本发明涉及饲料添加剂领域，具体涉及一种复合微生态制剂及其应用。
背景技术：
水产品因为他的营养与药用价值被人们逐步深刻地认识，使得其市场和消费群体逐步扩大，需求量逐年增加。随着水产市场需求的增加，效果高效、全面的水产饲料添加剂成为现代水产养殖高产的催化剂。但现在水产饲料添加剂产品存在效果差、疗效单一的问题：部分水产饲料添加剂产品只添加益生菌或维生素，这些产品只针对改善水质或提供营养物质起作用，养殖企业要想全面的改善水产动物的养殖必须大量购买各种单一产品进行复配。由于产品性能和不同厂家的产品质量不一，产品复配的效果往往差强人意。因此针对水产养殖中急需解决的几大问题，如体重增长过慢、水产动物抗应激能力差、免疫力低和饲料利用率低等问题，有针对性的研制复合的微生态制剂，可以有效地解决水产养殖中出现的各种问题，是现在水产养殖业所急需的高效、全面的水产饲料添加剂产品。
技术实现要素：
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种复合微生态制剂及其应用。
为了实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：
一种复合微生态制剂，其特征包括益生菌、有机酸、维生素和寡糖。其中益生菌总活菌数≥1×109cfu/g，有机酸含量占总重量的10％～30％，寡糖含量占总重量的1％～10％，维生素含量占总重量的5％～30％。
优选的，所述有机酸含量占总重量的15％～25％，寡糖含量占总重量的3％～8％，维生素含量占总重量的10％～20％。。
进一步的，作为优选，有机酸含量占总重量的15％，寡糖含量占总重量的5％，维生素含量占总重量的10％。
本发明的复合微生态饲料添加剂，所述益生菌为地衣芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌、酿酒酵母中至少一种。
本发明的复合微生态制剂，所述有机酸为柠檬酸、富马酸、苹果酸中至少一种。
本发明的复合微生态制剂，所述维生素为维生素C、维生素E、维生素A中至少一种。
本发明的复合微生态制剂，所述寡糖为甘露寡糖、果寡糖、低聚壳聚糖中至少一种。
在一些实施方案中，本发明以饲喂基础日粮作为对照，对饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮和单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的基础日粮后，对海参、南美白对虾和大菱鲆分别养殖42天体重增长率进行检测，结果显示饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮后，可显著提高海参、南美白对虾和大菱鲆的体重增长率，且比单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的效果显著。表明本发明所述的复合微生态制剂能有效提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物提高体重增长方面的协同增效作用。
在一些实施方案中，本发明以饲喂基础日粮作为对照，对饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮和单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的基础日粮后，对南美白对虾和大菱鲆1h低溶氧应激力和海参24h低溶氧应激力进行检测，结果显示饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮后，可显著提高海参、南美白对虾和大菱鲆的抗应激能力，且比单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的效果显著。表明本发明所述的复合微生态制剂能有效提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物提高抗应激能力方面的协同增效作用。
在一些实施方案中，本发明以饲喂基础日粮作为对照，对饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮和单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的基础日粮后，海参、南美白对虾和大菱鲆养殖30天后使用致病菌攻毒的死亡率进行检测，结果显示饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮后，可显著降低海参、南美白对虾7天死亡率和大菱鲆14天死亡率，且比单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的效果显著。表明本发明所述的复合微生态制剂能有效提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物降低死亡率方面的协同增效作用。
在一些实施方案中，本发明以饲喂基础日粮作为对照，对饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮和单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的基础日粮后，对海参、南美白对虾和大菱鲆养殖30天饲料系数进行检测，结果显示饲喂含有本发明所述复合微生态制剂的基础日粮后，可显著降低海参、南美白对虾和大菱鲆饲料系数，且比单独使用益生菌、有机酸、维生素和寡糖的效果显著。表明本发明所述的复合微生态制剂能有效提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物提高饲料利用率方面的协同增效作用。
