一种新的β-葡萄糖苷酶、其编码基因及其用途
【专利摘要】本发明涉及一种新型β-葡萄糖苷酶、其编码基因及其高效异源表达。本发明还涉及含有所述编码基因的表达载体和宿主细胞。本发明还涉及表达编码基因的宿主细胞及其诱导培养条件。本发明还涉及利用所述β-葡萄糖苷酶将纤维素降解过程中所生成的纤维二糖水解为葡萄糖的方法。本发明的β-葡萄糖苷酶具有弱酸性条件下稳定性好和活性高的特点，可良好地应用于工业生产。
【专利说明】—种新的β-葡萄糖苷酶、其编码基因及其用途
【技术领域】
[0001]本发明属于生物【技术领域】，涉及一种新的β-葡萄糖苷酶、其编码基因、用途、及其高效异源表达。
【背景技术】 [0002]纤维素是多个葡萄糖残基以β_1，4-糖苷链连接而成的多聚物，是地球上最丰富的可再生的生物质资源。以木质纤维素为原料、用纤维素酶水解纤维素生成葡萄糖，进而发酵为燃料乙醇成为应对当今世界能源危机、环境污染等问题的重要出路。
[0003]纤维素酶是指能够将纤维素转化成葡萄糖的一系列酶的总称，主要包括内切葡聚糖酶(endo- β -1, 4-glucanase, EC 3.2.1.4)、外切葡聚糖酶(exoglucanase, EC3.2.1.91)和β-葡萄糖苷酶(i3-gluc0SidaSe，EC 3.2.1.21)。内切葡聚糖酶作用于纤维素长链分子的内部将长纤维切成短纤维，外切葡聚糖酶作用于纤维素分子的一端，以两个葡萄糖残基为单位进行切割生成纤维二糖，β-葡萄糖苷酶切割纤维二糖及一些纤维寡糖最终生成单个的葡萄糖分子。
[0004]作为纤维素复合酶系的重要组成之一，β -葡萄糖苷酶的关键作用主要体现在两个方面:一方面，由于纤维二糖积累对其上游内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶的活性具有显著的反馈抑制作用，因此，β-葡萄糖苷酶对纤维二糖的高效水解能力对纤维素的彻底降解起到至关重要的作用。另一方面，除水解活性，葡萄糖苷酶还具有转糖苷活性，在一定的条件下可以通过转糖苷作用将两个葡萄糖分子合成一个槐糖分子，而已经发现槐糖是纤维素酶基因表达的强诱导物。一般认为丝状真菌中纤维素酶合成的诱导机制是:存在于分生孢子和菌丝表面的少量组成型纤维素酶首先降解纤维素生成纤维二糖等寡糖，然后在质膜结合的葡萄糖苷酶的转糖苷作用下，生成槐糖等诱导物，经细胞膜上的组成型透性酶系统进人细胞内，启动纤维素酶的合成。由此可见，提高β_葡萄糖苷酶在纤维素降解体系的催化活性，对于提高纤维素降解体系转化效率及降低纤维素乙醇产业生产成本，具有巨大的商业价值和现实意义。
[0005]β -葡萄糖苷酶底物专一性差异很大，除了作用于纤维二糖及纤维糊精而在纤维素产乙醇产业方面发挥重要作用外，还可作用于芳基葡萄糖苷(如熊果甙、水杨苷及生色化合物P-硝基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷)、烷基葡萄糖苷(甲基-β-D-葡萄糖苷)及β-1，3-葡萄糖苷(昆布二糖)等。因此在其他领域的应用也非常广泛。例如在食品行业中，由于它能将水果中糖苷前体的芳香族化合物释放变为具有浓郁香味的化合物，从而改善茶叶、果汁和果酒的风味，因此其作为特殊的风味酶已得到广泛应用；在医药保健品行业中，β -葡萄糖苷酶可通过生物转化功能，将某些广泛存在的天然产物转化为在自然界稀有甚至不存在的物质。例如，β -葡萄糖苷酶可将无活性的结合型大豆异黄酮转化为具有生理活性的游离型苷元，进而发挥改善更年期综合症、预防骨质疏松、抗氧化等生物学功能等。
