检测融合基因atic-alk相对表达量的方法和寡核苷酸的制作方法

检测融合基因atic-alk相对表达量的方法和寡核苷酸的制作方法
【专利摘要】本发明公开了定量检测样本中ATIC-ALK融合基因相对表达量的方法和寡核苷酸，通过利用检测ATIC-ALK的上游引物ATIC-ALK-F、下游引物ATIC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe以及检测内参基因abl的上游引物abl-F、下游引物abl-R和探针abl-Probe，能够对样本中的ATIC-ALK融合基因相对表达量进行定量检测，将融合基因相对表达量作为一种中间的辅助手段，有助为人类间变性大细胞瘤患者寻找最佳的治疗方案。
【专利说明】检测融合基因ATIC-ALK相对表达量的方法和寡核苷酸
【技术领域】
[0001]本发明属生命科学和生物【技术领域】，涉及一种定量检测样本中融合基因ATIC-ALK相对表达量的方法和寡核苷酸，通过采用实时荧光定量PCR技术，能够对样本中的ATIC-ALK相对表达量进行定量检测。
【背景技术】
[0002]间变性大细胞淋巴瘤(anaplastic large cell lymphoma, ALCL),是非霍奇金淋巴瘤中的一种独立类型，由德国病理学家Stein等于1985年应用K1-1 (⑶30)抗体识别，常呈间变性特征，被命名为间变性大细胞淋巴瘤。REAL分类将B细胞表型者归为弥漫性大B细胞性淋巴瘤。目前，ALCL只包括T表型和Null (非T非B)表型。对ALCL确切的病理机制尚知之不多，约60%-85%左右ALCL病例表达间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphomakinase, ALK)融合蛋白，这是由于2号染色体上的ALK基因位点的畸变所致。最常见的是t(2 ；5) (p23 ;q35)而形成融 合基因NPM-ALK，它是由位于5号染色体上的核仁磷酸蛋白B23(NPM)基因与位于2号染色体的ALK基因相融合形成，表达的融合蛋白为NPM-ALK蛋白；最近尚有更多的ALK基因与其他基因通过染色体转位或者是染色体的倒转而形成的融合基因被发现，如t (I ；2) (q25 ;p23)所形成的TPM3-ALK基因，t (2 ；3) (p23 ;q21)产生的TFG-ALKs 基因，TFG-ALKL 基因和 TFG-ALKxL 基因，inv (2) (p23 ；q35)所形成的 ATIC-ALK基因，t (2 ；17) (p23 ;q23)形成的 CLTCL-ALK 基因及 t (X ；2) (qlI ;p23)形成的 MSN-ALK基因。
[0003]ALK基因位于染色体2p23位点，正常情况下人源的ALK可转录产生大小6222bp的mRNA,由29个外显子构成，编码1620个氨基酸序列200kD的I型穿膜蛋白ALK，该蛋白为一种受体酪氨酸激酶(receptor tyrosine kinase, RTK),是RTK胰岛素超家族的成员。完整的ALK具有典型的RTK三部分结构，即胞外区、亲脂性穿膜区和胞浆内酪氨酸激酶。据文献报道，ALK蛋白除在极少部分弥漫性大B细胞淋巴瘤中表达外，可在60%~85%的原发性系统性ALCL中表达，是原发性系统性ALCL相对特异的免疫表型特征。
[0004]受体型酪氨酸激酶间变性淋巴瘤激酶(Anaplastic lymphoma kinase, ALK)最早发现于间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)中，由2号及5号染色体易位所形成的融合蛋白质包含了 ALK的3’端胞内结构域，以及核磷蛋白(Nucleophosmin, NPM)的5’端的结构域。随后的研究发现，正常的ALK专一表达于神经系统中，如脑和神经索，尤其是新生儿的脑中。
[0005]基因ATIC位于2号染色体的长臂35的位置(2q35)。正常情况下人源的ATIC基因可转录产生大小2084bp的mRNA,由16个外显子构成。它所编码的蛋白为5-氨基咪唑-4-甲酸胺的核苷酸甲酸转移酶(5-aminoimidazole-4-carboxamide ribonucleotideformyltransferase/IMP cyclohydrolase,由 592 个氨基酸序列组成，分子量为 38kD,是一种调节细胞周期的双功能蛋白，催化嘌呤合成的最后两个途径。该蛋白的N端结构具有催化磷酸氨基咪唑甲酰胺甲酰转移的作用，C端结构具有IMP环，包含核定位信号以及二聚体结构域，可以产生大的同源二聚体及异源二聚体。该蛋白还与前核糖体颗粒运输及核糖体生物发生，调节细胞分裂、DNA修复、转录和基因组稳定性相关联。
