专利名称：一种蝉拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及生物技术领域，具体涉及蝉拟青霉饲料添加剂及其制备与应用。
背景技术：
我国畜禽养殖生产中疫病较多，为了控制细菌感染，饲料添加剂中一般都加有大量抗菌药物；为了促进畜禽产品的生长育肥，饲养户在生产过程中经常添加激素类药物，违规滥用药物的现象极为普遍。畜禽产品中农药、兽药普遍严重超标，由此引发的一系列事件不胜枚举。另外兽药生产不规范现象也很严重，兽药制剂中不注明有效成分、随意扩大实用范围的现象极为普遍，容易导致错误用药、重复用药，增加药残量。当畜禽食入食物中某些有毒物质，就会抑制某些畜禽的生产性能，严重的还会导 致畜禽的发病或者是死亡。长期使用抗菌药易引起耐药性及二重感染，并加重动物体内的药物残留量，不利于疾病的治疗，同时还会影响某些疫苗的接种效果，使畜禽的生产性能下降，经济效益减少。由于我国的畜禽产品的兽药添加剂残留比较严重，已经给我国的养殖业发展带来巨大的经济损失。同时为适应国际、国内市场对绿色食品的需求，充分利用我国丰富的植物与微生物资源，开发“绿色”饲料添加剂产业，促进安全动物生产系统的构建十分重要…。近年来，抗生素的应用已引起巨大的争议。鉴于抗生素的负面效应以及人们对食品安全的日益关注，一些有效克服抗生素弊端，具有促生长作用的替代品被开发出来，并在猪、禽、反刍动物饲料中得到了一定的应用。在饲料中添加酸化剂、益生素、寡糖、酶制剂、中草药等可提高动物日增重、降低料肉比，减少猪禽腹泻及应激的发生、增强机体免疫力等。绿色饲料添加剂应具备以下特征①能提高饲料利用率，促进动物的生长；能增强机体免疫功能，预防动物疾病；能提高动物生产性能和产品质量。②长期使用不产生毒副作用，动物产品中无药物和有害物质残留，对人类健康无危害，动物的排泄物对环境不构成潜在污染危害。③理化性质和生物活性稳定，能有效地进入胃肠道发挥作用，不影响饲料适口性。④与其他饲料添加剂合用，不发生或很少发生配伍禁忌，细菌对其不易产生抗药性。研究和开发绿色饲料添加剂，是振兴我国饲料工业、发展绿色养殖的需要，也是突破“绿色壁垒”、占领国际市场的需要。蝉拟青霉是一种名贵的虫生真菌，具有很高的药用价值。科研人员发现从天然蝉花分离获得的真菌发酵得到的蝉拟青霉在有效成分、药理活性与临床作用等方面与冬虫夏草有很大的相似性。蝉拟青霉中除了含有虫草多糖之外，还有氨基酸、微量元素、虫草酸和麦角留醇、核苷类、维生素类等物质，具有广泛的药理活性，其活性涉及到了免疫系统、心脑血管系统、神经系统、呼吸系统、肝脏和肾脏功能等各方面。在国内外市场上，尚未见到利用蝉拟青霉做饲料添加剂的相关产品。
发明内容
为解决上述问题，本发明提供了一种蝉拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备方法和应用。首先,本发明公开了一种蝶拟青霉发酵物饲料添加剂,为蝶拟青霉(Paecilomycescicadae (Miquel) Samson)的发酵产物。进一步的，所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂中，多糖总含量为130-250mg/g、虫草酸含量为ll_20mg/g、腺苷含量为0. 14-0. 19mg/g,
所述蝉拟青霉的发酵产物为将蝉拟青霉菌株先斜面培养，再种子液培养，而后接种固体培养基发酵培养后采收获得。所述固体培养基包括下列重量份的原料
小麦20 45;
玉米粉5 30;
蔗糖I 5;
香蛹粉1~5;
KNO30.1 0.3;
KH2PO40.05-1；
MgSO40.05~0.08;
H2O25-70。进一步优选的,所述蝶拟青霉菌株为蝶拟青霉菌株Paecilomyces cicadae (Miq.)Samson CGMCC No. 3453。该菌株已于2009年11月18日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏。蝉拟青霉菌株CGMCC No. 3453为从云南三江源头采集纯净无污染野生蝉花标本后分离获得。该蝶拟青霉菌株属于半知菌亚门Deuteromycotina,丝孢纲Hyphomycetes,束梗抱目Stilbellales,束梗抱科Stilbellaceae,拟青霉属Paecilomyces。该蝶拟青霉菌株于2009年9月10日送交中国科学院生物研究所进行形态特征鉴定，鉴定结果为蝉拟青霉[Paecilomyces cicadae (Miq. ) Samson]。