[0006]葡萄糖苷酶广泛存在于自然界中许多植物和微生物体内。由于植物来源的 葡萄糖苷酶活性远比微生物来源要低，所以其分离主要集中在微生物上。现有技术中的大部分，尤其是细菌来源的β-葡萄糖苷酶的活力较低，在产量、理化特性、催化效率等方面也远远不能满足现代工业生产的需求。因此在工业生产中研究较多的是曲霉，通过自然选育、诱变育种、原生质体诱变和基因工程手段，人们选育出了众多的高产黑曲霉和米曲霉等菌株并优化了产酶工艺(应用生态学报，1999，1(K6) =732-734 ；Appl.Environ.Microbiol, 1998,64(10):3607-3614)。同时国外一些知名酶制剂公司还利用这些高酶活的β_葡萄糖苷酶在产纤维素酶的工程菌株中进行重组表达，提高了产量(EuropeanPatentEP1225227 ；EP0244234 ;EP0121397)。但是目前工业上β -葡萄糖苷酶产量还是远远不够的，因而有必要进一步扩大筛选对象，从中筛选出酶活较高、理化特性更趋多样化的新的β -葡萄糖苷酶,并进行高效分泌表达来降低工业生产成本。
【发明内容】
[0007]本发明的目的在于提供一种新的葡萄糖苷酶、其编码基因及其用途。
[0008]在本发明的第一方面，提供一种分离的多肽，该多肽选自下组:
[0009](a)具有SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的多肽；
[0010](b)具有SEQ ID NO:2中第22-736位所示的氨基酸序列的多肽；
[0011](b)将(a)或(b)的多肽的氨基酸序列经过一个或多个(如1-20个，较佳地1-10个；更佳地1-5个；更佳地1-3个)氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)或
(b)多肽功能的衍生的多肽；
[0012](c)具有(a)或(b)多肽功能的(a)或(b)的多肽的片段(较佳地，其与SEQ IDNO:2的序列相同性高于70% ;更佳地高于75% ;更佳地高于80% ;更佳地高于85% ;更佳地高于90% ;更佳地高于95% ;更·佳地高于98%或99%);或
[0013](d)在(a)或(b)多肽的N或C末端具有标签序列，或在(b)多肽的N末端具有信号肽序列的多肽。
[0014]在一个优选例中,所述的多肽来源于土曲霉(Aspergillus terreus)。
[0015]在本发明的另一方面，提供一种分离的多核苷酸，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组:
[0016](I)编码所述多肽的多核苷酸；或
[0017](2)与多核苷酸(I)互补的多核苷酸。
[0018]在一个优选例中，该多核苷酸编码如SEQ ID NO: 2所示氨基酸序列的多肽，或编码SEQ ID NO:2中第22-736位所示的氨基酸序列的多肽。
[0019]在另一优选例中，该多核苷酸的核苷酸序列如SEQ ID N0:1所示；或如SEQ IDNO:1中第64-2211位所示。
[0020]在本发明的另一方面，提供一种载体，其含有所述的多核苷酸。
[0021]在另一优选例中，所述的载体是真核表达载体。
[0022]在另一优选例中，所述的载体是毕赤酵母表达载体，例如pPIC。
[0023]在另一优选例中，所述的载体是里氏木霉表达载体，例如骨架载体pHDt/sk。
[0024]在另一优选例中，所述的载体还含有与所述的多核苷酸操作性连接的启动子，所述的启动子具有SEQ ID NO: 14所示的核苷酸序列。
[0025]在本发明的另一方面，提供一种遗传工程化的宿主细胞，它含有所述的载体，或其基因组中整合有所述的多核苷酸。
[0026]在另一优选例中，所述的宿主细胞为非生殖细胞。
[0027]在另一优选例中，所述的宿主细胞为真核细胞。
[0028]在另一优选例中，所述的宿主细胞为里氏木霉和毕赤酵母。
[0029]在本发明的另一方面，提供一种所述的多肽的制备方法，该方法包含:
[0030](i)培养所述的宿主细胞，使之表达(较佳地，诱导其表达)所述的多肽；
[0031](ii)收集含有所述的多肽的培养物；和
[0032](iii)从培养物中分离出所述的多肽。
