专利名称：检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物及试剂盒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种基因探针组合物及试剂盒，尤其涉及一种检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物及试剂盒。
背景技术：
急性淋巴细胞性白血病是一种恶性程度很高的血液疾病，其特征为外周血中存在大量的类似于淋巴母细胞的未成熟白细胞，这些异常细胞也可在骨髓，淋巴结，脾脏和其它器官中发现。急性淋巴细胞白血病在儿童急性白血病中约占80%，发病率高峰在3岁至7 岁之间，该病也可发生于成年人，约占所有成年白血病的20%。在急性白血病中，恶性细胞失去成熟和定向分化的功能，恶变细胞迅速分裂并取代正常细胞。当恶性细胞取代正常的骨髓成分时即发生骨髓衰竭，由于正常细胞的数目急剧减少，患者变得容易出血和感染。
目前，急性淋巴细胞性白血病的发病原因仍不清楚。辐射、某些毒素，如苯和一些化学试剂，可能和该病的诱发有关。近年来分子生物学的研究表明，染色体和某些基因的异变在急性淋巴细胞性白血病的发生过程中发挥了关键的作用。例如TEL/AM1基因融合是由t(12 ；21)染色体易位引起的。这种基因重排最常见于B细胞急性淋巴细胞性白血病，荧光原位杂交法的检出率为21%，而常规细胞遗传学的检出率仅为O. 05%。这种基因易位有较好的预后，但可能有复发。TEL基因在儿童急性淋巴细胞白血病中常有缺失，虽然在细胞遗传学上不可见，但可引起12pl2-13的杂合子缺失(LOH)。这个缺失和TEL/AM1易位有关。 TEL和AMLl基因均编码转录因子，但TEL在骨髓造血中是必需的。TEL/AML1易位引起几乎完整的AMLl蛋白和TEL的一部分相融合，是引发急性淋巴细胞性白血病的原因之一。
PAX5也是一种转录因子。PAX5编码B淋巴细胞特异的激活蛋白，在淋巴细胞分化的早期表达，该蛋白在淋巴细胞分化早期具有重要调节作用。PAX5基因位于染色体9pl3区域。T(9 ；14) (pl3 ；q32)易位引起的PAX5基因转录异常，会引起淋巴瘤。
P16基因位于染色体9p21。而9p21的缺失存在大量肿瘤之中包括10%的儿童急性淋巴细胞性白血病病人，并且其发病率在T细胞急性淋巴细胞性白血病中更高。这一区域有很多研究，发现荧光原位杂交法检出9p21缺失的儿童急性淋巴细胞白血病中的90% 含有抑癌基因P16(CDKN2A)的缺失。该基因抑制CDK4和CDK6两个激酶，控制细胞周期从 Gl到S期的转换。这一细胞周期控制功能的破坏引起突变细胞的增值。
IKZFl (Ikaros family zinc finger protein I)是一种具有锋指结构的重要的人体蛋白质。IKZFl在造血系统中具有极其重要的功能，它的缺失可引发淋巴细胞性白血病。 近年来的研究表明IKZFl是一种抑癌基因，该基因的缺失和急性B淋巴细胞性白血病的发病密切相关。最近的研究发现，在费城染色体阳性的急性淋巴细胞性白血病的发生和慢性髓性白血病的急淋变过程中，包括IKZFl基因缺失在内的其他遗传学改变与BCR-ABLl易位起了协同作用。
综上所述，TEL, AMLI, PAX5，P16和IKZFl这5种基因和急性淋巴细胞白血病的发生有着密切的关系。发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物及试剂盒，可以用于确定急性淋巴细胞性白血病的分子病理类型，判断病情预后，指导个体化治疗，评估临床治疗效果，监测病灶复发和转移。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案为
本发明提供了一种检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物，包括TEL基因探针，AMLl基因探针，PAX5基因探针，P16基因探针和IKZFl基因探针。
优选地，所述的基因探针组合物包括
TEL 基因探针RP11-654E9(UCSC genome browser)；
AMLl 基因探针RP11-77G18(UCSC genome browser)；
PAX5 基因探针RP11-243F8(UCSC genome browser)；