[0006]基因ALK在某些ALCL中的异常表达来源于不同的染色体易位。ALK易位的基因组断裂点多发生在16及17号外显子中间的内含子，而17-26号外显子编码ALK胞内结构域，每个易位产生一种不同的融合蛋白，由配偶体的5’端和ALK酪氨酸激酶结构域3’端融合得到。大多数情况下，5’端的配偶体具有可以形成同源或异源二聚体的结构域，使得ALK激酶结构域交互磷酸化，相互作用增强并且使多种下游蛋白质磷酸化。基因ATIC的5’端与ALK的3’端融合，导致ATIC的氨基端与ALK梭基端的酪氨酸激酶增高，使其功能近似原癌蛋白质，这些融合蛋白质定位在不同的亚细胞区域上，因此可能导致不同的细胞功能改变。
[0007]大约10-20%ALK阳性的ALCL表达ATIC-ALK，它是由染色体inv (2) (p23)和酪氨酸激酶功能区融合。ATIC对ATIC-ALK融合蛋白发挥转化功能非常重要，缺乏ATIC 二聚体结构域的突变体小能转化细胞，提示二聚化作用是信号传递的关键因素。转基因模型小鼠的研究结果显示ATIC-ALK可导致恶性的淋巴瘤。
[0008]正常情况下ALK只在神经系统中表达。人体中ALK基因表达量随着大脑的发育成熟而下降，成熟大脑组织中的量很低，表达存在一定的区域性；其它系统尤其是造血系统中未发现ALK的表达。ALK基因在绝大多数非造血系统肿瘤和正常组织中缺乏表达，表明ALK蛋白的分布范围是极其狭窄的。ALK蛋白是ALCL重要的分子标志物，在ALCL的诊断中具有很高的价值。
[0009]许多学者认为ALCL患者预后与其染色体是否发生易位有关。在儿童和年青患者的侵袭性NHL中，ALK阳性系统性ALCL治愈可能性最大，预后优于任何其他形式的外周T细胞淋巴瘤。ALK阳性和ALK阴性ALCL之间预后的差异性首先由Shiota等报道，他们指出，ALK阳性病例的5年生存率(79.8%)远好过ALK阴性病例(32.9%),P<0.01。fcunangeloFalini等对78例ALCUALK阳性53例，ALK阴性25例)患者预后统计显示，ALK阳性病例中有77.3%获得完全缓解，15.0%获得了部分缓解，缓解率达到92.3%，同时4例(7.7%)对化疗耐受；ALK阴性病例中有56.0`%获得完全缓解，28.0%获得了部分缓解，缓解率达到84.0%，同时4例(16.0%)对化疗耐受；所有病例中位生存年领为2.1年(0.07年-13.17年)，ALK阳性病例总生存率(71.0%±6.0%)远好过ALK阴性病例(15.0%±11.0%)，P〈0.0007。ALK阳性病例10年无病生存率(82.0%±6.0%)也远好过ALK阴性病例(28.0%±14.0%), Ρ〈0.0001。Randy D等研究也显示ALK阳性ALCL病例的5年生存率(93.0%)远好过ALK阴性ALCL病例(37.0%)，Ρ〈0.00001。众多研究表明有ALK融合基因的ALCL病例的预后明显好于阴性病例，但确切的机制倘不清楚，但有一点是可以肯定的，就是ALK阳性的ALCL的预后明显好于ALK阴性病例，因此对于临床诊断来说很有必要检测ALCL中有无ALK融合基因。目前，染色体易位和ALK的表达已经被WHO规定为ALCL的临床诊断中间指标之一。
[0010]目前临床上已经将ATIC-ALK融合基因作为动态评估患者病情及预后的辅助方法中的一种。常用的检测融合基因的技术有荧光原位杂交(FISH)、逆转录PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR(RQ-PCR)等方法。FISH法是现今经典的融合基因检测方法，结果较为直观，具有较高的检测结果准确性，而且对于融合基因表达量低的样本具有较高的检出率，杜绝了微小残留漏检现象，提高了检测精度。但FISH需要花费大约2天时间，试剂种类繁多，方法繁琐，步骤多导致的各种误差，还存在环境因素对结果产生的不确定性，且结果需经验丰富的专业人士来判读，结果判读存在较大的主观性。而单纯RT-PCR法则为终点定量，无法对起始模板量进行准确的估算。此外，由于砷剂及全反式维甲酸的应用，急性早幼粒细胞白血病(APL)治疗效果得到很大的提高，微小残留是其复发的主要原因，因而急需一种高敏感性、高特异性、高自动化程度、污染控制好的方法来对融合基因mRNA残留进行检测。