[0033]在本发明的另一方面，提供所述的多肽或所述的宿主细胞的培养物的用途，用于水解糖苷键；或用于形成简单糖(如葡萄糖)。
[0034]在另一优选例中，所述的多肽水解选自(但不限于)下述底物的糖苷键:水杨苷、纤维素、纤维二糖、熊果苷、芳基葡萄糖苷或烷基葡萄糖苷、β_1，4-葡萄糖苷、硝基苯-β -D-半乳糖、β -D-木糖苷、硝基苯_β -吡喃葡萄糖苷、硝基苯_β -盐藻糖苷、海带多糖、地衣多糖、或它们的混合物。
[0035]在本发明的另一方面， 提供一种组合物，它含有所述的多肽或含有所含宿主细胞的培养物；以及食品学或工业上可接受的载体。
[0036]在另一优选例中，所述的组合物还含有调节酶活性的添加物，例如金属离子。
[0037]在本发明的另一方面，提供一种水解糖苷键或形成简单糖(如葡萄糖)的方法，该方法包含:用所述的多肽处理待水解的底物。
[0038]在另一优选例中，所述的底物选自(但不限于):水杨苷、纤维素、纤维二糖、熊果苷、芳基葡萄糖苷或烷基葡萄糖苷、β_1，4-葡萄糖苷、硝基苯-β-D-半乳糖、β-D-木糖苷、硝基苯-β -吡喃葡萄糖苷、硝基苯-β -盐藻糖苷、海带多糖、地衣多糖、或它们的混合物。
[0039]在另一优选例中，在ρΗ3.0-7.5条件下，用所述的多肽处理待水解的底物。
[0040]在另一优选例中，在ρΗ4.0-7.0、更佳地ρΗ4.5.0-6.5、更佳地ρΗ5_5.5条件下，用所述的多肽处理待水解的底物。
[0041]在另一优选例中，在温度40_75°C条件下，用所述的多肽处理待水解的底物。
[0042]在另一优选例中，在温度45_70°C、更佳地50_65°C、更佳地55_60°C条件下，用所述的多肽处理待水解的底物。
[0043]在本发明的另一方面，提供所述多肽的用途，所述用途包括:
[0044](I)催化人参皂苷Rg3水解为人参皂苷Rh2 ；
[0045](2)水解β -糖苷型异黄酮为苷元型异黄酮；
[0046](3)将白藜芦醇苷转化为白藜芦醇；
[0047](4)水解乳糖的β -糖苷键；
[0048](5)作为食品工业中调节风味的添加物；
[0049](6)作为以纤维素为原料的乙醇发酵的添加物；或
[0050](7)作为医药保健品的添加物(例如:将无活性的结合型大豆异黄酮转化为具有生理活性的游离型苷元)。
[0051]本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。
【专利附图】
【附图说明】
[0052]图1为重组里氏木霉和毕赤酵母基因组用验证引物PCR后的电泳图。图中，泳道M为λ -Hind III digest DNA marker的电泳结果(片段由上到下依次是23.13kb、9.416kb、
6.557kb、4.361kb、2322bp、2027bp)，泳道1_3为3个里氏木霉BglS转化子基因组DNA为模板扩增bgls基因后的电泳图，泳道6-9为5个(P1-P5)毕赤酵母BglS转化子基因组DNA为模板扩增bgls基因后的电泳图。
[0053]图2为bgl s基因的表达、表达产物的纯化SDS-PAGE图。其中，泳道M为蛋白Marker的电泳结果(分子量由上到下依次为94、66.2、45、26kDa)，泳道I为里氏木霉转化子Al的发酵上清液，泳道2为上清液挂镍柱后用含40mM咪唑缓冲液的洗脱液的电泳结果，泳道3为毕赤酵母转化子Pl的发酵上清液，泳道4为上清液挂镍柱后用含40mM咪唑缓冲液的洗脱液的电泳结果，其他不相关泳道已去除。
[0054]图3为BglS在不同pH条件下的酶活力曲线。其中，?表示柠檬酸钠缓冲液中的酶活力，表示醋酸缓冲液中的酶活力，▲表示磷酸缓冲液中的酶活力，其中实线表示TrBgls重组蛋白，虚线表示PpBglS重组蛋白。
[0055]图4为BglS在不同温度条件下的酶活力曲线。表示TrBglS重组蛋白的酶活力，▲为PpBglS重组蛋白的酶活力。