以该菌株为原料，制得的饲料添加剂成品经检测多糖含量高达130_250mg/g、虫草酸为ll-20mg/g、腺苷为0. 14-0. 19mg/g，尤其适用于作为促进生长的饲料添加剂。本发明还进一步公开了所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，包括下列步骤a.斜面菌种制备将蝉拟青霉菌株接种到斜面培养基上，20 25°C下，培养3 5天；所述斜面培养基为PSA培养基(马铃薯蔗糖琼脂培养基)或PDA培养基(马铃薯葡萄糖琼脂培养基)。b.摇瓶种子液的制备从斜面上刮取菌丝接种到PDB培养基或PSB培养基为基础的三角瓶液体培养基中，20 25°C下，140 160rpm，培养3 5天即可制得蝉拟青霉摇瓶种子液；c.发酵罐种子液的制备将摇瓶种子液按5% -10%体积比例接种到以PDB培养基或PSB发酵罐培养基中，20 25°C下，搅拌速率140 160rpm，通气25vvm，培养3 5天即得蝉拟青霉种子液；d.将步骤c中制得的发酵液按重量百分比为5% 10%接入灭菌后的前述固相培养基中，在温度为18 23°C，湿度为50 90%的条件下，静置封闭式培养10 15天。e.采收培养物。f.脱水干燥。采收后的鲜培养物采用冷冻干燥法或烘烤法(40 45°C )脱水干燥。g.粉碎。将冷冻干燥、烘干的培养物，粉碎，过筛后即得成品。本发明的蝉拟青霉发酵物饲料添加剂可用于制备动物饲料或其他多组分的动物饲料添加剂。所述动物可以是猪、兔、肉鸡、蛋鸡、肉鸭、鹅、山羊、奶牛、肉牛以及水产动物。本发明的蝉拟青霉发酵物饲料在动物饲料中的添加量最少可为动物饲料总重量的0. 2%, 一般情况下，添加剂在动物饲料中的添加量为动物饲料总重量的2% -6%。本发明的饲料添加剂的作用包括但不限于下述方面增强食欲，加快饲料养分消化、吸收，消除畜禽挑食、厌食，明显提高日增重和饲料转化率。本发明的蝉拟青霉发酵物饲料添加剂生产方法适合工业化生产，不受时间地点的限制，可根据市场的需求增加或缩减生产规模。本发明工艺简单、工艺稳定、易调控、成功率高；采用本发明方法生产投资少，占地少、无三废问题，适合大中型企业采用。其产品是一种功能性饲料添加剂，可广泛应用于猪、兔、肉鸡、蛋鸡、肉鸭、鹅、山羊、奶牛、肉牛以及水产动物。作用有但不限于下述方面增强食欲，加快饲料养分消化、吸收，消除畜禽挑食、厌食，明显提高日增重和饲料转化率。本发明方法生产的蝉拟青霉发酵物饲料添加剂具有独特的先进性一、所用菌种为传统名贵中药材蝉花，属云南当地省级药品标准目录，符合绿色饲料添加剂安全、有效的特征。应用于饲料添加剂目前尚无产品面市。二、饲料添加剂成品所用培养物包括固体培养的菌丝体和少量孢子、培养基基质，资源利用率最大，生产过程无污染，达到生产效益和社会效益最佳。
图I葡糖糖标准曲线图2腺苷标准曲线图3 10iig/mL腺苷对照品HPLC色谱图 图4蝉拟青霉培养物超声水提取液HPLC色谱图
具体实施例方式以下结合具体实施例对本发明作进一步描述，应理解实例并非用于限制本发明的保护范围。实施例I :蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的生产(I)斜面菌种制备将土豆煮熟，过滤去渣后，加入蔗糖、定容，加入琼脂融化，分装进试管，在0. IMpa压力下，121°C,灭菌0. 5h,放气完毕,趁热摆放成斜面自然冷却。无菌条件下将蝉拟青霉接到斜面试管，放入20°C培养箱，培养15天。(2)摇瓶种子液的制备先将土豆煮熟，过滤去渣后，加入蔗糖、定容、封口灭菌的过程。灭菌条件在0. IMpa压力下，121°C，灭菌0. 5h。灭菌完毕，将培养基冷却，无菌条件下将斜面种接进摇瓶培养基中，将接种的摇瓶置入摇床振荡培养。培养条件140r/min，20°C培养5天。(3)发酵罐种子液的制备将摇瓶种子液按5% -10%体积比例接种到以PDB培养基或PSB发酵罐培养基中，20下,搅拌速率140rpm,通气25vvm,培养3天即得蝶拟青霉种子液；(4)固体培养a.固相培养基的制备(按重量份)表I固体培养基配方
权利要求
1.一种蝶拟青霉发酵物饲料添加剂，为蝶拟青霉Paecilomyces cicadae (Miquel)Samson的发酵产物。
2.如权利要求I所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剤，其特征在于，所述蝉拟青霉的发酵产物为将蝉拟青霉菌株先斜面培养，再种子液培养，而后接种固体培养基发酵培养后采收获得。
