个精子，计算畸形率。1.630天喂养试验:选用清洁级SD大鼠80只，体重60-80g,随机分成四组，每组20只。雌雄各半，单笼词养。受试物设三个试验剂量,分别为0.83g/kg体重、1.67g/kg体重、3.33g/kg体重(相当于推荐量的IOO倍)，设一个阴性对照组。连续给各组动物灌胃30天，阴性对照组灌胃玉米油。喂养期间各组动物均自由进食和饮水，每周称鼠体重并记录饲料消耗量一次，实验末期采尾血进行血液学和生化学检査。观察指标有生长发育、食物利用率、血液学检查(采用血球计数仪测定)、生化学检査(分离血清后采用相应试剂盒及Fl型全自动生化分析仪(德国Human公司)测定)，实验末期处死大鼠，解剖取肝、脾、肾、睾丸(卵巢)称重，计算脏器系数，然后对肝、肾、脾、胃、肠、睾丸、卵巢进行组织病理学检査(石蜡切片)。2结果2.1小鼠急性毒性试验见表l.本发明保健食品软胶囊20000mg/kg.bw的剂量条件下，两种性别的小鼠均未见明显的中毒症状及死亡。该产品对雌雄小鼠的MTD均大于20000rag/kg.bw。表l本发明保健食品软胶嚢对小鼠的急性毒性动物品种性别数量途径MTD(mg/kg.bw)昆明种小鼠雄10经口>20000雌10经口>200002.2大鼠急性毒性试验见表2,本发明保健食品软胶囊加OOOmg/kg.bw的剂量条件下'两种性别的大鼠均未见明显的中毒症状及死亡。该产品对雌雄大鼠的MTD均大于20000mg/kg.bw'表2本发明保健食品软胶囊对大鼠的急性毒性动物品种性别数量途径MTD(mg/kg.bw)SD大鼠雄10经口>20000雌10经口>20000根据急性毒性分级，本发明保健食品软胶囊属无毒物。2.3遗传毒性试验2.3.1Ames试验由表3可见，本发明保健食品软胶囊对TA97(a)、TA98、TAIOO、TA102四株试验菌株，在加与不加S-9的情况下，均未呈现致突变作用。表3本发明保健食品软胶蹇Ames试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>丝裂每素c4.0ng/皿1428.7:t23531，8而径基蒽艇50jig/皿，286.7dt291.42.3.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果本发明保健食品软胶囊的三个剂量组的微核发生率均在正常范围内，经统计学处理与阴性对照组比较无显著性差异，与阳性对照组比较差异显著。该产品小鼠微核试验阴性。结果见表4,表4本发明保健食品软胶囊小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>2.3.3小鼠精子畸形试验由表5可见，本发明保健食品软胶囊三个剂量组的精子畸形率均在正常范围内，经统计学处理与阴性对照组比较无显著差异，与阳性对照组比较差异显著。该产品小鼠精子崎形试验阴性。表5本发明保健食品软胶囊小鼠精子崎形试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>2.4—般状况经过30天喂养，大鼠全部存活，各组动物发育良好，未见异常体征。2.4.1本发明保健食品软胶囊对大鼠体重的影响结果见表6。表6本发明保健食品软胶囊对大鼠体重的影响性别剂量(g/kg.^)动物数(只)始重(g)第l周(g)第2周(g)第3周(g)第4周(g)雄对照组1077.0±6.2"2.3±6.0196.4±9.3217.2±16,4266.3±13.20.831077.1±5.4139.7±7.1194.3士16.4224.0±15.1267.5±14.61.671077.0±6.5141.4±12.4193.1±16.7219.1±20.4260.6±24.03.331076,9±6.8140.5±13.0197.2±13.7221.9±18.5260.6±24.5雌对照组1074，8±9.4132.3±12.8164.6土14.1180.8±14.6192.0土17.70.831074.9±6.6l幼.1±7.0163.8±12.4184.8±7,2198.0士6.81,671074.8土8.9137.1士1L3171.9±15.4184.2±12.7197.2±8.93.331074.8±8.9134.8±12.6163.6±11.7177.9±8.71恥.7土9.82.4.2对大鼠食物利用率的影响各组大鼠的食物利用率与其对照组比较均无显著性差异。结果见表7、8。