[0056]图5为重组BglS对不同温度的耐受性检测结果。其中，表示50°C下的酶活力，▲表示60°C下的酶活力，实线表示TrBglS重组蛋白，虚线表示PpBglS重组蛋白。
[0057]图6为β葡萄糖苷酶水解糖苷键的位置示意图。
【具体实施方式】
[0058]本发明通过纤维素诱导培养土曲霉，得到mRNA并逆转录成cDNA单链，并以cDNA单链为模板，用聚合酶链式反应的方法得到β -葡萄糖苷酶基因bgls的编码序列，该β-葡萄糖苷酶基因编码序列可在宿主细胞中表达生产该β-葡萄糖苷酶，用于对硝基苯-β-D-葡萄糖苷(pNPG)及纤维二糖的降解。实验证明，与现有细菌来源的葡萄糖苷酶相比，本发明的β -葡萄糖苷酶BglS最适反应温度为60°C，在弱酸性条件下稳定性较好、活性较高，且能在里氏木霉中非常高效地分泌表达，具有良好地应用于工业生产的潜能。
[0059]如本文所用，术语“本发明的多肽”、“本发明的蛋白”、“本发明的β_葡萄糖苷酶”、“BglS 蛋白”、“TrBglS 蛋白”、“PpBglS 蛋白”、“BglS 多肽”、“TrBglS 多肽”、“PpBglS 多肽”或“β-葡萄糖苷酶BglS”可互换使用，都指具有β-葡萄糖苷酶BglS氨基酸序列(SEQ IDNO: 2或其变异形式或衍生物)的蛋白或多肽。其包括含有或不含起始甲硫氨酸的β_葡萄糖苷酶BglS。其可含有或不含有信号肽序列。
[0060]如本文所用，术语“本发明的基因”、“bgls基因”、“bgls”指具有葡萄糖苷酶编码基因序列(SEQ ID NO:1或其变异形式或衍生物)的多核苷酸。其可含有或不含有信号肽编码序列。
[0061 ] 如本文所用，术语“里氏木霉转化子”、“里氏木霉重组子”、“TrBglS里氏木霉重组子”或“TrBglS里氏木霉转化子”可互换使用，都指以里氏木霉为宿主，异源表达了土曲霉β -葡萄糖苷酶BglS氨基酸序列(SEQ ID NO: 2或其变异形式或衍生物)。
[0062]如本文所用，术语“毕赤酵母转化子”、“毕赤酵母重组子”、“PpBglS毕赤酵母重组子”或“PpBglS毕赤酵母转化子”可互换使用，都指以毕赤酵母为宿主，异源表达了土曲霉β -葡萄糖苷酶BglS氨基酸序列(SEQ ID NO: 2或其变异形式或衍生物)。
[0063]如本文所用，所述的“简单糖”指葡聚糖链(或多糖链)的糖苷键被切割后形成的一类糖的总称，其链长度低于被切割前。例如，所述的简单糖含有1-50个葡萄糖，较佳的，含有1-30个葡萄糖；更佳的，含有1-15个葡萄糖。所述的“简单糖”包括“葡萄糖”。
[0064]如本文所用，所述的“葡萄糖”指一种含有六个碳原子的单糖。分子式C6H1206。所述的“纤维二糖”是“两个葡萄糖”的聚合体。
[0065]如本文所用，“分离的”是指物质从其原始环境中分离出来(如果是天然的物质，原始环境即是天然环境)。如活体细胞内的天然状态下的多聚核苷酸和多肽是没有分离纯化的，但同样的多聚核苷酸或多肽如从天然状态中同存在的其他物质中分开，则为分离纯化的。
[0066]如本文所用，“分离的BglS蛋白或多肽”是指BglS多肽基本上不含天然与其相关的其它蛋白、脂类、糖类或其它物质。本领域的技术人员能用标准的蛋白质纯化技术纯化BglS蛋白。基本上纯的多肽在非还原聚丙烯酰胺凝胶上能产生单一的主带。BglS多肽的纯度能用氨基酸序列分析。
[0067]如本文所用，所述的“可操作地连接”或“操作性连接”是指两个或多个核酸区域或核酸序列的功能性的空间排列。例如:启动子区被置于相对于目的基因核酸序列的特定位置，使得核酸序列的转录受到该启动子区域的引导，从而，启动子区域被“可操作地连接”到该核酸序列上。
[0068]本发明的多肽 可以是重组多肽、天然多肽、合成多肽，优选重组多肽。