P16 基因探针RP11-97A22(UCSC genome browser)；
IKZFl 基因探针RPl 1-663L2(UCSC genome browser)
上述基因探针组合物中所涉及的基因探针均为经过荧光素标记的探针。
根据本发明一个优选的实施方案，TEL、AML1、PAX5、P16、IKZFl单个基因探针制备步骤如下
I)、克隆筛选检索UCSC genome browser,NCBI Clone Registry,Ensembl Genome Browser等数据库分别含TEL，AMLl，PAX5，P16，IKZFl基因的所有克隆，并对这些克隆进行筛选，选择最佳的克隆；
2)、克隆培养和鉴定按照筛选确定的克隆编号购买BAC克隆(美国Invitrogen 公司)，取5-10微升克隆菌液加到3-5毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37°C振摇活化培养8-16小时；然后将菌液全部加入至400-500毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中， 37°C震摇培养8-16小时d#TEL、AMLl、PAX5、P16、IKZFl的BAC克隆用相对应的基因引物进行多聚酶链式反应扩增，用1-2%的琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析，从而完成待选克隆的分子鉴定；
3)、基因探针的制备和验证对多聚酶链式反应鉴定阳性的菌液，进行质粒制备； 用ND-1000超微量分光光度计对质粒进行浓度和纯度(260nm/280nm)测定；采用缺口平移的方法对质粒DNA进行突光标记，(选择最佳的突光染料和镜检的突光显微镜的滤光片匹配组合，使检测到的荧光信号强度最大)；对标记产物进行沉淀和浓缩；将荧光标记的探针溶于含有50%去离子甲酰胺的杂交缓冲液中，-20° C避光，储存，采用正常人外周血单个核细胞甩片进行探针鉴定。
根据本发明一个优选的实施方案，TEL、AML1、PAX5、P16、IKZFl基因探针组合物的制备步骤如下
I)、克隆筛选检索UCSC genome browser,NCBI Clone Registry,Ensembl Genome Browser等数据库分别含有TEL，AMLl，PAX5，P16、IKZFl基因的所有细菌人工染色体(BAC) 克隆，并对这些克隆进行多聚酶链式反应(PCR)鉴定，选出最佳的克隆。
2)、克隆培养和鉴定按照筛选确定的克隆编号购买BAC克隆(美国Invitrogen 公司)，取5-10微升克隆菌液加到3-5毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37°C振摇活化培养8-16小时；然后将菌液全部加入至400-500毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中， 37°C震摇培养8-16小时；对TEL、AMLl、PAX5、P16、IKZFl的BAC克隆用相对应的基因引物进行多聚酶链式反应扩增，用1-2%的琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析，从而完成待选克隆的分子鉴定。
3)、基因探针的制备和鉴定获得目的基因的克隆后，提取大量DNA，酶切DNA后采用缺口平移的方法对酶切后的DNA进行荧光素标记，再对TEL，AML1，PAX5，P16和IKZFl基因探针组合后进行沉淀和浓缩，将制作好的探针组合物溶解到含有50%去离子甲酰胺的杂交缓冲液中，即得荧光标记探针组杂交混合液，采用正常人外周血单个核细胞甩片进行探针鉴定。
根据本发明一个优越的实施方案，克隆筛选步骤中含TEL基因最优的克隆，编号为 RP11-654E9(UCSC genome browser)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆筛选步骤中含AMLl基因最优的克隆，编号为 RP11-77G18(UCSC genome browser)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆筛选步骤中含有PAX5基因最优的克隆，编号为 RP11-243F8 (UCSC genome browser)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆筛选步骤中含有P16基因最优的克隆，编号为 RP11-97A22 (UCSC genome browser)；
