专利名称：甘油-3-磷酸酰基转移酶同源物及其利用的制作方法
技术领域：
本发明涉及新型酰基转移酶基因及其利用。本发明的酰基转移酶基因也可以是甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)基因及/或甘油磷酸O-酰基转移酶(GNPAT)基因。
背景技术：
脂肪酸是构成磷脂、三酰甘油等脂质的重要成分。含有2个以上不饱和键的脂肪酸总称为多不饱和脂肪酸(PUFA)。作为具体例子，已知有花生四烯酸、二高-Y-亚麻酸、 二十碳五烯酸、二十二碳六烯酸等，已报道了各种生理活性(非专利文献I)。该多不饱 和脂肪酸中，有一些种类是动物不能在体内合成的。因此，对于此种多不饱和脂肪酸，作为必需脂肪酸必须从食物中摄取。
在动物体内，多不饱和脂肪酸存在于多种多样的脏器和组织中。例如，花生四烯酸是从提取自动物的肾上腺或肝脏的脂质中分离的。但是，在动物脏器中只含有少量的多不饱和脂肪酸，因此仅靠从动物脏器提取·分离的多不饱和脂肪酸，无法得到足够的供给量。为此，开发出了培养各种微生物来获得多不饱和脂肪酸的方法。其中，被孢霉属 (Mortierella)微生物是众所周知的有效地生产含有花生四烯酸等多不饱和脂肪酸的脂质的微生物。而且，还进行了利用植物来生产多不饱和脂肪酸的尝试。已知多不饱和脂肪酸构成三酰甘油等储存脂质，蓄积在微生物的菌体内或植物种子中。
作为储存脂质的三酰甘油在生物体内如下生成。通过甘油-3-磷酸酰基转移酶向甘油-3-磷酸转移酰基而生成溶血磷脂酸。而后，通过溶血磷脂酸酰基转移酶向溶血磷脂酸转移酰基而生成磷脂酸。而后，磷脂酸通过磷脂酸磷酸酶脱磷酸化而生成二酰甘油。最后，通过二酰甘油酰基转移酶向二酰甘油中转移酰基而生成三酰甘油。
上述三酰甘油生物合成途径、磷脂生物合成途径中，在通过甘油-3-磷酸的酰化来生成溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid)的反应中，已知有甘油_3_磷酸酰基转移酶 (以下也有时记为“GPAT”。EC 2. 3. I. 15)的参与。
至今为止已报道了一些生物中存在GPAT基因。作为来自哺乳动物的GPAT基因， 已被克隆的有内质网型(膜结合型)和线粒体型(膜结合型)这2种(非专利文献2)。此外，作为来自植物的GPAT基因，已被克隆的有内质网型(膜结合型)、线粒体型(膜结合型) 和叶绿体型(游离型)这3种(非专利文献3)。
作为来自作为真菌的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的GPAT基因，已被克隆的有内质网型(膜结合型)的GPT2/GAT1 (YKR067w)和SCT1/GAT2 (YB LOllw)这2种， 已知如果使它们同时缺失的话会致死(非专利文献4)。在此，表明相对于GPT2具有以从棕榈酸(16:0)至油酸(18:1)的大范围的脂肪酸为底物的活性，而SCTl则具有将棕榈酸 (16:0)、棕榈油酸(16:1)等碳原子数为16的脂肪酸作为底物的强选择性(非专利文献4)。
除上述以外，还从大量生物种克隆了 GPAT基因。特别是关于来自作为脂质生产菌的被孢霉属(Mortierella)微生物的GPAT，有如下报道。
关于来自拉曼被孢霉(Mortierella ramanniana)的GPAT,已分离出内质网型CN 102947447 A说明书2/41页GPAT，其显示出了以高于棕榈酸(16:0) 5. 4倍的高选择性将油酸(18:1)用作酰基供体(非专利文献5)。关于来自高山被孢霉(以下也有时记为“M.alpina”或“高山被孢霉”)的 GPAT，已报道微粒体组分具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性(非专利文献6)。
若使存在于M.alpina的微粒体中的GPAT(与膜结合的状态)和各种酰基CoA 在体外反应，则显示出了 GPAT在维持高活性的状态下，将油酸(18:1)、亚油酸(18:2)、二高-Y-亚麻酸(DGLA) (20:3)、花生四烯酸(20:4)等多不饱和脂肪酸作为底物广泛利用 (专利文献I)。
使从M. alpina (ATCC #16266)克隆得到的GPAT (以下，在本说明书中记为 MaGPATl (ATCC#16266))在以可生物合成二十碳五烯酸(EPA)的方式转化的解脂耶氏酵母 (Yarrowia Iipolytica)内表达后,发现总脂肪酸中二高-Y-亚麻酸(DGLA) (20:3)的组成增加，油酸(18:1)的组成减少。该结果表明长链且不饱和度高的多不饱和脂肪酸更能被选择性利用(专利文献2)。
近年，从M. alpina (IS-4株)分离出作为GPAT同源物的MaGPAT2，据报道其显示出与MaGPATl不同的底物特异性(专利文献3)。S卩，在酵母中表达时，相对于MaGPATl使酵母生产的脂质中的棕榈酸含有比率增加，MaGPAT2会使酵母生产的脂质中的油酸含有比率增加。
现有技术文献
专利文献
专利文献I :国际公开第W02004/087902号公报
专利文献2 :美国专利申请公开第2006/0094091号说明书
专利文献3 :国际公开第W02008/156026号公报
非专利文献
非专利文献I :Lipids，39，1147-1161,2004
非专利文献2 Biochimica et Biophysica Acta, 1348,17-26,1997
非专利文献3 :Biochimica et Biophysica Acta, 1348，10-16，1997
非专利文献4 :The Journal of Biological Chemistry,276(45),41710-41 716.2001
非专利文献5:The Biochemical Journal, 355, 315-322, 2001
非专利文献6 :Biochemical Society Transactions, 28, 707-709, 2000发明内容
至今为止已报道的GPAT基因即使导入宿主细胞进行了表达，由于其底物特异性， 宿主产生的脂质组合物也会受到限制。期望通过将其导入宿主细胞或使其表达，而鉴定出可产生具有所需组成的脂肪酸组合物的新型基因。
本发明的目的在于提供如下蛋白质及核酸，通过使其在宿主细胞中表达或将其导入宿主细胞，而可制造具有目标脂肪酸组成的油脂、或可使目标脂肪酸含量增加或可使作为储存脂质的三酰甘油(TG)量增加。