[0069]本发明的多肽可以是天然纯化的产物，或是化学合成的产物，或使用重组技术从原核或真核宿主(例如，细菌、酵母、高等植物、昆虫和哺乳动物细胞)中产生。根据重组生产方案所用的宿主，本发明的多肽可以是糖基化的，或可以是非糖基化的。本发明的多肽还可包括或不包括起始的甲硫氨酸残基，还可包括或不包括信号肽序列。
[0070]本发明还包括BglS蛋白的片段、衍生物和类似物。如本文所用，术语“片段”、“衍生物”和“类似物”是指基本上保持本发明的天然BglS蛋白相同的生物学功能或活性的多肽。本发明的多肽片段、衍生物或类似物可以是(i)有一个或多个保守或非保守性氨基酸残基(优选保守性氨基酸残基)被取代的多肽，而这样的取代的氨基酸残基可以是也可以不是由遗传密码编码的，或(ii)在一个或多个氨基酸残基中具有取代基团的多肽，或(iii)成熟多肽与另一个化合物(比如延长多肽半衰期的化合物，例如聚乙二醇)融合所形成的多肽，或(iv)附加的氨基酸序列融合到此多肽序列而形成的多肽(如前导序列或分泌序列或用来纯化此多肽的序列或蛋白原序列，或与抗原IgG片段的形成的融合蛋白)。根据本文的教导，这些片段、衍生物和类似物属于本领域熟练技术人员公知的范围。
[0071]在本发明中，术语“BglS多肽”指具有BglS蛋白活性的SEQ ID N0:2序列的多肽。该术语还包括具有与BglS蛋白相同功能的、SEQ ID N0:2序列的变异形式。这些变异形式包括(但并不限于):一个或多个(通常为1-50个，较佳地1-30个，更佳地1-20个，更佳地1-10个，最佳地1-5个)氨基酸的缺失、插入和/或取代，以及在C末端和/或N末端添加或缺失一个或数个(通常为20个以内，较佳地为10个以内，更佳地为5个以内)氨基酸。例如，在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。比如，在C末端和/或N末端添加或缺失一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能；又比如，仅表达该蛋白的催化结构域，而不表达碳水化合物结合结构域也能获得和完整蛋白同样的催化功能。因此该术语还包括BglS蛋白的活性片段和活性衍生物。例如，变异可以发生在SEQ ID NO:2的保守功能域(第40-313位，第356-604位，第655-725位氨基酸)之外。变异可以是1-3个氨基酸缺失、取代和插入。
[0072]。该多肽的变异形式包括:同源序列、保守性变异体、等位变异体、天然突变体、诱导突变体、在高或低的严谨度条件下能与bgls DNA杂交的DNA所编码的蛋白、以及利用抗BglS多肽的抗体获得的多肽或蛋白。本发明还提供了其他多肽，如包含BglS多肽或其片段的融合蛋白。除了几乎全长的多肽外，本发明还包括了 BglS多肽的片段。通常，该片段具有BglS多肽序列的至少约10个连续氨基酸，通常至少约30个连续氨基酸，较佳地至少约
50个连续氨基酸,更佳地至少约80个连续氨基酸,最佳地至少约100个连续氨基酸。
[0073]发明还提供BglS蛋白或多肽的类似物。这些类似物与天然BglS多肽的差别可以是氨基酸序列上的差异，也可以是不影响序列的修饰形式上的差异，或者兼而有之。这些多肽包括天然或诱导的遗传变异体。诱导变异体可以通过各种技术得到，如通过辐射或暴露于诱变剂而产生随机诱变，还可通过定点诱变法或其他已知分子生物学的技术。类似物还包括具有不同于天然L-氨基酸的残基(如D-氨基酸)的类似物，以及具有非天然存在的或合成的氨基酸(如β、Y-氨基酸)的类似物。应理解，本发明的多肽并不限于上述例举的代表性的多肽。
[0074]修饰(通常不改变一级结构)形式包括:体内或体外的多肽的化学衍生形式如乙酰化或羧基化。修饰还包括糖基化，如那些在多肽的合成和加工中或进一步加工步骤中进行糖基化修饰而产生的多肽。这种修饰可以通过将多肽暴露于进行糖基化的酶(如哺乳动物的糖基化酶或去糖基化酶)而完成。修饰形式还包括具有磷酸化氨基酸残基(如磷酸酪氨酸，磷酸丝氨酸，磷酸苏氨酸)的序列。还包括被修饰从而提高了其抗蛋白水解性能或优化了溶解性能的多肽。
