专利名称：转基因玉米快速筛选试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明是实现对食品中M0N810、BtlU NK603,59122和1507五种转基因玉米快速筛选的试剂盒。
背景技术：
目前食品中的转基因成分检测技术比较成熟，但是由于转基因作物种类繁多，因此必须建立一种快速的筛选方法。在大力推进转基因生物研发的同时，要同步发展其快速筛选技术，不断优化食品中转基因成分的检测方法。因此，建立一种食品中转基因成分的快速筛选试剂盒就很必要。
发明内容
本发明实现了食品中M0N810、BtlU NK603,59122和1507五种转基因玉米的快速筛选。(1)根据这五种转基因玉米中导入的公共元件和功能元件设计出相应的具有相同PCR反应条件的引物。第一步初筛，同时对启动子CaMV 35S,P-ract,Ubi Siil和终止子 NOS、pinll共五种公共元件(初筛基因)进行PCR检测，以初步确定食品中是否含有转基因元件；第二步定位，同时对cp^psps、pat、crylF、cryIAb, cry35Ab五种功能元件(定位基因)进行检测。(2)标准品将快速筛选方法中的5个初筛基因CaMV 35S、P_ract、Ubi ZmUNOS, pin II整合到一个质粒上形成“初筛质粒”，将5个定位基因Cp^pSpS、pat、CrylF、CrylAb、 cry35Ab整合到一个质粒上形成“定位质粒”，制成标准品，在检测过程中作为阳性对照，对试剂盒进行质量控制，也可作为定量检测的标准。质粒通过大肠杆菌转染和培养而实现增殖。(3)结果查询软件根据筛选结果，结果查询软件可以单一查询或者逻辑判断检测结果为哪种转基因作物，以及该种作物的受体生物、新性状、外源基因信息等基本信息。本发明与现阶段国内对转基因作物的检测手段相比，具有以下功能特点(1)能够同时对5种转基因玉米进行检测；(2)检测时间短，只需两个PCR步骤；(3)有配套的结果查询软件，缩短了对检测结果进行判断的时间；(4)有配套的标准品，可以对试剂盒进行有效的质量控制，并且可以作为荧光定量PCR检测的标准。
具体实施例方式利用试剂盒中的反应体系、引物，直接加入待测样品，通过两步 PCR程序进行检测。将所得结果输入结果查询软件，软件自动给出受试物中可能存在的转基因作物及其相关的受体生物、新性状、外源基因等信息。还可以进行荧光定量PCR，根据标准品浓度算出待测物中外源基因的含量。质粒转染大肠杆菌的保存方式取出菌液，按3 1加入甘油，搅勻，液氮速冻，然后放入-70度超低温冰箱，可保2年活力，需要使用时，冰上解冻，沾取菌液加到新培养基里活化培养。或直接放置于4°C冰箱保存两天。生物材料样品保藏信息保藏单位名称中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心；保藏单位地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮政编码:100101 ；保藏日期2010年10月20日；
保藏编号CGMCC4228 ；分类命名大肠埃希氏菌(Escherichia coli)。
权利要求
1.筛选中使用的引物为根据M0N810、Btll、NK603、59122和1507这五种转基因玉米中导入的公共元件 CaMV 35S、P-ract、Ubi ZmU NOS, ρ in II 和功能元件 cp4 印 sps、pat、crylF、 cryIAb, cry35Ab设计出的相应引物。
2.将权利要求1中的5个初筛基因和5个定位基因分别以一定的方式连接起来，连接到通用质粒中。将整合有两段新序列的两个质粒作为标准品，在权利要求1中的筛选过程中作为阳性对照，对试剂盒进行质量控制；还可将其作为浓度标准进行荧光定量PCR检测， 对外源基因的含量进行分析。
3.权利要求1的检测结果，可以利用结果查询软件进行单一查询或者逻辑判断，以确定检测结果为哪种转基因玉米，以及该转基因玉米的受体生物、新性状、外源基因等信息。
全文摘要
转基因玉米快速筛选试剂盒。根据MON810、Bt11、NK603、59122和1507五种转基因玉米中导入的CaMV 35S、P-ract、Ubi Zm1、NOS、pin II五种公共元件(初筛基因)和cp4epsps、pat、cry1F、cry1Ab、cry35Ab五种功能元件(定位基因)设计出相应的引物。通过两步定性PCR检测完成检测第一步初筛，同时对五种公共元件进行检测，以初步确定食品中是否含有这几种转基因玉米；第二步定位，同时针对五种功能元件进行检测。将快速筛选方法中的五个初筛基因和五个定位基因分别整合到两个质粒上，制成标准品，在检测过程中作为阳性对照，对试剂盒进行质量控制。根据检测结果，可以在结果查询软件中进行单一查询或者逻辑判断，筛选出可能含有的一种或几种转基因玉米，以及相关的受体生物、新性状、外源基因等信息。
文档编号C12Q1/68GK102191317SQ20111000268
公开日2011年9月21日 申请日期2011年1月7日 优先权日2011年1月7日
发明者严卫星, 刘玉梅, 张文众, 李宁, 贾旭东, 雍凌 申请人:中国疾病预防控制中心营养与食品安全所