本发明者为解决上述课题进行了深入研究。首先，分析脂质生产菌高山被孢霉 (Mortierella alpina)的基因组，从中提取与已知的甘油_3_磷酸酰基转移酶(GPAT)基因11同一性高的序列。进而为获得编码GPAT的开放阅读框(ORF)全长，进行cDNA文库的筛选或通过PCR来克隆全长cDNA。发明者进行了将其导入酵母等具有高增殖能力的宿主细胞中以产生脂肪酸组合物的尝试，成功地克隆了可生成与以往GPAT表达的宿主所产生的脂肪酸组合物相比不同的脂肪酸组合物的底物特异性不同的新型GPAT所涉及的基因，从而完成了本发明。即本发明如下。
(I) 一种核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸
(a)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为 70%以上的碱基序列所组成，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的喊基序列；
(d)核酸，其包含编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列所组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列；
(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列。
(2)根据⑴中所述的核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸
(a)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2XSSC、50°C的条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为 90%以上的碱基序列所组成，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的喊基序列；
(d)核酸，其包含编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为90%以上的氨基酸序列所组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2 X SSC、50°C的条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；
(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2 X SSC,500C的条件下杂交，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/ 或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列；
(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为90%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列。
(3) 一种核酸，其特征在于，为以下(a) (d)中任一项所述的核酸
(a)核酸，其包含序列号I、序列号4或序列号8表示的碱基序列或其部分序列；
(b)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列或其部分序列；
(c)核酸，其包含序列号3、序列号6或序列号11表示的碱基序列或其部分序列；
(d)核酸，其包含序列号7或序列号12表示的碱基序列或其部分序列。
(4) 一种核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸
(a)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列所组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的喊基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的甘油_3_磷酸酰基转移酶缺陷(以下也有时记为“GPAT缺陷”)互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列所组成，且编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(d)核酸，其包含编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列所组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有以下 i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(5)根据(4)中所述的核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸
(a)核酸，其包含具有编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中 I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2XSSC、50°C的条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为 90%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(d)核酸，其包含具有编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为90%以上的氨基酸序列所组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2 X SSC、50°C的条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2XSSC、50°C的条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为90%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(6) 一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质