因此本发明还提供所述复合微生态制剂在水产动物提高体重增长率、提高抗应激能力、提高饲料利用率、降低水产养殖死亡率的应用。
进一步的，作为优选，所述水产为海参、南美白对虾和大菱鲆。
本领域技术人员可以理解，本发明所述益生菌均为具有生物活性的微生物。本发明所述复合微生态制剂可以制成兽药、饲料添加剂或营养补充剂单独使用，也可拌于水产动物饲料中直接喂食。
本发明还提供了一种微生物制剂包括上述复合微生态制剂。
本发明所述微生物制剂可以为固体制剂或液态制剂。
其中所述微生物固体制剂为益生菌菌粉、有机酸粉剂、维生素粉剂、寡糖粉剂与载体混合制成的粉末制剂或颗粒制剂。所述载体可以为沸石粉、麦饭石、凹凸棒石(粉)。
所述的液体制剂为益生菌菌液、有机酸溶液、维生素溶液、寡糖溶液的混合液。
本发明还提供了一种水产动物提高体重增长率、提高抗应激能力、提高饲料利用率、降低水产养殖死亡率的方法，将本发明所述复合微生态制剂按1:(100～500)的质量比例添加到养殖动物基础日粮中，添加后饲料中的总活菌数≥5.0×107cfu/g。
由上述技术方案可知，本发明提供了一种复合微生态制剂及其应用。本发明所述复合微生态制剂包括益生菌、有机酸、维生素和寡糖，其中所述益生菌总活菌数≥1×109cfu/g，有机酸含量占总重量的10％～30％，寡糖含量占总重量的1％～10％，维生素含量占总重量的5％～30％。优选的，所述有机酸含量占总重量的15％～25％，寡糖含量占总重量的3％～8％，维生素含量占总重量的10％～20％。进一步的，作为优选，有机酸含量占总重量的15％，寡糖含量占总重量的5％，维生素含量占总重量的10％。试验表明本发明所述复合微生态制剂具有提高体重增长率、提高抗应激能力、提高饲料利用率、降低水产养殖死亡率的作用。本发明所述复合微生态制剂可以制成兽药、饲料添加剂或营养补充剂单独使用，也可拌于水产动物饲料中直接喂食，应用范围广泛，具有良好的经济和社会效应。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为了进一步理解本发明，下面结合具体实施例对本发明进行详细阐述。如无特征说明，本发明所述芽孢杆菌与酿酒酵母均为本领域常规菌株，本发明所述有机酸、寡糖和维生素均为本领域常规原料，本领域技术人员可以通过常规渠道购买得到
实施例1：对水产动物体重增长率方面的影响
复合微生态制剂：枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g、柠檬酸含量占总重量的10％，维生素C占总重量的5％，甘露寡糖占总重量的1％。以上成分混合均匀，得到复合微生态制剂。
将制备的复合微生态制剂，按1:100的质量比例分别添加到海参、南美白对虾和大菱鲆基础日粮中，分别进行海参、南美白对虾和大菱鲆的养殖试验。
将海参、南美白对虾和大菱鲆随机分组，海参每组40头(10g±0.5g)，南美白对虾每组20尾(5g±0.2g)，大菱鲆每组20条(390g±11g)。每种试验动物分别分为6组，按照如下分组添加饲料养殖，每组设置3个重复。水产动物养殖分别在条件适宜的实验室中进行，试验使用的水族箱体积为0.05m×0.04m×0.03m。
Ⅰ组为基础日粮(对照组)；Ⅱ组为基础日粮中添加1％本发明的复合微生态制剂(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g、柠檬酸含量占总重量的10％，维生素C占总重量的5％，甘露寡糖占总重量的1％)；Ⅲ组为基础日粮中添加益生菌(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g)；Ⅳ组为基础日粮中添加0.1％的柠檬酸；Ⅴ组为基础日粮中添加0.05％的维生素C；Ⅵ组为基础日粮中添加0.01％的甘露寡糖。
试验处理方法：试验养殖42天，试验开始前，试验海参、南美白对虾和大菱鲆饥饿处理24h，称重，分别记录不同水产动物6组的初始总重量。试验结束后，试验海参、南美白对虾和大菱鲆饥饿处理24h，称重，分别记录对应水产动物6组的末总重量。增长率＝[末均重(g)－初均重(g)]/初均重×100％。试验结果如表1。
表1水产动物42天养殖增长率结果统计
注：**表示有极显著差异(P＜0.01)，*表示有显著差异(P＜0.05)
由表1结果可知，与对照组相比，各处理组水产动物42天养殖增长率均明显提高。且本发明的复合微生态制剂，与单独使用益生菌、柠檬酸、维生素C、甘露寡糖相比，在水产动物体重增长率方面存在显著差异。海参的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，体重增长率分别提高24.58％、4.81％、9.56％、4.20％、3.54％，且试验组Ⅱ高于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。南美白对虾的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，体重增长率分别提高31.19％、5.46％、2.45％、7.54％、6.40％，且试验组Ⅱ高于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。大菱鲆的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，体重增长率分别提高31.61％、8.18％、4.65％、6.39％、8.21％，且试验组Ⅱ高于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。通过实验结果可以说明本发明的复合微生态制剂提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物提高体重增长率方面的协同增效作用。