_表7本发明保健食品软胶jt对大鼠食物利用率的影响_性别剂量(gZkg.bw)动物数(只)体重增重(g)进食量(g)食物利用率(％)P值雄对照组10189.3±13.7574.4±26.932.9±1.60.8310190.4±10.9579.9±53.733.0±2.20.9751.6710183.6±19,4569.3±55.332.2±0.90.239__10183.7±24.5563.8±46.332.6±4.10.832"ii对照组117.2±16.9555.0±53.221.1±2.50.8310123.1±4.7552.7±49.322.4±2.20.2341.6710122.4±12.1562.6±42.921.8±2.30.5393.3310115.9±6.0543.0±36.221.4±1.10.77810表8本发明保健食品软胶囊对大鼠每周食物利用率的影响(%)性别剂量(fl/kg,bw)动物数(只)第一周第二周第三周对照组0.831.673.3310101010_第四周46.4±5.836.4±2.632.1±1.622.5±4.645.2±5,836.1±5.430.7±4.123.0±3.646.5±2,735.1±5.528.2±5.021.9±5.846.1±7.038.7±4.728.1±6.221.0±5.3尸0.950.380.850.63雌对照组1034,2±3.2.23.4±2.90.831032.9±2.526.1±6.61.671032.9±3.323.9±5.13.331033.6±3.122.1±2.713.6±3.111.2±5.015.8±6.111.8±3.912.4±5.510.3±2.013.7±5.710.1±3.2户0.730.300.540.712.4.3血液学检査实验结束时，各组动物红细胞、血红蛋白、白细胞及分类均在本实验室历史对照范围内波动。_表9本发明保健食品软胶囊30天喂养血液学检査结果性别剂量动物数红细胞血红蛋白白细胞(g/kg-bw)(只)(X，Q'Vu)(X10'/U淋巴百分数单核百分数中性百分数(%)(*)(W雄对照组106.85±0.36152.6±8.722.8±3.761.8±5.52.44±0.5735.7±5.30.83107.07±().52159.1±13.620.3±4.577.8±7.32.01±0.3320.1±7.11.67106,84±0.43152.9±8.421.4±2.870.3±8.02.45±0.5627.3±7.63.33106.73±0,87143.7±6.819.6±3.058.7±6.42.22±0.3439.1±6.2雌对照组106.77±0.45149.9±10.820.6±4.90.83106.67±0.53143.4±11.715.6±2.41.67106.65±0.35144.6±9.319.8±4.13.33106,77±0.33147.1±7.519.7±3,371.0±9.02.84±0.5926.1±8.679.1±8.12.20±0.5018.8±7.965.5±10.02.98±0.5731.5士10.159.8±8,912,91±0，4437.3±9.22.4.4末期生化检验结果实验结束时，各组动物谷丙转贫酶(速率法)、谷草转氛酶(速率法)、血糖(己糖激酶法)、尿素贫(紫外法)、总胆固醇(酶法)、甘油三酯(酶法)、肌酐(苦味酸两点法)、总蛋白(双縮脲法)、白蛋白(溴甲酚氣法)等指标均在本实验室历史对照范围内波动(结果见表IO)。性别剂虽动物数白蛋白胆固醇甘油三脂谷丙转氨瞎肌酐尿素氣血糖总蛋白谷草转氨瞎(只)(G/L)(mmol/L)(咖ol/U(U/L)(咖1/L)(mmol/U(咖ol/U(G/L)(U/L)雄对照组10380±"2.24±0.10O.M土O.IO49.4±5.754.5±2.473.43±0.695.50±0.2764.0±1.6307.4±36.90,831036.3±2.02.37±0.180.87±0.，951.，±3.856.0±3.23.11±0.445.71±0.2362.4±3.0288.8±35.11.671035—4±0.82—21±0100.76±0诉4S.0±3.253.0±2.92.抑±0285.40±0.326'.3土1.8293.9±54.93.331035.8±1.32.20±0.,0079±0.0647.0±5.353.2±2.03.23±0.62S」4±0.266，0±162汰4±38.0雌对照组1037.9±2.12.66±0210.97±0.""