[0011]实时荧光定量PCR技术(real time quantitative PCR, RQ-PCR)具有较高的灵敏度和特异性，而且能对扩增产物进行实时检测。常见的实时荧光定量PCR技术有SYBRGreen I染料法,双探针杂交法以及Taqman探针法等。其中SYBR Green I由于采用非饱和染料，对于任何DNA双螺旋结构都能够产生非特异性结合，必须通过观察溶解曲线来判断其特异性，因而特异性不理想；双探针杂交法由于使用了 2条探针，尽管特异性非常好，但是成本过于昂贵。而Taqman探针法,采用I条Taqman探针,利用报告基团、淬灭基团的相互作用，既保证了反应的特异性，同时很好地控制了成本，该法综合生物学、酶学和荧光化学于一体，从扩增到结果分析均在PCR反应管封闭状态下进行，解决了 PCR产物污染而导致假阳性的问题，同时也提高了敏感度，其结果用拷贝数表示，实现了对PCR产物的准确定量，易于统一标准，与定性PCR技术相比，具有特异度好，灵敏度高，线性关系好，操作简单，自动化程度高、防污染，有较大的线性范围等优点，而且也能够满足ATIC-ALK融合基因mRNA微量残留的检测，被认为是目前首选检测方法，用于评价治疗效果、预测预后。对于大量样本，尤其是高危人群的的筛查具有极大的现实意义。因此本发明采用实时荧光PCR技术结合Taqman探针法应用于ATIC-ALK融合基因的检测。

【发明内容】

[0012]本发明设计了检测ATIC-ALK融合基因的寡核苷酸，所述寡核苷酸包括检测AT IC-ALK的上游引物AT IC-ALK-F、下游引物AT IC-ALK-R和探针AT I C-ALK-Probe以及检测内参基因Ab I的上游引物ab 1-F、下游引物ab 1-R和探针ab 1-Probe，采用荧光定量PCR技术，利用双标准曲线的方法，分别构建内参基因Abl和目的基因ATIC-ALK的定量标准曲线，检测ATIC-ALK相对于内参基因的表达量。通过调整两个基因的引物探针比例，以及PCR反应条件，使扩增效率和速率均达到最佳。
[0013]本发明提供用于定量检测ATIC-ALK融合基因相对表达量的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括检测所述融`合基因的上游引物ATIC-ALK-F、下游引物ATIC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe，其序列为:
[0014]ATIC-ALK-F:ACGCTCGAGTGACAGTGG
[0015]ATIC-ALK-R:CTACAACCCCAACTACTGCT
[0016]ATIC-ALK-Probe:FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA ；以及检测内参基因
[0017]Abl的上游引物abl-F、下游引物abl_R和探针abl-Probe，其序列为:
[0018]abl-F:GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG
[0019]abl-R:ATGATATAGAACGGGGGCTC
[0020]abl-Probe:FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。
[0021]进一步地，ATIC-ALK-F:ATIC-ALK-R:ATIC-ALK-Probe的使用浓度比为 2:2:1。
[0022]进一步地，abl-F、abl-R和 abl-Probe 的使用浓度比为 2:2:1。
[0023]本发明还提供一种定量检测ATIC-ALK融合基因相对表达量的方法，包括:
[0024](I)提取样本中的RNA ；[0025](2)将(I)提取出的RNA逆转录为cDNA，并将所产生的cDNA加入到反应管中；
[0026](3)加入检测内参基因Abl的上游引物abl-F、下游引物abl-R和探针abl-Probe ；
[0027](4)加入检测所述融合基因的上游引物ATIC-ALK-F、下游引物ATIC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe ；
[0028](5)进行PCR扩增反应；