据本发明一个优越的实施方案，克隆筛选步骤中含有IKZFl基因最优的克隆，编号为 RP11-663L2 (UCSC genome browser) 0
根据本发明一个优越的实施方案，克隆培养和鉴定步骤中使用的TEL基因引物序列为
TEL 基因探针上游引物 5’ -TTTGGATGAAGAGCCTCGTTGTG-3’ (SEQ ID NO 1)和
下游引物5’ -GCGTGATATTGCCGAGATTTGC-3’ (SEQ ID NO:2)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆培养和鉴定步骤中使用的AMLl基因引物序列为
AMLl 基因探针上游引物 5’ -CCAAGAGGATTCATAGTCACGGG-3’ (SEQ ID NO 3)和
下游引物5’ -TCCTTGCCCTTACTGACCTTCC-3，(SEQ ID NO 4)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆培养和鉴定步骤中使用的PAX5基因引物序列为
PAX5 基因探针上游引物 5’ -GATCCTTCCAGCTTGGTCTCC-3’ (SEQ ID NO 5)和
下游引物5，-GGCTGAACGTGTATGTCTTCCC-3，(SEQ ID NO:6)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆培养和鉴定步骤中使用的P16基因引物序列为
P16 基因探针上游引物 5’ -CTTCCTGGACACGCTGGT-3，(SEQ ID NO 7)和
下游引物5’ -AGTCTTCATTGCTCCGCAGT-3’ (SEQ ID NO 8)；
根据本发明一个优越的实施方案，克隆培养和鉴定步骤中使用的IKZFl基因引物序列为
IKZFl 基因探针上游引物 5’ -CGGAAATCTGAAAGGGAACTG-3’ (SEQ ID NO 9)和
下游引物5，-GATGAAGAGAATGGGCGTGC-3，(SEQ ID NO 10)；
多聚酶链式反应扩增条件为94° C 5分钟；“94° C 30秒，58-62° C 30秒， 72。C 45秒”循环35次72° C 10分钟。
根据本发明的一个优选方法基因探针制备过程中用EcoRl酶对目的DNA进行酶切，EcoRl酶的浓度为O. I单位/微升；50微升切口平移体系中脱氧核糖核酸聚合酶I的使用量为10个单位，脱氧核糖核酸酶I使用量为50纳克。
根据本发明一个优选方案，在将标记好荧光素的DNA进行沉淀时，加入三种人类未标记的竞争性CotDNA，ssDNA和tRNA重复序列脱氧核糖核酸，以降低杂交反应时产生的荧光背景，其中CotDNA，ssDNA和tRNA沉淀时的使用浓度均为I毫克/毫升，沉淀的体系为 300微升。
根据本发明一个优选方案，基因探针浓缩方法为乙醇(_20°C )沉淀浓缩，最后使用杂交缓冲液溶解沉淀。
根据本发明一个优选实施方案，杂交缓冲液的组分包括50%的去离子甲酰胺， 2 X SSC和O. I克/毫升的硫酸葡聚糖。
本发明的另一目的是提供了一种急性淋巴细胞性白血病荧光原位杂交检测试剂盒，包括上述基因探针组合物。
优选地，所述的试剂盒还包括杂交缓冲液。更优选地，所述基因探针组合物溶解在杂交缓冲液中，即荧光标记探针组杂交混合液，更优选地，所述TEL基因探针的浓度为 4ng/y 1,AML1基因探针的浓度为4ng/μ 1，PAX5基因探针的浓度为4ng/μ 1，Ρ16基因探针的浓度为4ng/l·! 1，IKZFl基因探针的浓度为4ng/l·! I。
更优选地，所述杂交缓冲液的组分包括50%的去离子甲酰胺，2 X SSC和O. I克/毫升的硫酸葡聚糖。
优选地，所述试剂盒还包括DAPI复染液。
优选地，所述试剂盒还包括20X SSPE洗涤液。
优选地，所述试剂盒还包括包装试剂管的塑料包装盒。
本发明还提供了上述试剂盒在急性淋巴细胞白血病荧光原位杂交检测中的应用， 包括如下步骤