(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性；
(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性。
(7) 一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质
(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性；
(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为90%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性。
(8) 一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质
(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有以下i) V)中任一种活性
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有以下i) V)中任一种活性
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(9) 一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质
(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有以下i) V)中任一种活性
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为90%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有以下i) V)中任一种活性
i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；
ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；
iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油(TG)量相比，表达所述蛋白质的酵母的TG量实现高TG量的活性；
iv)与酵母(酿酒酵母S. cerevisiae)的GPAT缺陷互补的活性；
v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
(10) 一种蛋白质，其特征在于，由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成。
(11) 一种重组载体，其特征在于，含有(I) (5)中任一项所述的核酸。
(12) 一种转化体，其特征在于，由(11)中所述的重组载体转化。
(13) 一种脂肪酸组合物，其特征在于，包含培养(12)中所述的转化体而得到的脂肪酸或脂质。
(14) 一种脂肪酸组合物的制造方法，其特征在于，从培养(12)中所述的转化体而得到的培养物中提取脂肪酸或脂质。
(15) 一种食品，其特征在于，包含(13)中所述的脂肪酸组合物。
本发明的GPAT与以往的GPAT的底物特异性不同，可在宿主中产生与以往的GPAT 表达的宿主所产生的脂肪酸组合物组成不同的脂肪酸组合物。由此可提供具有所期望特性、效果的脂质，所以，作为可适用于食品、化妆品、医药品、肥皂等的酶而有用。
此外，因本发明的GPAT可达到提高脂肪酸、储存脂质的生产能力的目的，所以，作为提高微生物、植物中多不饱和脂肪酸的生产率的酶而优选。
图1-1为来自M. alpina 1S_4株的MaGPAT4的基因组序列(序列号7)和CDS序列(序列号3)的比较图。
图1-2为图1-1的延续。
图1-3为图1-2的延续。
图2-1表示来自M. alpina 1S_4株的MaGPAT4的CDS序列(序列号3)及由其推导出的推定氨基酸序列(序列号2)的图。双下划线部为作为与pfam的酰基转移酶 (accession No. PF01553)的基序具有高同源性的区域而匹配的区域。
图2-2为图2-1的延续。
图3-1为来自M. alpina 1S_4株的MaGPAT5的基因组序列(序列号12)和CDS序列(序列号10)的比较图。
图3-2为图3-1的延续。
图4-1为表示来自M. alpina 1S-4株的MaGPAT5的cDNA序列(序列号11)及由其推导出的推定氨基酸序列(序列号9)的图。
图4-2为图4-1的延续。
图5为来自M. alpina 1S-4株的MaGPAT4的推定氨基酸序列(序列号2)和来自子囊菌(球毛壳菌Chaetomium globosum CBS 148. 51)的推定蛋白质的氨基酸序列(序列号 21 ；GenBank accession No. XP 001224211)及来自 E. coli 的作为 GPAT 的 plsB 蛋白质的氨基酸序列(序列号22 ；GenBank accession No. BAE78043)的比较图。单下划线部为与 pfam的酰基转移酶(accession No. PF01553)的基序同源性高的区域。其中，双下划线部为 GPAT同源物且十分保守的区域，*表示对酰基转移酶活性重要的氨基酸残基，+表示与G3P 的结合时需要的氨基酸残基。
图6-1为来自M. alpina 1S-4株的MaGPAT5的推定氨基酸序列(序列号9)、和来自担子菌(玉蜀黍黑粉菌Ustilago maydis 521)的推定蛋白质UM03369的氨基酸序列(序列号 23 ;GenBank accession No. XP 759516)以及来自酿酒酵母(S. cerevisiae)白勺作为 GPAT的SCTl (YBLOllff)(序列号24)及GPT2 (YKR067W)(序列号25W)的氨基酸序列的比较图。双下划线部为GPAT同源物且十分保守的区域， *表示对酰基转移酶活性重要的氨基酸残基，+表不与G3P结合时所需要的氨基酸残基。
图6-2为图6-1的延续。
图7为表示对于用具有与半乳糖诱导型启动子连接的MaGPAT4_long或MaGPAT4 的质粒转化的酵母，通过在SG-Trp培养基中培养，而用半乳糖进行表达诱导时的脂质组分的脂肪酸组成的图。
图8为表示对于用具有与半乳糖诱导型的启动子连接的MaGPAT4_long或MaGPAT4 的质粒转化的酵母，在不含半乳糖的SC-Trp培养基中培养时的总脂肪酸的组成的图。