[0075]作为本发明的优选方式，所述的BglS蛋白的片段、衍生物、类似物、变异形式或修饰形式保留了发挥水解糖苷键功能的功能域；更佳地，所保留的功能域是:糖基水解酶第3家族氨基端保守功能域、糖基水解酶第3家族羧基端保守功能域和类纤维连接蛋白III结构域。更佳地，所保留的功能域是相应于SEQ ID NO:2氨基酸序列中第40-313位、第356-604位、第655-725位序列结构的功能域。
[0076]作为本发明的优选方式，“BglS蛋白保守性变异多肽”指与SEQ ID NO:2的氨基酸序列相比，有至多20个，较佳地至多10个，更佳地至多5个，最佳地至多3个氨基酸被性质相似或相近的氨基酸所替换而形成多肽。这些保守性变异多肽最好根据表1进行氨基酸替换而产生。
[0077]表1
[0078]
最初的残基代表性的取代优选的取代
【权利要求】
1.一种分离的多肽，其特征在于，该多肽选自下组: (a)具有SEQID NO:2所示的氨基酸序列的多肽； (b)具有SEQID NO:2中第22-736位所示的氨基酸序列的多肽； (b)将(a)或(b)的多肽的氨基酸序列经过一个或多个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且具有(a)或(b)多肽功能的衍生的多肽； (C)具有(a)或(b)多肽功能的(a)或(b)的多肽的片段；或(d)在(a)或(b)多肽的N或C末端具有标签序列，或在(b)多肽的N末端具有信号肽序列的多肽。
2.一种分离的多核苷酸，其特征在于，它包含一核苷酸序列，该核苷酸序列选自下组: (1)编码如权利要求1所述多肽的多核苷酸；或 (2)与多核苷酸(I)互补的多核苷酸。
3.—种载体，其特征在于，其含有权利要求2所述的多核苷酸。
4.如权利要求3所述的载体，其特征在于，其还含有与权利要求2所述的多核苷酸操作性连接的启动子，所述的启动子具有SEQ ID NO: 14所示的核苷酸序列。
5.一种遗传工程化的宿主细胞，其特征在于，它含有权利要求3或4所述的载体，或其基因组中整合有权利要求2所述的多核苷酸。
6.—种权利要求1所述的多肽的制备方法,其特征在于,该方法包含: (i)培养权利要求5所述的宿主细胞，使之表达权利要求1所述的多肽； (?)收集含有权利要求1所述的多肽的培养物；和 (iii)从培养物中分离出权利要求1所述的多肽。
7.权利要求1所述的多肽或权利要求6所述的宿主细胞的培养物的用途，用于水解糖苷键；或用于形成简单糖。
8.一种组合物，其特征在于，它含有权利要求1所述的多肽或含有权利要求5所含宿主细胞的培养物；以及食品学或工业上可接受的载体。
9.一种水解糖苷键或形成简单糖的方法，其特征在于，该方法包含:用权利要求1所述的多肽处理待水解的底物。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，在pH3.0-7.5条件下，用权利要求1所述的多肽处理待水解的底物。
11.如权利要求9所述的方法，其特征在于，在温度40-75°C条件下，用权利要求1所述的多肽处理待水解的底物。
12.权利要求1所述多肽的用途，其特征在于，所述用途包括: (1)催化人参皂苷Rg3水解为人参皂苷Rh2； (2)水解β_糖苷型异黄酮为苷元型异黄酮； (3)将白藜芦醇苷转化为白藜芦醇； (4)水解乳糖的β-糖苷键； (5)作为食品工业中调节风味的添加物； (6)作为以纤维素为原料的乙醇发酵的添加物；或 (7)作为医药保健品的添加物。
【文档编号】C12N1/15GK103571809SQ201210258194
【公开日】2014年2月12日 申请日期:2012年7月24日 优先权日:2012年7月24日
【发明者】周志华, 邹根, 严兴, 魏维, 陈玲, 张珺, 王成树 申请人:中国科学院上海生命科学研究院