I)、标本处理和制片收集病人骨髓细胞，用O. 075摩尔/升的KCl低渗液去除骨髓中的红细胞，用固定液(甲醇冰乙酸=3 I)室温固定细胞三次，第一次固定30分钟， 第二、三次固定各15分钟，用固定液调整细胞浓度为lX105/ml，进行细胞甩片，晾干，用钻石笔标记细胞位置，用2XSSC(37°C )洗涤5分钟，梯度乙醇(70%，85%，2X100%乙醇) 中脱水，3分钟/梯度，晾干后FISH检测备用。
2)、杂交:将要检测的标本处理好后，加入上述制备的荧光标记探针组杂交混合液，2微升/片，加上规格为12 X 12_普通盖玻片，避免产生气泡，用封片胶封片，37°C干燥 20分钟，将玻片放入杂交仪中，78°C变性5分钟，37°C杂交过夜。
3)、洗片标本杂交过夜后，去除盖玻片，放入4X核酸杂交的缓冲液(Saline Sodium Phosphate EDTA, SSPE)中洗涤两次，梯度乙醇中脱水，放入己烷异丙醇(60 40) 混合液中10分钟,再放入异丙醇中5分钟，最后放入100%的乙醇中5分钟，晾干，用DAPI 复染，在荧光显微镜下观察检测结果。
4)、图像采集与分析在荧光显微镜下使用相应的滤光片观察不同的荧光信号，对信号进行拍照和计数。
本发明所具有的有益效果
I、目前市场上的荧光原位杂交法通常可同时检测1-2个基因；而本试剂盒可对同一样本甚至白血病单个细胞进行5种基因的同时检测，显著提高了检测能力和效率。
2、本试剂盒可用于对急性淋巴细胞白血病进行分子病理分型。
3、本发明试剂盒可直接用于中期或间期白血病细胞的荧光杂交法检测，而无需细胞培养和制备高质量的中期染色体片，操作大大简化。
4、本发明试剂盒也可用于其他种类白血病如慢性淋巴细胞白血病，急性髓系白血病，慢性髓系白血病等恶性血液疾病的研究和分子病理分型。
图I为使用多聚酶链式反应(PCR)对相应的BAC探针进行鉴定的I %琼脂糖凝胶电泳图。其中h⑶(human genomic DNA):人类基因组DNA用作阳性对照；PD (plasmid DNA) BAC探针DNA ；URC(unrelated control):无关BAC克隆对照。凝胶电泳结果显示,在用于检测AML1，PAX5，pl6，TEL和IKZFl基因的BAC克隆中能分别扩增出相应基因的DNA片段，并且这些DNA片段大小和设计相符合，而无关BAC克隆对照则呈现PCR阴性。
图2为用蓝色荧光素PromoFluor-415-aadUTP(PF415)标记含有IKZFl基因的BAC 克隆(表2)，将制作好的探针和正常人外周血单个核细胞进行杂交，再进行荧光显微镜镜检得到的图像。结果显示细胞核中呈现两个荧光素信号点，表明含IKZFl基因的BAC克隆可用于制作检测IKZFl基因的FISH探针。
图3是本发明将成功制作的Green-TEL(绿色荧光素标记的TEL探针)， PF555AML1 (红色荧光素标记的AMLl探针)，PF590-PAX5 (橙色荧光素标记的PAX5探针)， HyPer5-P16 (紫色荧光素标记的P16探针)，PF415-IKZF1 (蓝色荧光素标记的IKZFl探针)5 种探针(表I)混合后对正常人外周血单个核细胞进行杂交，再进行荧光显微镜镜检得到的图像。结果显示在同一细胞核中，每种探针得到两个清晰的荧光信号，5种探针一共获得10 个相应的荧光信号点，获得的图像清晰，信噪比高。
图4 是本发明成功制备的 Green-TEL, PF555AML1, PF590-PAX5，HyPer5_P16， PF415-IKZF1基因检测试剂盒对急性淋巴细胞性白血病TELAML1融合基因阳性患儿骨髓标本进行检测获得的图像。从获得的图像中可以看出急性淋巴细胞性白血病患儿的骨髓细胞中有许多(该病例有6种)的亚克隆种类(如表4所示)。
图5 是本发明成功制备的 Green-TEL, PF555-AML1，PF590-PAX5，HyPer5_P16， PF415-IKZF1基因检测试剂盒对同一个急性淋巴细胞性白血病TEL-AMLl融合基因阳性患儿初诊和缓解后的骨髓细胞检测获得的图像。从获得的图像中可以看出该患儿骨髓细胞中的亚克隆种类发生的变化(如表5所示)。
具体实施方式
下列通过具体实施例对本发明作进一步说明，但不限定本发明的保护范围。实施例I =IKZFl基因探针的制备方法，包括如下步骤