图9为表示使GPAT4在M. alpina中超表达时，单位干燥菌体中的花生四烯酸的生产量的经时变化图。
具体实施方式
本发明涉及来自被孢霉属(Mortierella)的新型酰基转移酶基因及其应用。本发明的酰基转移酶可以为以使甘油-3-磷酸酰基化而生成溶血磷脂酸及/或向甘油磷酸的羟基转移酰基为特征的酰基转移酶。
本发明的酰基转移酶为催化向甘油-3-磷酸及/或甘油磷酸转移酰基的反应的酶。本发明的酶的酰基受体通常为甘油-3-磷酸及/或甘油磷酸，但不限于此。
因此，本发明的酰基转移酶可具有作为甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)及/或甘油磷酸O-酰基转移酶(GNPAT)的活性。但是，对于本说明书中的本发明的酶，不管实际具有的活性如何，从方便上也有时记为“甘油-3-磷酸酰基转移酶”或“GPAT”。
编码本发明的甘油-3-磷酸酰基转移酶的核酸
本发明的甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)中，包含MaGPAT4、MaGPAT4_long、及 MaGPAT5。将编码 MaGPAT4、MaGPAT4_long 及 MaGPAT5 的 cDNA、CDS、ORF 及推定氨基酸序列的对应关系整理记载于以下表I中。20
表I
权利要求
1.一种核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸(a)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/ 或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为70% 以上的碱基序列所组成，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的喊基序列；(d)核酸，其包含编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列所组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的喊基序列；(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列；(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列。
2.根据权利要求I中所述的核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸(a)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/ 或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2 X SSC、50°C的条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/ 或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为90% 以上的碱基序列所组成，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的喊基序列；(d)核酸，其包含编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为90%以上的氨基酸序列所组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的喊基序列；(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2XSSC、50°C的条件下杂交，且编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的碱基序列；(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2 X SSC, 500C的条件下杂交，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列；(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为90%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性的蛋白质的外显子的碱基序列。
3.—种核酸，其特征在于，为以下(a) (d)中任一项所述的核酸(a)核酸，其包含序列号I、序列号4或序列号8表示的碱基序列或其部分序列；(b)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列或其部分序列；(c)核酸，其包含序列号3、序列号6或序列号11表示的碱基序列或其部分序列；(d)核酸，其包含序列号7或序列号12表示的碱基序列或其部分序列。
4.一种核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸(a)核酸，其包含编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列所组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的喊基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的甘油-3-磷酸酰基转移酶缺陷即“GPAT缺陷”互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为70% 以上的碱基序列所组成，且编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(d)核酸，其包含编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为70%以上的氨基酸序列所组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的喊基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在严谨条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为70%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