-8士7.257,2±"3.20±0-255.870±0.2964—3±2.2244—2±67.10.抑1038.9±1.92.65±0_20，01±01747,3±5.759.4±4-03.27±0.306.07±0.5465.7±1—8277.4±50.11.671038.0±'.62"±0.3，Q邻士Q19".9±6.4沐7±""5±0.2565.6±2.43.3310M.7土，.22.75±0_210.86±0.03"2±4.76"±"3.39±0.656.16±0.39648+M266.5+28-82.4.5本发明保健食品软胶囊对大鼠脏器系数的影响各组脏器系数均无显著性差异(见表11、12)_表ll本发明保健食品软胶囊各组动物脏器重量及脏体比值结果_<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>2.5本发明保健食品软胶囊30天喂养试验病理报告2.5.1大体检査试验结束时，处死动物共80只，剖检后进行肉眼观察，心、肝、脾、肺、肾、胃肠、睾丸、卵巢均未见异常。2.5.2对肝、肾、胃肠固定进行组织病理学检査，共检査高剂量试验组和对照组大鼠共40只，雌雄各半。肝脏40只大鼠的肝小叶结构正常，肝结构清晰辨识，肝小叶排列整齐，肝细胞以中央静脉为轴心呈大致辐射状走向，部分标本偶见肝细胞点状坏死(对照雄1只，高剂量组雄2只)。试验组和对照组间无明显差异，考虑由动物质量所致。肾脏40只大鼠的肾小球、肾小管结构正常，未见肾小球萎缩等病变，肾单位呈均匀分布40例标本中均可见少量肾小管上皮细胞核浓縮、胞浆呈嗜酸性改变，未见肾间质炎性细胞浸润和纤维组织增生。上述肾小管改变试验组和对照组间无明显差异，考虑为动物质量所致。胃肠40只大鼠的胃壁、肠壁结构清晰，无出血及炎细胞浸润，粘膜上皮细胞无变性、坏死、缺损等病理改变。试验组和对照组间无明显差异。脾脏40只大鼠的脾组织结构易于辨认，白髄呈团块状分布，包含着脾小体及小动脉，动物周,淋巴细胞呈弥散性分布，两组间无明显差异.睾丸20只大鼠睾丸正常各组成部分易于识别,小管膜淸晰，由外向内可见由精原细胞分裂增值形成的各阶段细胞和精子。未见出血、坏死及精细胞发育异常,两组间无明显差异。卵巢20只大鼠卵巢结构组成易于识别,被膜下方皮质内可见不同发育阶段的卵泡。未见卵泡的发育异常及组织内出血、炎症等病理变化。以上结果表明，对照组和高剂量组雌、雄大鼠的肝、肾、脾、胃肠、睾丸、卵巢均未见与受试物有关的组织病理学改变。3小结本试验结果表明，本发明保健食品软胶瘻对两种性别的大、小鼠的MTD均大于20000rag/kg.bw，说明该产品属无毒物；三项致突变试验结果阴性大鼠30天喂养试验各项指标均无明显异常。实施例5毒理学安全性评价试验报告(按《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)要求)1、材料和方法1.1样品由北京一品堂医药科技有限公司提供本发明保健食品软胶囊样品，外观棕褐色胶囊，试验时将胶囊油状内容物用玉米油配制成所需浓度的混悬液，推荐量为2.0g/人/天。1.2实验动物选用河北医科大学实验动物学部提供的清洁级昆明种小鼠及SD大鼠(实验动物许可证号SCXK(冀)2003-1-003)。1.3小鼠急性毒性试验选用清洁级昆明种小鼠20只，体重18-22克，雌雄各半，按MTD法进行试验。剂量为20000rag/kg.bw,采用等体积灌胃法(0.2ml/10g.bw)24小时内一次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。1.4大鼠急性毒性试验选用清洁级SD大鼠20只，体重180-220克，雌雄各半，按MTD法进行试验。最高剂量为20000mg/kg.bw,采用等体积灌胃法(2ml/100g.bw)24小时内一次灌胃，连续观察两周。记录中毒表现及死亡情况。1.5遗传毒性试验1.5.1Ames试验:本试验采用平板掺入法，分加与不加S9混合液两种。剂量分别为0.005、0.025、0.250、1.000、5.000mg/皿，另设空白对照、溶剂对照(DMSO)和阳性对照组。阳性对照组使用2-AF20ug/皿、2，4,7"TNFonelug/皿、NaN32.5ug/皿、丝裂募素C4.Oug/皿、1,8二羟基蒽醌50ug/皿，每个剂量组做三个平皿，重复做两次。菌种为TA97(a)、TA98、TA100和TA102四株菌，由天津市卫生防病中心提供，购自中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所，试剂从北京化学试剂公司购进。