专利名称：结缕草耐盐性主效基因位点qLF-1的分子标记方法
技术领域：
本发明提供了结缕草耐盐主效基因位点qLF-Ι的分子标记方法，属于分子遗传学领域，专用于结缕草耐盐新品种选育和种质资源的利用。背景技术：
土壤盐碱化是一个世界性的问题，全世界盐碱地面积近9.6 X 108hm2，我国有盐溃土3.47X10Thm2，相当于耕地面积的1/3。随着滨海盐碱地区的开发和园林绿化的需要，对草坪草的耐盐性提出越来越高的要求，结缕草属植物作为一种重要的草坪草，培育优质耐盐的结缕草属植物新品种是一项非常重要的任务。前期研究结果表明，与其它草坪草相比，结缕草属植物具有较强的耐盐性，但结缕草属内的不同种以及同一种的不同种源间的耐盐性存在较大的遗传变异。因此要选择一种优质耐盐的结缕草进行盐碱地绿化，耐盐性鉴定是一项非常重要的工作。目前，关于结缕草属植物耐盐性的鉴定均是通过水培法或土培法进行的，虽然这两种方法是区试之前，最直接最有说服力的耐盐性鉴定方法，但是通过以上两种方法进行耐盐性鉴定需要非常大的工作量，费时费力，且容易受环境的影响。当从大批量材料中筛选耐盐材料时有相当的困难。使结缕草耐盐性育种进程受到很大影响。遗传研究结果表明结缕草的耐盐性存在主效基因位点(郭海林等.结缕草(ZoFia 耐盐性的遗传分析.植物遗传资源学报，2012，13 (5): 733-738.)。因此利用分子生物学的手段，通过构建结缕草属植物的遗传图谱，并对其耐盐性的主效基因位点(Quantitative Trait Loci, QTL)进行分析,找到与耐盐性主效QTL紧密连锁的分子标记对品种的耐盐性进行鉴定，将大大地节约成本，提高育种和选择效率。三
发明内容
技术问题:本发明针对上述情况，提供一种结缕草耐盐主效基因位点qLF-Ι的分子标记方法，通过检测这些耐盐性主效基因位点连锁的分子标记，可以预测结缕草的耐盐性强弱，提高耐盐结缕草的选择效率。技术方案:
用标记引物Mel2Eml的左端引物序列5’ -TGAGTCCAAACCGGTAG-3’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’
对结缕草叶片分离的DNA进行扩增，如果能扩增出180bp DNA片段，则标志着结缕草耐盐主效基因位点qLF-Ι的存在；
或标记引物Me5Eml的左端引物序列5 ’ -TGAGTCCAAACCGGTGC-3 ’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’
对结缕草叶片分离的DNA进行扩增，如果能扩增出315bp的DNA片段，则标志着结缕草耐盐主效基因位点qLF-Ι的存在，该主效基因位点位于第4连锁群的36.28cM处，利用mapQTL5.0软件测得对结缕草耐盐性的贡献率为13.1%。有益效果:
本发明所提供的结缕草耐盐主效基因位点的分子标记方法，其有益效果在于:通过本发明在国际上首次公开了结缕草耐盐主效基因位点私A-1的存在，该主效基因位点位于第4连锁群的36.28cM处，利用mapQTL5.0软件测得对结缕草耐盐性的贡献率为13.1%。通过与耐盐主效基因位点相关联的分子标记Me5Eml-315，Mel2Eml-180对结缕草的耐盐性进行鉴定，可以克服水培法和土培法易受环境影响，工作量大等缺点，特别是对大批量种源材料或者杂交后代进行耐盐性鉴定时将表现出明显的优势，大大减少人力物力的浪费，提闻育种和选择效率。
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图1:结缕草耐盐性QTL连锁群定位分析示意图，其中:包含QTL的连锁区段被显示，左侧为标记之间的距离(CM)，右侧为标记名称。具体实施例方式 (一)结缕草Fl耐盐分离群体的构建与耐盐性鉴定
对结缕草耐盐种源材料Z105(Z.耐盐系数为0.72)和敏盐种源材料Z061 (Z
耐盐系数为0.14)(均为公知公用品种,见参考文献:李亚，耿蕾，刘建秀.中国结缕草属植物抗盐性评价.草地学报，2004，12(1):8-11, 16.)通过控制授粉法进行杂交育种，获得Fl分离群体，包括120个Fl个体。通过水培法(参考文献:陈静波，阎君,姜燕琴,郭海林,张婷婷,陈宣,刘建秀.暖季型草坪草优良选系和品种抗盐性的 初步评价.草业学报，2009，18(5):107-114.)对两亲本及其Fl群体进行耐盐性鉴定，实验在玻璃温室进行，具体采用盐度逐渐增加的方法，以最终盐浓度达到20g/L维持I个月后统计盐胁迫下不同材料的叶片枯黄率，进行耐盐性评价。耐盐性鉴定结果表明在盐处理过程中，所有材料的处理和对照表现出明显的差异，在盐处理下，结缕草属植物生长速度下降，叶片出现枯黄现象，但不同材料的耐盐性也表现出明显的差异(表1)，叶片枯黄率的统计结果表明，F1群体的叶片枯黄率变异范围为109Γ98.33%,平均为50.39%,变异系数为40.50%,母本Z105的叶片枯黄率为35%，父本Z061的叶片枯黄率为95%。表I杂交后代耐盐性鉴定结果
权利要求
1.结缕草耐盐性主效基因位点私的分子标记方法，其特征在于: 用标记引物Mel2Eml的左端引物序列5’ -TGAGTCCAAACCGGTAG-3’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’ 对结缕草叶片分离的DNA进行扩增，如果能扩增出180bp DNA片段，则标志着结缕草耐盐主效基因位点qLF-Ι的存在； 或标记引物Me5Eml的左端引物序列5 ’ -TGAGTCCAAACCGGTGC-3 ’和右端引物序列5’ -GACTGCGTACGAATTCAA-3’ 对结缕草叶片分离的DNA进行扩增，如果能扩增出315bp的DNA片段，则标志着结缕草耐盐主效基因位点qLF-Ι的存在，该主效基因位点位于第4连锁群的36.28cM处，利用mapQTL5.0软件测得对结缕 草耐盐性的贡献率为13.1%。
全文摘要
本发明提供了结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的分子标记方法，属于分子遗传学领域。对结缕草种源Z105与Z061杂交获得的F1家系的基因型和盐胁迫下的叶片枯黄率进行遗传连锁分析，获得结缕草耐盐主效基因位点qLF-1的分子标记。通过结缕草耐盐主效基因位点的分子标记来检测结缕草及其杂交后代中是否含有该主效基因位点，可预测其抗盐性水平，大大节约成本并提高结缕草耐盐性的选择效率。
文档编号C12Q1/68GK103114141SQ20131003627
公开日2013年5月22日 申请日期2013年1月31日 优先权日2013年1月31日
发明者郭海林, 刘建秀, 丁万文, 陈静波, 陈宣 申请人:江苏省中国科学院植物研究所