[0029](6)计算所述融合基因的相对表达量，其特征在于:
[0030]ATIC-ALK-F:ACGCTCGAGTGACAGTGG[0031 ] ATIC-ALK-R:CTACAACCCCAACTACTGCT
[0032]ATIC-ALK-Probe:FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA
[0033]abl-F:GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG
[0034]abl-R:ATGATATAGAACGGGGGCTC
[0035]abl-Probe:FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。
[0036]进一步地，所述PCR扩增反应条件为:95°C预变性Imin ；95°C 15s，58°C 35sec，40个循环。
[0037]本发明还提供一种定量检测ATIC-ALK融合基因相对表达量的试剂盒，其包括红细胞裂解液，TRIzol，氯仿，无水乙醇；检测体系PCR反应液；阳性对照品，阴性对照品和空白对照品，其中，所述检测体系`PCR反应液包括检测所述融合基因的上游引物ATIC-ALK-F、下游引物ATIC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe以及检测内参基因Abl的上游引物abl_F、下游引物abl-R和探针abl-Probe,其特征在于:
[0038]ATIC-ALK-F:ACGCTCGAGTGACAGTGG ；
[0039]ATIC-ALK-R:CTACAACCCCAACTACTGCT ；
[0040]ATIC-ALK-Probe:FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA ；
[0041 ] abl-F:GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG ；
[0042]abl-R:ATGATATAGAACGGGGGCTC ；
[0043]abl-Probe:FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。
[0044]进一步地，所述红细胞裂解液由NH4C1、NaHC03、EDTA 二钠和ddH20组成。
[0045]进一步地，所述阳性对照品为含ATIC-ALK基因的溶液；所述阴性对照品为不含ATIC-ALK基因的溶液；所述空白对照品为生理盐水或不加任何物质。
[0046]本发明的有益效果:本发明将实时荧光PCR技术结合采用Taqman探针，利用双标准曲线的方法，分别构建内参基因abl和目的基因ATIC-ALK的定量标准曲线，检测受试者体内ATIC-ALK的相对于内参基因的表达量。相比于以往的免疫组化方法和现今流行的AACT法，该试剂盒具有精度高，结果便于判读等优点。加之该方法将反应体系所需的引物、探针进行合理配比和优化，使实验条件达到最佳，从而省去了繁琐的条件摸索环节，大大提升了实验效率。该方法经测试特异性好，灵敏度高，操作简便。有助于临床上ACLC患者体内ATIC-ALK融合基因的微量残留检测，对于及时干预治疗避免血液学复发、调整治疗方案、评价治疗效果、预测预后、预防临床复发都具有重要辅助意义。
【专利附图】

【附图说明】
[0047]图1ATIC-ALK阳性结果图；[0048]图2ATIC-ALK阴性结果图。
【具体实施方式】
[0049]下面结合具体实施例和附图，进一步阐述本发明。应当注意的是，实施例中未说明的常规条件和方法，通常按照所属领域实验人员常规采用方法:譬如，奥斯柏和金斯顿主编的《精编分子生物学实验指南》第四版，或者按照制造厂商所建议的步骤和条件。
[0050]实施例1
[0051]检测ATIC-ALK融合基因的寡核苷酸和试剂盒
[0052]用于定量检测ATIC-ALK融合基因相对表达量的寡核苷酸，包括检测所述融合基因的上游引物AT IC-ALK-F、下游引物ATIC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe，其序列为:
[0053]ATIC-ALK-F:ACGCTCGAGTGACAGTGG
[0054]ATIC-ALK-R:CTACAACCCCAACTACTGCT