1.5.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核(MNPCE)试验选用清洁级昆明种小鼠50只，体重25-30克，随机分为五组，每组10只，雌雄各半设三个剂量组2500、5000、10000mg/kg体重，同时设阴性对照组(玉米油)和阳性对照组(CP40mg/kg)，各组均间隔24小时两次给样，第二次给样后6小时取胸骨骨髓制片，每只动物计数1000个嗜多染红细胞，计算其微核发生率。1.5.3小鼠精子崎形试验选用清洁级昆明种雄性小鼠25只，体重30-35克，随机分为五组，每组五只；设三个剂量组2500、5000、10000mg/kg体重，同时设阴性对照组(玉米油)和阳性对照组(CP40mg/kg),连续经口给样5天，从首次给样计第35天处死动物，取双侧附睾制片，每只动物计数1000个精子，计算畸形率。1.630天喂养试验:选用清洁级SD大鼠80只，体重60~80g,随机分成四组，每组20只。雌雄各半,单笼饲养。受试物设三个试验剂量,分别为0.83g/kg体重、1.67g/kg体重、3.33g/kg体重(相当于推荐量的IOO倍)，设一个阴性对照组。连续给各组动物灌胃30天，阴性对照组灌胃玉米油。喂养期间各组动物均自由进食和饮水，每周称鼠体重并记录饲料消耗量一次，实验末期采尾血进行血液学和生化学检査。观察指标有生长发育、食物利用率、血液学检査(采用血球计数仪测定)、生化学检查(分离血清后采用相应试剂盒及F1型全自动生化分析仪(德国Human公司)测定)，实验末期处死大鼠，解剖取肝、脾、肾、睾丸(卵巢)称重，计算脏器系数，然后对肝、肾、脾、胃、肠、睾丸、卵巢进行组织病理学检査(石蜡切片)。2结果2.1小鼠急性毒性试验见表l,本发明保健食品软胶囊20000mg/kg.bw的剂量条件下，两种性别的小鼠均未见明显的中毒症状及死亡。该产品对雌雄小鼠的MTD均大于20000mg/kg.bw。表l本发明保健食品软胶囊对小鼠的急性毒性动物品种性别数量途径MTEKmg/kg.bw)昆明种小鼠雄10经口>20000雌10经口>200002.2大鼠急性毒性试验见表2,本发明保健食品软胶囊20000mg/kg.bw的剂量条件下，两种性别的大鼠均未见明显的中毒症状及死亡。该产品对雌雄大鼠的MTD均大于20000mg/kg.bw。表2本发明保健食品软胶囊对大鼠的急性毒性动物品种性别綠途径MTD(mg/kg.bw)SD大鼠雄10经口>20000雌10经口>20000根据急性毒性分级，本发明保健食品软胶囊属无毒物。2.3遗传毒性试验2.3.1Ames试验由表3可见，本发明保健食品软胶囊对TA97(a)、TA98、TAIOO、TA102四株试验菌株，在加与不加S-9的情况下，均未呈现致突变作用。表3本发明保健食品软胶奥Araes试验结果剂量TA97(a)TA98TA100TAI02(mg/皿)-S9+S9S9+S9-S9+S9S9+S9第一次0159,3±10.1，67.0±12534.0120182'3±163，91.7±30.2258.0±1&4o.oos，43.0±5_6155.3土7j6"加j6153.7±11.5250.7±IX5268.7=422.20.025129.0±IMmollis37.3±13129.7通7"9.7速1238.3i4.72630±1&10.250128.0^135.0±123",Oi3j6M2.7土lt4159.7土18j627，,3i235l細149.0ift833.7:tZ5"13柳160.7±129256.隨_5286.3近75.000137.3±142145.3士KU266.0tl93284.诚0溶剂对照"5.7:M40l外.3士11.43S.7i2536.3^1162.7±1&3157.7i3Q6268.歸.l2卯.7士1幼第二次0160加4j034.0±1j035.3±L2133.0±IU162.0^&0246脱10.005133.3:fclQ6l".0iT53"士U140.7±&5145.7柳240.3±72271.7i2220.025142.3士11j636.7±1_539.(ti26142.3±U51外.0±1&4263.0±13.1289.0±16l50.250，36.0±53149.7±1，037.3±12142.3i55，SO師.l251.3=4272289.0±176l細125.3速1147.7±12134.7±1236.7±15B9.7必"9.7±1762M.3土1妙2970±"-45働"3.3*7636.3础150'7幼258.3±146溶剂对照"8.