I.引物设计克隆筛选=IKZFl基因位于人7号染色体短臂12.3-12.2区段(7pl2. 3-pl2. 2),检索 UCSC genome browser, NCBI Clone Registry, Ensembl Genome Browser数据库所有含有IKZFl基因的克隆，用多聚酶链式反应筛选出包含有该基因的最优克隆，编号为RP11_663L2(如表2所示)。
2.克隆培养和鉴定购买克隆RP11_663L2(美国Invitrogen公司)，取8微升克隆菌液加到5毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37 °C振摇活化培养12小时；然后将菌液全部加入至450毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37 °C震摇培养12小时后收集菌液，菌液使用上游引物5 ’ -CGGAAATCTGAAAGGGAACTG-3 ’和下游引物 5 ’ -GATGAAGAGAATGGGCGTGC-3 ’ 进行 PCR 扩增，扩增条件为94° C 5 分钟；(“94。C 30 秒， 58-62° C 30秒，72° C 45秒”)循环35次72° C 10分钟，对扩增产物进行电泳验证。
3.基因探针制备
(I)对鉴定阳性的菌液，使用Qiagen公司的质粒提取试剂盒，按照说明书要求进行BAC克隆质粒的提取和纯化。用ND-1000超微量分光光度计对质粒DNA进行浓度和纯度 (260nm/280nm)测定。用EcoRl酶对目的DNA进行酶切，方法如下組分ftl入M:SS' χΛι盐缓冲液5微/Ιο. ι Io,mnEcoRl0,3微什加水个50微JT
37 °C孵育I小时，加入I微升的O. 5M的乙二胺四乙酸(Ethylene Diamine Tetraacetic Acid, EDTA) (PH 7. 5)终止反应，混勻，瞬时离心。
(2)沉淀DNA :加入步骤⑴总液体量1/10体积的3M乙酸钠。
(3)再加入步骤⑵总液体量2倍体积100 %乙醇(-20 V )，混匀，瞬时离心，_70°C，沉淀约2小时。离心14000rpm，4°C，20分钟，用枪尖小心吸弃上清，加入100微升70%乙醇(4°C )，混匀，离心14000rpm，4°C，15分钟。用枪尖小心吸弃上清，干燥沉淀10 分钟，用10微升的IOmM的Tris-HCl (PH8. 5)重悬后在振荡器上连续震荡至少5小时，转速 800rpm,将溶解好的DNA放在4°C保存直至连接反应。
(4)连接反应
采用切口平移法对酶切好的DNA进行荧光素标记，对IKZFl基因采用 PromoFluor-415-aadUTP荧光素标记，PF415-IKZF1 (蓝色)探针标记方法如下
取避光的EP管，先加入水，最后加入DNase I (10纳克/微升)和DNA polymerase I (10单位/微升，酶始终放在冰盒或冰上)按如下反应体系加液
权利要求
1.一种检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物，其特征在于该基因探针组合物包括TEL基因探针，AMLl基因探针，PAX5基因探针，P16基因探针和IKZFl基因探针。
2.根据权利要求I所述的基因探针组合物，其特征在于所述基因探针组合物包括 TEL 基因探针RP11-654E9(UCSC genome browser)； AMLl 基因探针RP11-77G18(UCSC genome browser)； PAX5 基因探针RP11-243F8(UCSC genome browser)； P16 基因探针RP11-97A22(UCSC genome browser)；IKZFl 基因探针RPl 1-663L2(UCSC genome browser)
3.根据权利要求I或2所述的基因探针组合物，其特征在于所述TEL基因探针、AMLl基因探针、PAX5基因探针、P16基因探针和IKZFl基因探针均为经过荧光素标记的探针。