实施例2：对水产动物抗应激能力方面的影响
复合微生态制剂：枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g、柠檬酸含量占总重量的30％，维生素C占总重量的30％，低聚壳聚糖占总重量的10％。以上成分混合均匀，得到复合微生态制剂。
将制备的复合微生态制剂，按1:100的质量比例分别添加到海参、南美白对虾和大菱鲆基础日粮中，分别进行海参、南美白对虾和大菱鲆的养殖试验。
将海参、南美白对虾和大菱鲆随机分组，海参每组40头(10g±0.5g)，南美白对虾每组20尾(5g±0.2g)，大菱鲆每组20条(390g±11g)。每种试验动物分别分为6组，按照如下分组添加饲料养殖，每组设置3个重复。水产动物养殖分别在条件适宜的实验室中进行，试验使用的水族箱体积为0.05m×0.04m×0.03m。
Ⅰ组为基础日粮(对照组)；Ⅱ组为基础日粮中添加1％本发明的复合微生态制剂(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g、柠檬酸含量占总重量的30％，维生素C占总重量的30％，低聚壳聚糖占总重量的10％)；Ⅲ组为基础日粮中添加益生菌(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g)；Ⅳ组为基础日粮中添加0.3％的柠檬酸；Ⅴ组为基础日粮中添加0.3％的维生素C；Ⅵ组为基础日粮中添加0.1％的低聚壳聚糖。
试验处理方法：将海参、南美白对虾和大菱鲆分别试验性养殖处理30天后，将每试验组的海参、南美白对虾和大菱鲆分别放入10L的透明塑料桶中进行低溶氧胁迫试验。将塑料桶中放入6L海水，并用保鲜膜封住塑料桶口，停止充气，以维持低溶氧状况。观察、记录每组试验海参、南美白对虾和大菱鲆的存活情况，将心脏不再跳动的南美白对虾和大菱鲆判定为死亡，将漂浮的海参判定为死亡。试验统计1h后每组南美白对虾和大菱鲆的死亡数量，统计24h海参的死亡情况，计算水产动物低溶氧胁迫试验的死亡率。试验结果如表2。
表2水产动物抗应激能力检测结果统计
注：**表示有极显著差异(P＜0.01)，*表示有显著差异(P＜0.05)
由表2结果可知，与对照组相比，各处理组水产动物低溶氧胁迫死亡率均显著降低。且本发明的复合微生态制剂，与单独使用益生菌、柠檬酸、维生素C、低聚壳聚糖相比，在水产动物抗应激能力方面存在显著差异。海参的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，死亡率分别降低65％、15％、17.5％、15％、12.5％，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。南美白对虾的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，死亡率分别降低50％、10％、5％、10％、15％，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。大菱鲆的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，死亡率分别降低70％、15％、20％、10％、15％，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。通过实验结果可以说明本发明的复合微生态制剂提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物提高抗应激能力方面的协同增效作用。
实施例3：对水产动物攻毒死亡率方面的影响
复合微生态制剂：枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、苹果酸含量占总重量的15％，维生素E占总重量的10％，甘露寡糖占总重量的5％。以上成分混合均匀，得到复合微生态制剂。
将制备的复合微生态制剂，按1:200的质量比例添加到海参、南美白对虾和大菱鲆基础日粮中，分别进行海参、南美白对虾和大菱鲆的养殖试验。
将海参、南美白对虾和大菱鲆随机分组，海参每组40头(10g±0.5g)，南美白对虾每组20尾(5g±0.2g)，大菱鲆每组20条(390g±11g)。每种试验动物分别分为6组，按照如下分组添加饲料养殖，每组设置3个重复。水产动物养殖分别在条件适宜的实验室中进行，试验使用的水族箱体积为0.05m×0.04m×0.03m。
Ⅰ组为基础日粮(对照组)；Ⅱ组为基础日粮中添加1％本发明的复合微生态制剂(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、苹果酸含量占总重量的15％，维生素E占总重量的10％，甘露寡糖占总重量的5％)；Ⅲ组为基础日粮中添加益生菌(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g)；Ⅳ组为基础日粮中添加0.15％的苹果酸；Ⅴ组为基础日粮中添加0.1％的维生素E；Ⅵ组为基础日粮中添加0.05％的甘露寡糖。