3.如权利要求2所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剤，其特征在于，所述固体培养基包括下列重量份的原料小麦20 45; 玉米粉5 3 O; 蔗糖0.5 5; 蚕蛹粉0.5 5; KNO30.1-3； KH2PO40.05-1； MgSO40.05~0.8; H2O25-70。
4.如权利要求2所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剤，其特征在干，所述蝉拟青霉菌株为虫单拟青霉菌株 Paecilomyces cicadae (Miq. ) Samson CGMCC No. 3453。
5.如权利要求1-4任ー权利要求所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剤，其特征在于，所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂中，多糖总含量为130-250mg/g、虫草酸含量为ll_20mg/g、腺苷含量为 O. 14-0. 19mg/g。
6.如权利要求I所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，包括下列步骤 a.斜面菌种制备将蝉拟青霉菌株接种到斜面培养基上，20 25°C下，培养3 5天； b.摇瓶种子液的制备从斜面上刮取菌丝接种到以PDB培养基或PSB培养基(即马铃薯葡萄糖液体培养基、马铃薯蔗糖液体培养基)培养基中，20 25°C下，140 160rpm，培养3 5天即得蝶拟青霉种子液； c.发酵罐种子液的制备将摇瓶种子液按5%-10%体积比例接种到以PDB培养基或PSB发酵罐培养基中，20 25°C下，搅拌速率140 160rpm，通气25vvm，培养3 5天即得蝶拟青霉种子液； d.将步骤c中制得的蝉拟青霉种子液按重量百分比为5% 10%接入灭菌后的固相培养基中，在温度为18 23°C，湿度为50 90%的条件下，静置封闭式培养10 15天； e.采收培养物； f.脱水干燥40-45°C，烘干脱水。
g.粉碎后即得成品。
7.如权利要求6所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述固体培养基包括下列重量份的原料小麦20 45; 玉米粉5 3 O; 蔗糖0.5 5; 蚕蛹粉0.5 5; KNO30.1-3； KH2PO40.05-1； MgSO40.05~0.8; H2O25-70。
8.如权利要求6所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的制备方法，其特征在于，所述蝉拟青霉菌株为蝶拟青霉菌株 Paecilomyces cicadae (Miq. ) Samson CGMCC No. 3453。
9.如权利要求1-5任ー权利要求所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂用于制备动物饲料或动物饲料添加剂的用途。
10.如权利要求9所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的用途，其特征在于，所述动物饲料为猪、免、肉鸡、蛋鸡、肉鸭、鹅、山羊、奶牛、肉牛或水产动物的饲料。
11.如权利要求9所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的用途，其特征在于，所述蝉拟青霉发酵物饲料在动物饲料中的添加量至少为动物饲料总重量的O. 2%。
12.如权利要求11所述蝉拟青霉发酵物饲料添加剂的用途，其特征在于，所述蝉拟青霉发酵物饲料在动物饲料中的添加量为动物饲料总重量的2% -6%。
全文摘要
本发明涉及蝉拟青霉发酵物饲料添加剂及其制备与应用。本发明的蝉拟青霉发酵物饲料添加剂为蝉拟青霉Paecilomycescicadae(Miquel)Samson的发酵产物。本发明还进一步公开了蝉拟青霉发酵物饲料添加剂为的制备与应用。本发明的饲料添加剂制备工艺流程简单，原料廉价易得，含有丰富的腺苷、虫草酸和多糖，虽然在配合饲料中添加量极微，但效果十分显著它可以提高饲料的利用率；改善饲料的适口性；促进畜禽生长发育；改善饲料畜禽产品的品质；合理利用饲料资源，该饲料添加剂还能通过增强动物的免疫调节提高成活率，降低饲养成本。
文档编号C12N1/14GK102669426SQ20121005876
公开日2012年9月19日 申请日期2012年3月7日 优先权日2011年3月10日
发明者孙长胜, 朱福康, 谭悠久, 陈祝安 申请人:上海泛亚生命科技有限公司