(B&7152.0±121350dt2fi38.7±3,1155.0^60165.7±19.7259,7±1幼295.7幼72-AF20jig/皿1743.3*3121NaN32-5ng/皿，263.3d2加2，4，7-TNFonea5tig/肌>3000>3000丝裂霉素c4.0jig/皿1428.7边531，8而羟基葸醒5(Vg/皿____.______1286.7幼1.42.3.2小鼠骨髄嗜多染红细胞微核试验结果本发明保健食品软胶囊的三个剂量组的微核发生率均在正常范围内，经统计学处理与阴性对照组比较无显著性差异，与阳性对照组比较差异显著。该产品小鼠微核试验阴性。结果见表4。表4本发明保健食品软胶囊小鼠骨髄嗜多染红细胞微核试验结果性别剂量动物数检査PCE细胞数微核数MNPCE微核发生率(mg/kg-bw)(只)(个)(X土s)/只(%。)055x画102.0±1.22.0250055X画81.6±0.51.6雄500055x100071.4±0.91.41000055x画81.6士L11.6CP.4055x蘭15330.6±2.430.6055x1000112.2±0.42.2250055X画91.8±0.41.8雌500055x蘭102.0±0.72.01000055X100091.8±0.41.8CP.4055x膽16132.2±2,332.22.3.3小鼠精子畸形试验由表5可见，本发明保健食品软胶囊三个剂量组的精子崎形率均在正常范围内，经统计学处理与阴性对照组比较无显著差异，与阳性对照组比较差异显著。该产品小鼠精子畸形试验阴性。表5本发明保健食品软胶囊小鼠精子崎形试验结果剂量(mgZkg.bw)动物数(只)检査精子数精子崎形数精子畸形数(Xisy只精子畸形率(％。)055X100011823.6±1.823.6250055X100011422.8±3.122.8500055X1,9919.8±1.319.81000055X100010721.4±1.121.4CP.4055X1000553110.6±13.8110.62.4—般状况经过30天喂养，大鼠全部存活，各组动物发育良好.未见异常体征。2.4.1本发明保健食品软胶囊对大鼠体重的影响结果见表6。表6本发明保健食品软胶囊对大鼠体重的影响性别剂量(g/kg.br)动物数(只)始重(g)第l周(g)第2周(g)第3周(g)第4周(g)雄对照组1077.0士6.2U2,3士6.0196,4±9.3217.2±16.4266.3±13.20.831077.1±5.4139.7士7.1194.3±16.4224,0士15.1267.5士14.61.671077.0±6.5141.4±12.4193.1±16.7219,1±'20.4260.6±24.03.331076,9±6.8i40.5±13.0197.2±13.7221.9±18.5260.6±24.5雌对照组1074.8±9.4132.3±12.8164.6±14.1180.8±14.6192.0±17，70.831074.9±6.6128.1±7.0163.8±12.4184.8±7.2198.0±6.81.671074,8±8.9137.1±1L3m,9士15.4184.2±12.7197.2±8，93.331074.8±8.9134.8±12.6163.6±U.7177.9±8.7190.7士9.82.4.2对大鼠食物利用率的影响各组大鼠的食物利用率与其对照组比较均无显著性差异。结果见表7。表7本发明保健食品软胶囊对大鼠食物利用率的影响性别剂量(gZkg.bw)动物数(只)体重增重(g)进食量(g)食物利用率(％)P值雄对照组10189.3±13.7574,4±26.932.9±1.60.8310190.4士10.9579.9±53.733.0±2.20.9751.6710183.6±19.4569.3±55.332,2±0.90,2393.3310183.7±24.5563.8±46.332.6±4.10.832雌对照组10117.2±16.9555.0±53.221.1±2.50.8310123.1±4.7552.7±49.322.4±2.20.2341.6710122.4±12.1562.6±42.921.8±2.30.5393.3310115.9±6.0543.0±36.221.4±1.10.7782.4.3血液学检査实验结束时，各组动物红细胞、血红蛋白、白细胞及分类均在本实验室历史对照范围内波动。