5.根据权利要求4中所述的核酸，其特征在于，为以下(a) (g)中任一项所述的核酸(a)核酸，其包含具有编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(b)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2XSSC、50°C的条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(c)核酸，其包含与由序列号I、序列号4或序列号8组成的碱基序列的同一性为90% 以上的碱基序列所组成，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(d)核酸，其包含具有编码与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为90%以上的氨基酸序列所组成，且具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(e)核酸，其包含与编码由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成的蛋白质的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2 X SSC、50°C的条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(f)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的互补碱基序列所组成的核酸在2XSSC、50°C的条件下杂交，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的喊基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(g)核酸，其包含与由序列号7或序列号12组成的碱基序列的同一性为90%以上的碱基序列所组成，且具有编码具有以下i) V)中任一种活性的蛋白质的外显子的碱基序列i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
6.一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为 70%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性。
7.一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性；(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为 90%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有甘油-3-磷酸酰基转移酶活性及/或甘油磷酸酰基转移酶活性。
8.一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I或多个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有以下i) V)中任一种活性i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为 70%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有以下i) V)中任一种活性i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
9.一种蛋白质，其特征在于，为以下(a)或(b)中任一项所述的蛋白质(a)蛋白质，其由序列号2、序列号5或序列号9中I 80个氨基酸发生缺失、取代或附加的氨基酸序列组成，且具有以下i) V)中任一种活性i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性； )与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。(b)蛋白质，其为与由序列号2、序列号5或序列号9组成的氨基酸序列的同一性为 90%以上的氨基酸序列所组成的蛋白质，且具有以下i) V)中任一种活性i)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸组成相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸组成可形成棕榈酸的比率高、棕榈油酸的比率低的脂肪酸组成的活性；ii)与未表达所述蛋白质的宿主的脂肪酸含有率相比，表达所述蛋白质的酵母的脂肪酸含有率实现高含有率的活性；iii)与未表达所述蛋白质的宿主的三酰甘油即TG量相比，表达所述蛋白质的酵母的 TG量实现高TG量的活性；iv)与酿酒酵母的GPAT缺陷互补的活性；v)可使通过含有编码所述蛋白质的核酸的重组载体转化的宿主中的花生四烯酸生产量比未用所述载体转化的宿主中的生产量提高了的活性。
10.一种蛋白质，其特征在于，由序列号2、序列号5或序列号9表示的氨基酸序列组成。
11.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求I 5中任一项所述的核酸。
12.—种转化体，其特征在于，由权利要求11中所述的重组载体转化。
13.一种脂肪酸组合物，其特征在于，包含培养权利要求12中所述的转化体而得到的脂肪酸或脂质。
14.一种脂肪酸组合物的制造方法，其特征在于，从培养权利要求12中所述的转化体而得到的培养物中提取脂肪酸或脂质。
15.一种食品，其特征在于，包含权利要求13中所述的脂肪酸组合物。
全文摘要
本发明提供甘油-3-磷酸酰基转移酶基因及其利用。本发明的上述课题通过提供具有本发明的序列号1、4或8、序列号3、6或11、或序列号7或12的碱基序列的核酸及其突变体来解决。本发明还提供具有序列号2、5或9的氨基酸序列的蛋白质及其突变体。
文档编号C12N1/15GK102947447SQ20118001813
公开日2013年2月27日 申请日期2011年2月3日 优先权日2010年2月3日
发明者落合美佐 申请人:三得利控股株式会社