[0055]ATIC-ALK-Probe:FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA `；以及检测内参基因
[0056]Abl的上游引物abl-F、下游引物abl_R和探针abl-Probe，其序列为:
[0057]abl-F:GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG
[0058]abl-R:ATGATATAGAACGGGGGCTC
[0059]abl-Probe:FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。
[0060]一种检测样本中ATIC-AL`K融合基因相对表达量的试剂盒，将检测到的ATIC-ALK融合基因相对表达量用作辅助临床上人类ACLC早期预防、早期诊断的辅助性指标；还可以对高危人群进行较为准确的筛查。该试剂盒包括:
[0061]红细胞裂解液；TRIzol ;氯仿；无水乙醇；
[0062]检测体系PCR 反应液:ReverTra Ace qPCR RT Kit (T0Y0B0 公司)；THNDERBIRDProbe qPCR Mix (2X )、作为目的基因的ATIC-ALK上、下游引物各0.8uM、ATIC-ALK探针
0.4uM ;作为内参基因的abl上、下游引物各0.8uM、探针abl-probe0.4uM，其中，
[0063]ATIC-ALK-F:ACGCTCGAGTGACAGTGG ；
[0064]ATIC-ALK-R:CTACAACCCCAACTACTGCT ；
[0065]ATIC-ALK-Probe:FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA ；
[0066]abl-F:GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG ；
[0067]abl-R:ATGATATAGAACGGGGGCTC ；
[0068]abl-Probe:FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA ；
[0069]阳性对照品:含ATIC-ALK基因的溶液；
[0070]阴性对照品:不含ATIC-ALK基因的溶液；
[0071]空白对照品:生理盐水或不加任何物质。
[0072]实施例2
[0073]本发明试剂盒的使用方法:
[0074](I)抽提血液中的组织RNA:在洁净的1.5ml的离心管中加入Iml红细胞裂解液，取抗凝血0.5ml混匀。室温静置IOmin ；5000rpm离心5min,弃上清，收集底部的细胞；再次加入0.5ml红细胞裂解液，5000rpm离心5min，弃上清，收集底部的细胞；向细胞中加入Iml TRIzol,反复吹打直至沉淀完全溶解，室温静止5min ;加入0.2ml氯仿，震荡均匀；14000rpm4°C离心lOmin，吸取上清层转移至另一新的离心管中；加入等体积的异丙醇，上下充分混匀，室温静置IOmin ;14000rpm4°C离心IOmin,弃上清，加入75%乙醇Iml,轻轻上下颠倒洗漆管壁；14000rpm4°C离心5min,弃乙醇；室温干燥10_15min,加入20ulRNase-free水溶解沉淀。其中，IOX红细胞裂解液配方为:NH4C182g，NaHC038.4g，EDTA 二钠 3.72g，加 ddH20 定容至 1000ml0
[0075](2)RNA逆转录:参考TOYOBO公司的Rever Tra Ace qPCR RT Kit试剂盒说明书，将RNA逆转录为cDNA。
[0076](3)试剂配置:按检测人份数配置检测体系PCR反应液各X ul，每人份23ul分装:
[0077]X=23ul反应液X (8份内参基因(标准曲线)+8份目的基因(标准曲线)+η份标本+1份阳性对照+1份阴性对照+1份空白对照)；
[0078](4)加样:取2ul (2)中的cDNA，加入到检测体系PCR反应液中；对阳性对照和阴性对照实验而言，直接加2ul阳性对照品和阴性对照品；对空白对照实验而言，加2ul生理盐水或不加任何物质；对空白对照实验而言，加2ul生理盐水或不加任何物质。
