专利名称：甾体激素类物质重要中间体的11-α羟化反应制备方法
技术领域：
本发明属于生物工程转化技术领域，具体涉及一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法。
背景技术：
留体激素类物质是皮质激素药物的主要成分，皮质激素药物对机体起着非常重要的调节作用，具有很强的抗感染、抗过敏、抗病毒和抗休克等药理作用。我国是皮质激素原料药的出口大国，其中乙酸强的松占总产量的60%，我国自20世纪50年代至今一直采用黑根霉转化工艺，2%的投料量转化率为40% 50%，与国外生产水平80% 90%差距较大，因此开发新的高产菌种将有望从整体水平提高原料的利用率，产生巨大的社会效益和经济效益。目前国内对于留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法主要集中在化学法和生物法转化，化学法由于涉及到环境污染、反应过程危险、转化效率低等缺点，生物转化法由于其具有转化率较高、具有环境友好效果、反应过程易控制等优点而得到推广。目前新型霉菌对留体羟化反应的转化率较高，但存在转化周期长、易产孢子、菌体细导致抽滤、离心困难等不足。刘玲玲、杜大庆等人研究金龟子绿僵菌对留体底物11 一 a羟化反应的工艺，对甾体底物16a、17a-环氧黄体酮的羟化反应工艺进行了探索，研究工艺结果为:浓度为I
1.2 X 108个/ml的孢子液，接种量为0.8ml。培养基配比分别如下:一级葡萄糖3.0g/dL、玉米浆2.5g/dL、硫酸铵0.15g/dL、蚕蛹粉0.2g/dL，培养温度26 28°C，228r/min培养36h，15%接种量，接种二级，二级葡萄糖调整为3.5g/dL，其余同一级，继续培养至pH值降到最低点以前(20h左右)将发酵液稀释一倍之后投料，投料浓度2g/dL (吐温水溶液)，转化65h后结束发酵，转化率达70%以上。该工艺采用了天然培养基，生产成本较高，且工艺过程涉及到一级培养和二级培养，工艺复杂繁琐，转化率最高仅为73.2%。
发明内容
本发明针对以上现有11-a羟化反应制备技术存在转化率低、制备方法复杂、反应时间长、成本高等，通过研究添加生物催化剂或前体物，刺激新型霉菌更多的产生羟化酶，抑制别的酶产生，从而实现提 高转化率，缩短反应时间，减少杂质生成，且制备方法得到简化。本发明采用各成分清晰、成本低的合成培养基，相对于成分过于复杂、成本高的天然培养基，成本得到降低。本发明通过以下技术方案实现的:一种甾体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，将留体底物I投入含有霉菌种子的发酵培养基中发酵，在霉菌和催化剂作用下发生羟化反应，对留体底物I的11位、21位进行改造，得到具有11-a -羟基、21羟基的甾体激素类物质重要中间体II，
权利要求
1.一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于:将甾体底物I投入含有霉菌种子的发酵培养基中发酵，在霉菌和催化剂作用下发生羟化反应，对甾体底物I的11位、21位进行改造，得到具有11-a-羟基、21-羟基的甾体激素类物质 重要中间体
2.根据权利要求1所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述的硼酸盐为四硼酸钠、四硼酸钾、硼酸镁中的之一或它们的组合物。
3.根据权利要求1 2任一项所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述的霉菌为绿僵霉菌、木霉菌、赭曲霉菌、黄曲霉菌中的之一或它们的组合。
4.根据权利要求3所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述的发酵培养基成分(g/L):棉籽饼粉3 8，葡萄糖10 25kg，氯化钾0.02 0.15，硝酸钾0.5 3.0，磷酸二氢钾0.5 2.5，磷酸氢二钾1.0 4.0，硼酸盐0.1 10。
5.根据权利要求4所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述的硼酸盐为四硼酸钠、四硼酸钾、硼酸镁中的之一或它们的组合物。
6.根据权利要求5所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述留体底物I投入为发酵培养基中霉菌发酵生物量干重达0.5 6g/L时投入；所述留体底物I其投入量为在发酵培养基中初始浓度达I 8g/L。
7.根据权利要求1 2或4 6任一项所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述的留体激素类物质重要中间体II为地塞米松或倍他米松的中间体。
8.根据权利要求3所述的一种留体激素类物质重要中间体的11-a羟化反应制备方法，其特征在于，所述的留体激素类物质重要中间体II为地塞米松或倍他米松的中间体。
全文摘要
本发明涉及一种甾体激素类物质重要中间体的11-α羟化反应制备方法，该反应制备方法为将甾体底物Ⅰ投入含有霉菌种子的发酵培养基中发酵，在霉菌和催化剂作用下发生羟化反应，对甾体底物Ⅰ的11位、21位进行改造，得到具有11-α-羟基、21羟基的甾体激素类物质重要中间体Ⅱ。本发明利用硼酸盐催化剂提高反应速度，节省反应时间，降低发酵过程中空气的消耗量，同时能将转化率提高约5%；利用合成培养基代替天然培养基，降低成本减轻后续分离工段压力。
文档编号C12R1/67GK103146793SQ20131008110
公开日2013年6月12日 申请日期2013年3月14日 优先权日2012年12月19日
发明者王远秋, 朱荣, 谭桂莉 申请人:广西万德药业股份有限公司