试验处理方法：将海参、南美白对虾和大菱鲆分别试验性养殖处理30天后，对6组试验的水产动物分别注射等量相同浓度的致病菌，海参注射灿烂弧菌菌液，南美白对虾注射副溶血弧菌菌液，大菱鲆注射鳗弧菌菌液。观察各组海参和南美白对虾7天攻毒死亡率，大菱鲆14天攻毒死亡率。试验结果如表3。
表3水产动物攻毒死亡率结果统计
注：**表示有极显著差异(P＜0.01)，*表示有显著差异(P＜0.05)
由表3结果可知，与对照组相比，各处理组水产动物攻毒死亡率均显著降低。且本发明的复合微生态制剂，与单独使用益生菌、苹果酸、维生素E、甘露寡糖相比，在水产动物降低死亡率方面存在显著差异。海参的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，死亡率分别降低70％、15％、22.5％、12.5％、17.5％，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。南美白对虾的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，死亡率分别降低60％、10％、20％、5％、15％，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。大菱鲆的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，死亡率分别降低70％、15％、5％、15％、15％，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。通过实验结果可以说明本发明的复合微生态制剂提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物降低死亡率方面的协同增效作用。
实施例4：对大菱鲆养殖饲料系数方面的影响
复合微生态制剂：枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g、柠檬酸含量占总重量的10％，维生素c占总重量的30％，甘露寡糖占总重量的10％。以上成分混合均匀，得到复合微生态制剂。
将制备的复合微生态制剂，按1:500的质量比例添加到海参、南美白对虾和大菱鲆基础日粮中，分别进行海参、南美白对虾和大菱鲆的养殖试验。
将海参、南美白对虾和大菱鲆随机分组，海参每组40头(10g±0.5g)，南美白对虾每组20尾(5g±0.2g)，大菱鲆每组20条(390g±11g)。每种试验动物分别分为6组，按照如下分组添加饲料养殖，每组设置3个重复。水产动物养殖分别在条件适宜的实验室中进行，试验使用的水族箱体积为0.05m×0.04m×0.03m。
Ⅰ组为基础日粮(对照组)；Ⅱ组为基础日粮中添加1％本发明的复合微生态制剂(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g、柠檬酸含量占总重量的10％，维生素c占总重量的30％，甘露寡糖占总重量的10％)；Ⅲ组为基础日粮中添加益生菌(枯草芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、地衣芽孢杆菌活菌数5.0×109cfu/g、酿酒酵母5.0×107cfu/g)；Ⅳ组为基础日粮中添加0.1％的柠檬酸；Ⅴ组为基础日粮中添加0.3％的维生素c；Ⅵ组为基础日粮中添加0.1％的甘露寡糖。
试验处理方法：试验养殖30天，每天记录每组试验组的饲料投喂量。试验海参、南美白对虾和大菱鲆饥饿处理24h，称重，分别记录不同水产动物6组的初始总重量。试验结束后，试验海参、南美白对虾和大菱鲆饥饿处理24h，称重，分别记录对应水产动物6组的末总重量。饲料系数＝总摄食量(g)/[总末重(g)+死大菱鲆重量－总初重(g)]。试验结果如表4。
表4水产动物30天养殖饲料系数结果统计
注：**表示有极显著差异(P＜0.01)，*表示有显著差异(P＜0.05)
由表4结果可知，与对照组相比，各处理组水产动物30天养殖饲料系数均显著降低。且本发明的复合微生态制剂，与单独使用益生菌、柠檬酸、维生素c、甘露寡糖相比，在降低水产动物饲料系数方面存在显著差异。海参的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，饲料系数分别降低0.63、0.12、0.18、0.13、0.09，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。南美白对虾的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，饲料系数分别降低0.68、0.14、0.02、0.18、0.14，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。大菱鲆的试验组Ⅱ、试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ较试验组Ⅰ，饲料系数分别降低0.53、0.14、0.22、0.08、0.01，且试验组Ⅱ低于试验组Ⅲ、试验组Ⅳ、试验组Ⅴ、试验组Ⅵ之和。通过实验结果可以说明本发明的复合微生态制剂提高了益生菌、有机酸、维生素、寡糖对水产动物提高饲料利用率方面的协同增效作用。