4.权利要求1-3任一项所述基因探针组合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤 1)、克隆筛选检索UCSC genome browser, NCBI Clone Registry, Ensembl GenomeBrowser数据库分别含有TEL、AML1、PAX5、P16、IKZFl基因的所有细菌人工染色体(BAC)克隆，并对这些克隆进行筛选，选出最佳的克隆； 2)、克隆培养和鉴定按照筛选确定的克隆编号购买BAC克隆(美国Invitrogen公司)，取5-10微升克隆菌液加到3-5毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37°C振摇活化培养8-16小时；然后将菌液全部加入至400-500毫升含氯霉素抗性的LB液体培养基中，37°C震摇培养8-16小时；对TEL、AML1、PAX5、P16、IKZFl的BAC克隆用相对应的基因引物进行多聚酶链式反应扩增，用1-2%的琼脂糖凝胶电泳对产物进行分析，从而完成待选克隆的分子鉴定； 3)、基因探针的制备和鉴定获得目的基因的克隆后，提取大量DNA，酶切DNA后采用缺口平移的方法对酶切后的DNA进行荧光素标记，再对TEL，AML1，PAX5，P16和IKZFl基因探针组合后进行沉淀和浓缩，将制作好的探针组合物溶解到含有50%去离子甲酰胺的杂交缓冲液中，即得荧光标记探针组杂交混合液，采用正常人外周血单个核细胞甩片进行探针鉴定。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述克隆筛选步骤中含TEL基因最优的克隆，编号为RP11-654E9基因最优的克隆，编号为RP11-77G18 ;含有PAX5基因最优的克隆，编号为RP11-243F8 ;含有P16基因最优的克隆，编号为RP11-97A22 ;含有IKZFl基因最优的克隆，编号为RP11-663L2。
6.根据权利要求4或5所述的方法，其特征在于克隆培养和鉴定步骤中使用的引物序列为 TEL 基因探针上游引物 5’ -TTTGGATGAAGAGCCTCGTTGTG-3’ 和 下游引物 5’ -GCGTGATATTGCCGAGATTTGC-3’ ； AMLl 基因探针上游引物 5’ -CCAAGAGGATTCATAGTCACGGG-3’ 和 下游引物 5’ -TCCTTGCCCTTACTGACCTTCC-3’ ； PAX5 基因探针上游引物 5’ -GATCCTTCCAGCTTGGTCTCC-3’ 和 下游引物 5’ -GGCTGAACGTGTATGTCTTCCC-3’ ； P16 基因探针上游引物 5’ -CTTCCTGGACACGCTGGT-3’ 和下游引物 5’ -AGTCTTCATTGCTCCGCAGT-3’ ； IKZFl 基因探针上游引物 5’ -CGGAAATCTGAAAGGGAACTG-3’ 和 下游引物 5’ -GATGAAGAGAATGGGCGTGC-3’。
7.一种急性淋巴细胞性白血病荧光原位杂交检测试剂盒,其特征在于包括权利要求1-3任一项所述基因探针组合物。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于所述试剂盒还包括杂交缓冲液。优选地，所述的基因探针组合物溶解在杂交缓冲液中，即荧光标记探针组杂交混合液，更优选地，TEL基因探针的浓度为4ng/l·! 1，AMLl基因探针的浓度为4ng/l·! 1，PAX5基因探针的浓度为4ng/l·! 1，P16基因探针的浓度为4ng/l·! 1，IKZFl基因探针的浓度为4ng/l·! I。
9.根据权利要求8所述的试剂盒，其特征在于所述杂交缓冲液的组分包括50%的去离子甲酰胺，2XSSC和O. I克/毫升的硫酸葡聚糖。
10.权利要求7-9任一项所述试剂盒在急性淋巴细胞白血病荧光原位杂交检测中的应用。
全文摘要
本发明涉及一种检测急性淋巴细胞性白血病的基因探针组合物及试剂盒，该基因探针组合物包括TEL基因探针，AML1基因探针，PAX5基因探针，P16基因探针和IKZF1基因探针。本发明的另一目的是提供了一种急性淋巴细胞性白血病荧光原位杂交检测试剂盒，该试剂盒包括上述基因探针组合物。本发明试剂盒可对同一样本甚至白血病单个细胞进行5种基因的同时检测，显著提高了检测能力和效率。
文档编号C12N15/11GK102978279SQ20121036922
公开日2013年3月20日 申请日期2012年9月27日 优先权日2012年9月27日
发明者程涛, 竺晓凡, 胡林萍, 张丽, 缪为民 申请人:中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)