[0079](5)检测:检测在实时荧光PCR仪上进行，可用仪器包括ABI7300，7500 (美国Applied Biosystems 公司)等。反应条件:95°C预变性 Imin ；95°C 15s, 58°C 35sec40 个循环，突光信号于58°C 35sec时米集。
[0080](6)结果判断:将阈值线调整至背景信号及阴性扩增线以上，系统根据标准曲线和CT值自动计算出拷贝数。
[0081]I)内参阳性时，检测结果才认为有效；
[0082]2)判断标准:Ct<35,为结果阳性；35 ^ Ct ^ 38，为需要再次验证；Ct > 38，为结果阴性。
[0083]实施例3
[0084]临床标本检测
[0085]取送检ALCL患者抗凝血样本共10例，按实施例2所述方法提取组织RNAjf RNA逆转录为cDNA、配制试剂、加样和进行荧光定量检测。
[0086]对每份样本而言，取2ul经逆转录产生的cDNA，加入到检测体系PCR反应液中，同时做阳性、阴性、空白对照实验各一次，内参基因/目的基因的标准曲线各一份。一台96孔的荧光PCR仪可同时检测38份样本，每个样本2次重复。用荧光PCR仪检测，时间为100分钟。
[0087]实验结果与融合基因检测方法FISH法的报告结果相比较，确定样本检测的准确率。部分阳性结果如下表1:
[0088]表1:
[0089]
样本编号 Ifish法检测结果(%) |本方法检测结果(%)
61323.6523.60
6li2.372.40
【权利要求】
1.用于定量检测ATIC-ALK融合基因相对表达量的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括检测所述融合基因的上游引物ATIC-ALK-F、下游引物ATIC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe，其序列为:
ATIC-ALK-F: ACGCTCGAGTGACAGTGG
ATIC-ALK-R: CTACAACCCCAACTACTGCT ATIC-ALK-Probe: FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA ；以及检测内参基因 Abl 的上游引物abl-F、下游引物abl-R和探针abl-Probe，其序列为:abl-F: GCCGTGAAGACCTTGAAGGAGabl-R: ATGATATAGAACGGGGGCTCabl-Probe: FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。
2.如权利要求1所述的寡核苷酸，其特征在于，
AT IC-ALK-F: AT IC-ALK-R: AT I C-ALK-Pr ob e 的使用浓度比为 2:2:1。
3.如权利要求1至2之一所述的寡核苷酸,其特征在于，abl-F、abl_R和abl-Probe的使用浓度比为2:2:1。
4.一种定量检测ATIC-ALK融合基因相对表达量的方法，包括: (1)提取样本中的RNA； (2)将(I)提取出的RNA逆转录为cDNA，并将所产生的cDNA加入到反应管中； (3)加入检测内参基因Abl的上游引物abl-F、下游引物abl-R和探针abl-Probe； (4)加入检测所述融合基 因的上游引物ATIC-ALK-F、下游引物AT IC-ALK-R和探针ATIC-ALK-Probe ； (5)进行PCR扩增反应； (6)计算所述融合基因的相对表达量，其特征在于:
ATIC-ALK-F: ACGCTCGAGTGACAGTGG
ATIC-ALK-R: CTACAACCCCAACTACTGCT
ATIC-ALK-Probe: FAM-AGAGGACTATGTGGTGGTGTCCA-TAMRA
abl-F: GCCGTGAAGACCTTGAAGGAG
abl-R: ATGATATAGAACGGGGGCTC
abl-Probe: FAM-ACCTGGTGCAGCTCCTTGGG-TAMRA。
5.如权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR扩增反应条件为:95°C预变性Imin ；95°C 15s,58°C 35sec，40 个循环。
【文档编号】C12N15/11GK103757101SQ201310717956
【公开日】2014年4月30日 申请日期:2013年12月23日 优先权日:2013年12月23日
【发明者】王淑一, 李文静 申请人:成都艾迪康医学检测实验室有限公司