_表8本发明保健食品软胶囊30天喂养血液学检査结果_<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>2.4.4末期生化检验结果实验结束时，各组动物谷丙转氨酶(速率法)、谷草转氨酶(速率法)、血糖(己糖激酶法)、尿素氮(紫外法)、总胆固酵(酶法)、甘油三酯(酶法)、肌酐(苦味酸两点法)、总蛋白(双縮脲法)、白蛋白(溴甲酚氯法)等指标均在本实验室历史对照范围内波动(结果见表9)。表9本发明保健食品软胶囊末期生化检査结果<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>2.4.5本发明保健食品软胶囊对大鼠脏器系数的影响各组脏器系数均无显著性差异(见表10)表10本发明保健食品软胶囊各组动物脏体比值结果(%)<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>2.5本发明保健食品软胶囊30天喂养试验病理报告-2.5.1大体检查试验结束时，处死动物共80只，剖检后进行肉眼观察，心、肝、脾、肺、肾、胃肠、睾丸、卵巢均未见异常。2.5.2对肝、肾、胃肠固定进行组织病理学检査，共检査高剂量试验组和对照组大鼠共40只，雌雄各半。肝脏40只大鼠的肝小叶结构正常，肝结构清晰辨识，肝小叶排列整齐，肝细胞以中央静脉为轴心呈大致辐射状走向，部分标本偶见肝细胞点状坏死(对照雄1只，高剂量组雄2只)。试验组和对照组间无明显差异，考虑由动物质量所致。肾脏40只大鼠的肾小球、肾小管结构正常，未见肾小球萎縮等病变，肾单位呈均匀分布；40例标本中均可见少量肾小管上皮细胞核浓縮、胞浆呈嗜酸性改变，未见肾间质炎性细胞浸润和纤维组织增生。上述肾小管改变试验组和对照组间无明显差异，考虑为动物质量所致。胃肠40只大鼠的胃壁、肠壁结构清晰，无出血及炎细胞浸润，粘膜上皮细胞无变性、坏死、缺损等病理改变。试验组和对照组间无明显差异。脾脏40只大鼠的脾组织结构易于辨认，白髓呈团块状分布，包含着脾小体及小动脉，动物周围淋巴细胞呈弥散性分布，两组间无明显差异。睾丸20只大鼠睾丸正常各组成部分易于识别,小管膜清晰，由外向内可见由精原细胞分裂增值形成的各阶段细胞和精子。未见出血、坏死及精细胞发育异常,两组间无明显差异。卵巢20只大鼠卵巢结构组成易于识别,被膜下方皮质内可见不同发育阶段的卵泡。未见卵泡的发育异常及组织内出血、炎症等病理变化。以上结果表明，对照组和高剂量组雌、雄大鼠的肝、肾、脾、胃肠、睾丸、卵巢均未见与受试物有关的组织病理学改变，3小结本试验结果表明，本发明保健食品软胶囊对两种性别的大、小鼠的MTD均大于20000mg/kg.bw,说明该产品属无毒物；三项致突变试验结果阴性大鼠30天喂养试验各项指标均无明显异常。19权利要求1、一种具有祛斑、抗辐射功能的保健食品，其特征在于它是由下列重量份的原料制成蜂胶750-1100份、葡萄籽提取物400-490份、当归提取物100-160份、橄榄油3100-3800份。2、根据权利要求1的保健食品，其中各原料的用量为蜂胶1000重量份、葡萄籽提取物450重量份、当归提取物150重量份、橄榄油3400重量份。3、根据权利要求1或2所述的保健食品可以被制备成任何一种方便服用的形式片剂、口服液、硬胶囊，尤其适合制成软胶囊。4、根据权利1或2或3所述保健食品的制备方法，它包括下列步骤a)称取各原料蜂胶1000重量份、葡萄籽提取物450重量份、当归提取物150重量份，备用；b)将所述重量配比的蜂胶、葡萄籽提取物、当归提取物粉碎过120目筛，混合均匀制得组合物；c)按所述重量比称取橄榄油至不锈钢配料锅内加热至50TC-70'C，加入步骤b)所得组合物混合均勾，经胶体磨2-3遍，抽掉气泡，冷却后就制备成了本发明保健食品。5、根据权利要求4所述保健食品的制备方法，其中将步骤c)制得的保健食品灌装软胶囊壳料，压丸成软胶囊。全文摘要本发明公开了一种具有祛斑、抗辐射功能的保健食品，其主要是由蜂胶、葡萄籽提取物、当归提取物、橄榄油按一定重量配比制备而成。它可以被制备成任何一种方便服用的形式片剂、口服液、硬胶囊，因重金属含量低，防过敏尤其适合制成软胶囊。本发明保健食品能够增强免疫力、调节内分泌，对祛斑、抗辐射具有辅助保健功能。文档编号A23L1/30GK101637268SQ200910147620公开日2010年2月3日申请日期2009年6月10日优先权日2009年6月10日发明者贾银良申请人:北京一品堂医药科技有限公司